水产品中硝基呋喃类代谢物残留量检测方案(浓缩仪)

智能文字提取功能测试中

水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 高效液相色谱法 2016-3-16 本文建立了高效液相色谱法测定水产品中的硝基呋喃类代谢物残留量的方法，与GB/T 20752-2006液相色谱-串联质朴法相比不仅降低了实验成本，适用于大部分实验室，同时增加了实验的重复性以及样品间的平行性。 1 实验原理 水产品中残留的硝基呋喃类代谢物用硝基呋喃类代谢物快速检测前处理试剂盒提供的试剂提取，经衍生化试剂衍生、固相萃取柱净化后，高效液相色谱紫外检测器检测，外标法定量。 2 样品处理 2.1 取样 鱼去鳞、去皮，沿脊背取肌肉；虾，去头、去壳，取肌肉部分；蟹、甲鱼等取可食用部分，样品切成小块后，打浆机打碎，均质混匀，备用。 本步骤使用仪器为天津恒奥科技内切式匀浆机HFJ-25，产品图片如下： 2.2 提取 准确称取已经打碎混匀的样品10g（精确到0.01g），置于50ml离心管中，先后加入提取剂1及10ml提取剂2，漩涡混合后于40℃摇床震摇30min，取出上清液，再加入10ml提取剂2，重复提取一遍，合并提取液于50ml离心管中。 本步骤使用仪器为天津恒奥科技多管漩涡混合器，型号为HMV-50A，以及恒温水浴摇床，型号为HWT-10C，图片如下： 2.3 衍生化 于装有提取液的离心管中加入衍生化试剂0.5ml及催化剂0.5ml，混匀。于40℃水浴摇床上震摇40min，取出后冷却至室温。 2.4 样品净化 取专用净化固相萃取小柱A（C18-CN）依次用5ml甲醇，5ml水活化后，加入衍生化后的溶液，以2-3ml/min正压淋洗，淋洗液流净后用5ml蒸馏水洗涤，挤干，弃去流出液。用8ml乙酸乙酯以2-3ml/min洗脱，接受洗脱液。将洗脱液全部加入净化柱B中（经2ml乙酸乙酯活化），接受全部流出液，在流出液中加入5ml异丙醇，混匀后50℃平行浓缩蒸发仪浓缩蒸干，残留物用1.0ml乙腈水溶液及2ml异辛烷充分溶解，震荡混匀，5000r/min离心分离，收上层后，再加2ml异丙烷离心，取下层乙腈水（30+70=V:V）层过滤膜供高效液相色谱仪测定。 本步骤使用仪器为恒奥公司数控固相萃取系统HSE-08A,支持正压洗脱，可准确设定流速，保证实验的准确性。浓缩过程中使用的仪器为恒奥平行浓缩蒸发仪HPE-12，该款仪器可以同时浓缩12个样品，保证样品间实验条件的平行性，同时可连接真空控制系统使用，实现真空度梯度控制，设置试验方法后无需操作人员看管，极大地提高了实验的自动化，节省试验时间以及人力资源。仪器图片如下： 以下为平行浓缩蒸发仪的性能实验如下： 浓缩效果：12管全部蒸干 一级回收率：90% 蒸程：15min 浓缩效果：12管全部蒸干 一级回收率：95% 蒸程：15min 平台：45℃，上盖：60℃，冷凝水：7℃，转速：280r/min，乙醇吸收，隔热垫为厚垫 浓缩效果：12管全部蒸干 一级率：95 蒸程：30min 从以上数据可以看出，真空控制系统与传统旋转蒸发仪相比大大提高了工作效率，同时保证了样品处理间的平行性，满足检测机构需要检测大量样品的需求，同时溶剂回收率高，环境污染小。 3 液相色谱条件 色谱柱：CN柱，250mm*4.6mm，粒度5um； 流动相：乙腈（50ml）+异丙醇（100ml）+乙酸乙酯（50ml）+冰乙酸（1ml）+0.05%庚烷磺酸钠（800ml）； 流速：1.0ml/min； 柱温：25℃； 检测波长：280nm 进样量：50ul。 3.1 绘制工作曲线 标准品：氨基脲（SEM）、3-氨基-唑烷基酮（AOZ）、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-乙内酰脲（AHD）：≥99%。 标准贮备溶液：准确称量AMOZ、AHD、AOZ、SEM个10mg，用甲醇分别定容于100ml容量瓶中，配置成100ug/ml的标准贮备液。 取标准贮备液用甲醇稀释成20ug/ml混合标准溶液，移取该混合标准溶液1ml于试管或鸡心瓶中，再加入0.2ml衍生化试剂混匀，置于40℃摇床震摇或超声30min，取出，加2ml异丙醇，混匀后于35℃水浴中氮吹浓缩至干，残留物用2ml甲醇充分溶解，留作10ug/ml衍生化溶液。 取10ug/ml衍生化标准液用乙腈水溶液稀释，并且使标准溶液浓度为 10ug/kg、20 ug/kg、50 ug/kg、100 ug/kg、200 ug/kg，用高效液相色谱仪测定，得出标准工作曲线。 3.2 色谱测定 根据样液中AMOZ、AHD、AOZ、SEM的含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中的AMOZ、AHD、AOZ、SEM响应值均应在仪器的检测线范围内。在色谱条件下，AMOZ、AHD、AOZ、SEM的保留时间约为AMOZ 13.8min、AHD 17.2min、AOZ 20.7 min、SEM 22.0 min。 3