食用油中极性组分检测方案(制备液相色谱)

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三泰科技快速纯化产品 在GB5009.202—2016《食用油中极性组分（PC）的测定》的应用 一、GB5009.202—2016食用油中极性组分(PC)的测定 1 范围 本标准规定了食用动植物油脂中极性组分(PC)的测定方法。 本标准适用于各类食用动植物油脂中的极性组分(PC)含量的测定。 2 第一法 制备型快速柱层析法原理 通过制备型快速柱层析技术的分离，油脂试样被分为非极性组分和极性组分两部分，其中非极性组分首先被洗脱并蒸干溶剂后称重，油脂试样扣除非极性组分的剩余部分即为极性组分。 二、实验部分 2.1 食用油分离 精密称取1g食用油，用5ml石油醚将食用油样品充分溶解为澄清液，用10ml注射器吸取全部样品液体，快速注射进正相硅胶分离柱的入口处。按表1参数进行食用油组分的分离。 2.2实验参数设置 实验参数同步《GB 5009.202-2016 食用油中极性组分（PC）的测定》的食品安全国家标准方法，配合常州三泰科技标准型快速分离正相硅胶柱进行制备。 三泰科技SepaBean® machine快速液相制备色谱系统 三泰科技SepaFlash® 快速液相制备色谱柱 表1 制备参数设置 仪器 SepaBean® machine 分离柱 标准型快速分离柱，预填优质正相硅胶，40-63 µm， 60 Å （订货号：S-8101-0025 ） 流动相 A：石油醚：乙醚=87：13 B：丙酮：乙醚=40：60 进样量 1g/5ml石油醚 流速 25ml/min 波长 200nm 梯度 时间 溶剂B% 0 0 8 0 9 100 15 100 2.3 分离结果 食用油中非极性组分与极性组分在三泰科技（常州）标准型快速分离柱上分离的色谱图见下图1： 图1 食用油在三泰科技（常州）标准型快速分离柱上分离的色谱图 （备注：第一个峰标非极性组分，第二个峰标极性组分） 相比较GB5009.202—2016第二法柱层析法，第一法制备型快速柱层析法拥有更为高效、准确、一致性稳定的特点：自动稳定液体输送配比、自动化简易操作、在线紫外监测系统、自动收集系统、商业化预装符合国际标准的稳定性高的分离柱。 附：GB5009.202—2016部分实验步骤选取 5.2 快速分离制备色谱柱的活化 以非极性组分洗脱液为流动相对制备型快速柱层析系统的流动相管路进行润洗，排尽流动相管路内的气体。取1支食用油极性组分快速分离制备色谱柱，连接入制备型快速柱层析系统的流动相管路，以非极性组分洗脱液为流动相，25mL/min的流速冲洗快速分离制备色谱柱10min，使快速分离制备色谱柱完全被溶剂所浸润,弃去冲洗液。 5.3 非极性组分的分离 取1只干净的10mL玻璃烧杯，准确称取1g(精确到0.001g)的油脂样品(m )(5.1)，然后用5mL的石油醚将油脂样品充分溶解，成为上样液。将快速分离制备色谱柱的上端与流动相管路断开，用1支干净的10mL一次性塑料注射器吸取全部上样液后，快速注射入快速分离制备色谱柱的上端入口处，再用3mL的石油醚洗涤10mL玻璃烧杯内残留的上样液，洗涤液也用同一支10mL一次性塑料注射器全部吸取后，注射入快速分离制备色谱柱的上端入口处，再将快速分离制备色谱柱的上端与流动相管路连接，按以下参数进行非极性组分的分离： a) 流动相：非极性组分洗脱液； b) 流动相流速：25mL/min； c) 部分收集器：以1000mL小口玻璃收集瓶为收集容器，从洗脱开始以全收集模式进行收集； d) 紫外检测器监测波长：200nm； e) 启用实时监测系统，获得洗脱色谱图； f) 溶剂温度控制系统温度：10℃； g) 洗脱时间：11min。 进行制备型快速柱层析操作时，实验的环境温度应不高于25℃。 5.4 非极性组分的收集、浓缩和定量 取1个干净的500mL烧瓶放入103℃±2℃的恒温干燥箱内，烘1h左右，然后取出立即放入玻璃干燥器内冷却至室温，然后称重(m0，精确至0.001g)。根据5.3分离操作所获得的实时监测数据，非极性组分最大的色谱峰的结束时间点应控制在4.5min~6.8min区间内(如附录A 所示)，此时将洗脱时间区间为0min~11min内所有收集的洗脱液(1000mL小口玻璃收集瓶内)倒入此500mL圆底烧瓶内。 然后将此装有收集洗脱液的500mL烧瓶置于水浴温度为60 ℃的旋转蒸发仪内，常压条件下，将其中的溶剂大部分蒸发，然后再在负压条件下，将剩余少量溶剂旋转蒸发至近干，取出该烧瓶并擦干烧瓶外壁的水。然后将此500 mL 烧瓶放入40 ℃的真空恒温干燥箱，在0.1 MPa的负压条件下，烘20min~30min，结束后放入玻璃干燥器内冷却至室温，然后称重(m1，精确至0.001g)，(m1-m0)即为非极性组分的质量。 若需收集极性组分，可按照附录B中的B.1进行。获得的非极性组分和极性组分的分离效果应按照附录B中的B.2进行验证。 6 分析结果的表述 油脂试样中极性组分的含量按式(1)计算： X =100% - (m1 -m0)/m ×100% …………………………(1) 式中： X ———油脂样品的极性组分含量，%； m0 ———空白500mL烧瓶的质量，单位为克(g)； m1 ———蒸干溶剂后，装有非极性组分的500mL烧瓶的总质量，单位为克(g)； m ———油脂样品称样量，单位为克(g)。 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留至小数点后1位。 7 精密度 当极性组分含量≤20%时，在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%；当极性组分含量>20%时，在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 销 售  部 sales@santaitech.com 产品订购 order@santaitech.com 客户服务 service@santaitech.com 技术支持 support@santaitech.com 应用技术研究中心 SAT@santaitech.com 实验参数设置实验参数同步《GB 5009.202-2016 食用油中极性组分（PC）的测定》的食品安全国家标准方法，配合常州三泰科技标准型快速分离正相硅胶柱进行制备。  三泰科技SepaBean machine快速液相制备色谱系统三泰科技SepaFlash 快速液相制备色谱柱表1  制备参数设置仪器SepaBean® machine 分离柱标准型快速分离柱，预填优质正相硅胶，40-63 µm， 60 Å （订货号：S-8101-0025 ）流动相A：石油醚：乙醚=87：13      B：丙酮：乙醚=40：60进样量1g/5ml石油醚流速25ml/min波长200nm梯度时间溶剂B%0080910015100分离结果食用油中非极性组分与极性组分在三泰科技（常州）标准型快速分离柱上分离的色谱图见下图1：     图1 食用油在三泰科技（常州）标准型快速分离柱上分离的色谱图（备注：第一个峰标非极性组分，第二个峰标极性组分）相比较GB5009.202—2016第二法柱层析法，第一法制备型快速柱层析法拥有更为高效、准确、一致性稳定的特点：自动稳定液体输送配比、自动化简易操作、在线紫外监测系统、自动收集系统、商业化预装符合国际标准的稳定性高的分离柱。