合欢皮配方颗粒中特征图谱分析检测方案(液相色谱仪)

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SSL-CA20-101Excellence in Science Excellence in ScienceLC-201 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn 使用岛津 LC-2030进行合欢皮配方颗粒特征图谱分析 LC-201 摘要：本文采用岛津 Prominence-i LC-2030一体式高效液相色谱仪，参考国家药典委员会公示的《合欢皮配方颗粒》质量标准中的色谱条件，对合欢皮配方颗粒特征图谱进行了分析。实验结果显示：在本系统下，(-)-丁香树脂酚-4-0-B-D-呋喃芹糖基-(1→2)-B-D-吡喃葡萄糖苷色谱峰的理论塔板数大于50000，符合系统适用性要求；空白溶液在4个特征峰位置处无明显色谱峰，不干扰特征图谱分析；对照药材参照物溶液连续进样6次，各特征峰保留时间和峰面积的 RSD 分别在0.016%~0.132%和0.120%~0.816%之间，仪器精密度良好；待测样品特征图谱中呈现与参照物特征图谱对应的特特峰，各特征峰的相对保留时间均在规定值的±10%之内，峰2、3的相对峰面积均符合标准规定。 关键词： LC-2030 高效液相色谱仪义合欢皮配方颗粒 特征图谱 方便等优点。因此，近些年来中药配方颗粒一直保持着高速增长的态势。2019年11月8日，国家药典委员会发布了《关于中药配方颗粒品种试点统一标准的公示》，160个中药配方颗粒品种拥有了试点统一标准，为中药配方颗粒的质量控制提供了依据。 中药合欢皮为豆科植物合欢 Albizia julibrissinDurazz.的树皮，夏、秋二季剥取，晒干。合欢皮性味甘，平，归心、肝、肺经。合欢皮中的化学成分比较复杂，主要含皂苷、黄酮类化合物、鞣质、多种木脂素、糖苷等，具有解郁安神，活血消肿的功效。用于心神不安，忧郁失眠，肺痈，疮肿，跌扑伤痛。 中药配方颗粒又称免煎中药饮片，是采用符合炮制规范的传统中药饮片为原料，经现代制药技术提取浓缩制成的、供中医临床配方用的颗粒。它保证了原中药饮片的全部特征，同时又具有免煎、速溶、携带 本实验采用 Prominence-i LC-2030 一体式高效液相色谱仪对标准中的合欢皮配方颗粒进行了特征图谱分析，该系统稳定性好，重复性高，特征图谱满足药典委员会公示的合欢皮配方颗粒质量标准的要求，能够为合欢皮配方颗粒的质量控制提供帮助。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津LC-2030液相色谱仪，包括LC-2030系统控制器，LC-2030输送泵， LC-2030自动进样器，LC-2030 柱温箱， LC-2030紫外检测器， LabSolutions Ver. 6.86 网络化色谱工作站。 1.2分析条件 色谱柱： Shim-pack Scepter C18 色谱柱(250mm× 4.6 mml.D.， 5 um) 流动相： A：0.05%磷酸水溶液；B：乙腈 流速：0.7mL/min 柱温：40℃ 检测波长：204nm 进样体积：5uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相起始浓度为12%，时间程序如表1所示。 表1梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 40.00 Pumps Pump B Conc. 40 42.00 Pumps Pump B Conc. 90 48.00 Pumps Pump B Conc. 90 48.10 Pumps Pump B Conc. 12 55.00 Controller Stop 样品前处理 对照药材参照物溶液的制备：取合欢皮对照药材 0.5 g，置具塞锥形瓶中，加50%甲醇20mL， 密塞，浸泡1小时，超声处理(功率250W， 频率40 kHz) 30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 对照品参照物溶液的制备：取(-)-丁香树脂酚-4-0-B-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含25 ug的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇20mL， 称定重量，超声处理(功率250W，频率40 kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 结果与讨论 3.1色谱图 按照1.2中色谱分析条件，对空白溶剂、对照药材参照物溶液、对照品参照物溶液和供试品溶液分别上机分析，空白溶剂色谱图如图1，目标物出峰处无干扰。对照品参照物、对照药材参照物和供试品色谱图见图2-4。 图1 空白溶剂色谱图 图2对照品参照物溶液色谱图 图3 对照药材参照物溶液色谱图 图4供试品溶液色谱图 注：S为(-)-丁香树脂酚-4-O-B-D-呋喃芹糖基-(1→2)-B-D-吡喃葡萄糖苷 3.2系统适用性考察结果 对照品参照物溶液、对照药材参照物及供试品溶液中(-)-丁香树脂酚-4-0-B-D-呋喃芹糖基-(1→2)-B-D-吡喃葡萄糖苷特征峰的系统适用性结果如下表所示： 表2 系统适用性结果 名称 对照药材参照物溶液 对照品参照物溶液 供试品溶液 理论塔板数 121566 120049 118367 各样品溶液中(-)-丁香树脂酚-4-0-B-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷的理论塔板数均不低于50000，本实验结果符合标准规定。 3.3供试品和对照特征图谱对比结果 参考《合欢花配方颗粒》特征图谱项的对照特征图谱可知，供试品和对照药材参照物色谱图中呈现了4个特征峰，4个特征图谱的保留时间结果如表3所示，特征图谱对比图如图5，合欢皮中配方颗粒标准中提供的特征图谱见图6。以(-)-丁香树脂酚-4-0-B-D-喃喃芹糖基-(1→2)-B-D-吡喃葡萄糖苷参照物相应对的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，结果如表4所示。 表3供试品和对照药材参照物色谱图中特征峰的保留时间 (min) 名称 峰1 峰2 峰3 峰4(S) 保留时间 (min) 保留时间 (min) 保留时间(min) 保留时间 」( (min) 对照药材参照物 5.285 15.989 16.489 22.904 供试品 5.281 15.921 16.419 22.836 表4供试品特征图谱结果 (min) 名称 峰1 峰2 峰3 相对保留时间 实测值 0.231 0.697 0.719 标准值 0.23 0.70 0.72 偏差 0.43% 0.43% 0.14% 相对峰面积 标准允许偏差 ±10% ±10% ±10% 实测值 0.714 0.747 标准值 ≥0.26 ≥0.20 --- 图5又对照药材参照物和供试品的色谱图对比图 图6公示稿质量标准中提供的对照图谱 与对照药材参照物色谱中4个特征峰的保留时间相对应的各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积均符合质量标准规定。 3.4精密度实验 0.016%~0.132%和0.120%~0.816%之间，表明仪器精密度良好，详见图7和表5. 图7 对照药材参照物溶液精密度测试色谱图(n=6) 表5 对照药材参照物溶液精密度测试结果果(n=6) 峰号 峰1 峰2 峰3 峰4((S) 保留时间 (min) 峰面积 保留时间 (min) 峰面积 保留时间 (min) 峰面积 保留时间 (min) 峰面积 1 5.285 647445 15.989 782869 16.489 811212 22.904 1232093 2 5.285 651725 15.982 795847 16.481 813987 22.901 1232738 3 5.286 651870 15.983 794465 16.483 812438 22.902 1232221 4 5.286 652038 15.967 797049 16.466 811756 22.888 1232240 5 5.285 659958 15.959 796757 16.458 811626 22.879 1232711 6 5.284 657421 15.933 802409 16.432 812054 22.854 1228644 RSD(%) 0.016 0.690 0.132 0.816 0.128 0.120 0.085 0.126 结论 本文采用岛津 Prominence-i LC-2030 一体式高效液相色谱仪及 Shim-pack Scepter C18色谱柱，对合欢皮配方颗粒的特征图谱进行了分析。实验结果显示：在本色谱系统下， (-)-丁香树脂酚-4-0-B-D-呋喃芹糖基-(1→2)-B-D-吡喃葡萄糖苷参照物色谱峰的理论塔板数为120049，符合系统适用性要求；空白溶液在4个特征峰位置无明显色谱峰，，不干扰分析测定；对照药材参照物溶液连续6次进样，各特征峰保留时间和峰面积的 RSD 分别在 0.016%~0.132%和0.120%~0.816%之间，仪器精密度良好；对合欢皮配方颗粒供试品溶液进行测定，供试品色谱图中4个特征峰保留时间与对照药材参照物色谱中4个特征峰的保留时间相对应，各特征峰与Ｓ峰的相对保留时间和相对峰面积均符合质量标准规定。本系统满足合欢皮配方颗粒的特征图谱分析要求。 岛津应用云 本文采用岛津Prominence-i LC-2030一体式高效液相色谱仪，参考国家药典委员会公示的《合欢皮配方颗粒》质量标准中的色谱条件，对合欢皮配方颗粒特征图谱进行了分析。实验结果显示：在本系统下，（-）-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷色谱峰的理论塔板数大于50000，符合系统适用性要求；空白溶液在4个特征峰位置处无明显色谱峰，不干扰特征图谱分析；对照药材参照物溶液连续进样6次，各特征峰保留时间和峰面积的RSD分别在0.016%~0.132%和0.120%~0.816%之间，仪器精密度良好；待测样品特征图谱中呈现与参照物特征图谱对应的特征峰，各特征峰的相对保留时间均在规定值的±10%之内，峰2、3的相对峰面积均符合标准规定。