苹果中二缩甲酰亚胺类农药残留量检测方案(凝胶色谱仪)

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食品中二缩甲酰亚胺类农药残留量的测定 适用范围 本标准规定了食品中乙烯菌核利、腐霉利、异菌脲残留量的气相色谱-质谱检测方法。 本标准适用于食品中中乙烯菌核利、腐霉利、异菌脲残留量的测定。（本实验样品为苹果） 参考标准：《GB 23200.71—2016 食品安全国家标准 食品中二缩甲酰亚胺类农药残留量的测定 》 溶液的配置 丙酮-正己烷溶液(1:4，V1:V2)：取100 mL丙酮，加入400mL正己烷，摇匀备用。 乙烯菌核利、腐霉利、异菌脲标准储备溶液：准确称取适量乙烯菌核利、乙菌利、腐霉利、异菌脲标准品，用丙酮配制成100μg/mL标准储备液，标准储备溶液避光于0~4ºC保存。 异菌脲基质标准工作溶液：异菌脲基质标准工作溶液是用样品空白溶液配成不同浓度的基质标准工作溶液，用于做标准曲线。基质标准工作溶液现用现配。 标准工作液：准确移取标准贮备液1mL，用乙酸乙酯稀释至10mL，配置成10μg/mL的混合标准工作液。 乙酸乙酯-环己烷（1:1）：量取100mL乙酸乙酯和100mL环己烷，混匀备用。 提取步骤 样品前处理：将样品经搅拌机搅碎，冷藏保存，备用。 准确称取5 g试样（精确至0.01g）于50 mL离心管中，加入20mL丙酮－正己烷，加入2 g氯化钠，以10000 r/min均质1min，提取液以4000 r/min的转速离心5 min，上清液经无水硫酸钠过滤并转入浓缩瓶中，残渣中加入20 mL丙酮－正己烷再提取一次，合并提取液，将提取液于40 ℃下减压浓缩至近干，用10 mL乙酸乙酯-环己烷溶解残渣，待净化。 净化步骤 4.1、凝胶渗透色谱净化步骤： GPC仪器型号 月旭 GPC-1600凝胶色谱仪 凝胶色谱柱 月旭Bio-Beads S-X3凝胶色谱柱，规格25×400mm 流动相 乙酸乙酯-环己烷（1:1） 流速 5.0 mL /min 进样量 5.0mL 收集时间 16-25min 将待净化液经凝胶色谱柱以乙酸乙酯-环己烷（1:1）洗脱，流速5mL/min，收集16-25min流分，将其旋转蒸发至干， 再用乙酸乙酯1mL复溶溶解，待检测。 注意事项 加标水平：5g样品中加入200μL 10μg/mL混合标准工作液，定容至2mL，因此加标水平为0.4mg/kg，最终机度数为 0.5μg/mL。 色谱条件 6.1气相色谱条件 色谱柱 WM-5MS ,30m×0.25mm×0.25μm 进样口温度 250℃ 升温程序 70℃，保持2min，以20℃/min升温至230℃，保持10min。 载气 高纯氦气（纯度>99.999%） 进样方式 不分流进样 恒流模式 1.0mL/min 进样量 1μL 6.2质谱条件 电离方式 电子轰击电离源（EI） 电离能量 70eV 传输线温度 250℃ 离子源温度 230℃ 四极杆温度 150℃ 监测方式 乙烯菌核利：187/285/287 腐霉利：188/259/331 异菌脲：187/314/316 溶剂延迟 10min 色谱图或者加标回收率结果 图1. 二缩甲酰亚胺类农药0.5μg/mL图谱 表1. 出峰情况 物质 保留时间 类型 峰宽 面积 开始时间 结束时间 乙烯菌核利 11.373 M 0.025 189994 11.345 11.407 腐霉利 13.224 M 0.035 379621 13.18 13.274 异菌脲 19.448 M 0.075 136403 19.351 19.553 图2. 苹果样品空白图谱 图3. 苹果样品加标0.4mg/kg图谱 表2. 加标回收率表 物质 加标水平 平均回收率 RSD值（n=2） 乙烯菌核利 0.4mg/kg 89.54% 1.38% 腐霉利 0.4mg/kg 89.19% 0.28% 异菌脲 0.4mg/kg 113.22% 3.12% 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00823-00002 GPC凝胶色谱柱 Welch Bio-Beads S-X3，200-400mesh，400mm*25mm 00824-31001 固相萃取装置 Welch 固相萃取装置,12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 Welchrom® 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 Welchrom® 2mL 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 03904-22001 气相色谱柱 WM-5MS ,30m×0.25mm×0.25μm 00837-05006 50mL螺口尖底离心管 Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包 00826-V004P100 乙烯菌核利/乙酰菌核利标准品 A2S, CAS No.:50471-44-8,100mg 00826-P068P100 腐霉利标准品 A2S, CAS No.:32809-16-8,100mg 00826-I016P100 异菌脲标准品 A2S, CAS No.:36734-19-7,100mg 1 适用范围 本标准规定了食品中乙烯菌核利、腐霉利、异菌脲残留量的气相色谱-质谱检测方法。本标准适用于食品中中乙烯菌核利、腐霉利、异菌脲残留量的测定。（本实验样品为苹果）参考标准：《GB 23200.71—2016 食品安全国家标准 食品中二缩甲酰亚胺类农药残留量的测定》 2 提取步骤 样品前处理：将样品经搅拌机搅碎，冷藏保存，备用。准确称取5g试样（精q至0.01g）于50 mL离心管中，加入20mL丙酮－正己烷，加入2 g氯化钠，以10000 r/min均质1min，提取液以4000 r/min的转速离心5 min，上清液经无水硫酸钠过滤并转入浓缩瓶中，残渣中加入20 mL丙酮－正己烷再提取一次，合并提取液，将提取液于40 ℃下减压浓缩至近干，用10 mL乙酸乙酯-环己烷溶解残渣，待净化。 3 净化步骤 凝胶渗透色谱净化步骤GPC仪器型号：月旭 GPC-1600凝胶色谱仪；凝胶色谱柱：月旭Bio-Beads S-X3凝胶色谱柱，规格25×400mm；流动相：乙酸乙酯-环己烷（1:1）；流速：5.0 mL /min；进样量：5.0mL；收集时间：16-25min。将待净化液经凝胶色谱柱以乙酸乙酯-环己烷（1:1）洗脱，流速5mL/min，收集16-25min流分，将其旋转蒸发至干， 再用乙酸乙酯1mL复溶溶解，待检测。 4 色谱条件 气相色谱条件 色谱柱：WM-5MS ,30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度：250℃；升温程序：70℃，保持2min，以20℃/min升温至230℃，保持10min；载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；进样方式：不分流进样；恒流模式：1.0mL/min；进样量：1μL。 质谱条件电离方式：电子轰击电离源（EI）；电离能量：70eV；传输线温度：250℃；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；监测方式：乙烯菌核利：187/285/287；腐霉利：188/259/331；异菌脲：187/314/316；溶剂延迟：10min。 5 色谱图及加标回收率结果