血清中抗精神病药物齐拉西酮检测方案(液相色谱仪)

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thermoscientific 热线8008105118电话4006505118 Online-SPE法测定血清中抗精神病药物齐拉西酮的含量 殷承华邢占磊金燕赛默飞世尔科技(中国)有限公司色谱质谱部 关键词： 抗精神病药物，齐拉西酮，治疗药物监测(TDM)，Online-SPE 背景介绍 精神分裂症是人类最常见的精神疾病之一，是一种慢性且具有高度遗传性的精神疾病。齐拉西酮 (Ziprasidone) 作为苯异噻唑哌嗪类衍生物，是第五个被美国食品药品管理局批准抗精神病药，对多巴胺、5-羟色胺等受体有高亲和性的拮抗作用，能对精神分裂症的阳性症状及阴性症状和认知缺陷起到改善作用。同时相较于其他精神类药物，齐拉西酮是唯一未见有帕金森不良反应报道的药物，且较少引起体重增加，在精神分裂症的治疗中已被广泛采用。 目前，非典型抗精神病药物在临床治疗精神疾病的经验逐渐丰富，有关的临床实验研究报道很多。但是随着齐拉西酮的大量应用，已经出现越来越多的不良反应报道。有研究表明，齐拉西酮可能会导致胰岛素抵抗间接引发糖脂代谢异常，降低胰岛B细胞对于血糖的敏感性，从而出现胰岛素抵抗的情况。与此同时，齐拉西酮的副作用也会导致潜在的远期心血管危险因素增加，如体重增加、血脂增高、泌乳素增高等，已经引起了人们的警觉。因此亟需一种能为临床精准、安全用药提供依据的方案。 由于每个个体之间年龄、性别、健康状况等都存在差异性，会导致患者体内齐拉西酮的血药浓度的个体间偏差较大。而通过治疗药物监测 (Therapeutic drug monitoring， TDM)可以帮助医生制定个体化用药方案，根据患者血药浓度和自身情况相应调整剂量，使患者在不良反应风险较小的条件下获得较好的疗效。服药期间定时监测血药浓度有助于降低不良反应发生的风险。当患者病情得到较好的控制而血药浓度过高，可以根据医嘱相应地减低剂量，降低不良反应风险；若患者病情不能得到控制，血药浓度的结果还可以帮助医生调整用药剂量，以获得更好的疗效。 方法介绍及优势 本文利用自动化样品前处理的Online-SPE 方法，借助强选择性、灵敏较高的荧光检测器，开发了精准监测血清中齐拉西酮含量的方法。该方法具有灵敏度高、重现性好、耗时短等特点。从齐拉西酮的线性范围、重复性测试，到血清的加标测试，对血清中的齐拉西酮进行了完整的定量分析，系统地为临床个性化、更精准、更合理、更安全地用药提供一定的依据，提升临床的药物依从性，给患者提供更好的疗效。 实验方法 1.实验部分 1.1仪器与试剂 1.1.1Thermo UltiMate 3000高效液相色谱系统 UltiMate 3000系统；包括带在线脱气单元的双三元梯度泵、自动进样器(500ul进样环)、柱温箱和荧光检测器； CDS变色龙色谱软件，版本7.2 SR6。 1.1.2试剂 乙腈、甲醇(色谱级， Fisher公司)，去离子水(18.2MQ， Millipore纯水机)，醋酸铵(色谱纯，上海安谱实验科技有限公司)，甲酸(分析纯AR，国药集团) 1.1.3样品溶液制备 标样的配制：甲醇溶解，配置齐拉西酮储备液100mg/L， 并稀释至需要浓度的溶液。 加标血清制备：用移液枪准确吸取1000uL空白血清，分别加入适量齐拉西酮稀释标准溶液，配置成需要浓度的加标血样。 血液样品的配制：准确吸取1mL血清与10mL离心管中，加入3mL沉淀试剂，涡旋混合20s， 12000r/min下离心10min， 取上层清液加入到进样小瓶，等待进样。 1.2色谱条件 1.2.1 管路连接方式 Detector 图1流路连接图 1.2.2色谱分析条件 色谱柱： Thermo AcclaimTM 120 C18色谱柱(250mmx 4.6mm， 5pm) 萃取柱：SPE专用柱 柱温：30℃； FLD：激发波长316nm；发射波长415nm；采样频率5Hz； S=6 DGLC泵泵(分析泵)流动相A：乙腈，流动相B：50mM醋酸铵+0.2%甲酸水溶液 表1.DGLC右泵流动相洗脱程序 时间/min 流速/mL·min1A% B% 0.0 1.000 30 70 3.0 1.000 30 70 8.0 1.000 45 55 12.0 1.000 45 55 12.1 1.000 30 70 15.0 1.000 30 70 DGLC左泵(萃取泵)流动相A：乙腈，流动相B：0.1%甲酸水溶液。 表2.DGLC左泵流动相洗脱程序 时间/min 流速/mL·min-1 A% B% 0.0 1.000 10 90 3.0 1.000 10 90 5.0 1.000 90 10 10.0 1.000 90 10 11.0 1.000 10 90 15.0 1.000 10 90 柱温箱的阀切换 表3.柱温箱阀切换程序 时间/min 阀位置 0.0 1-2 3.0 1-6 4.0 1-2 实验结果 2.1对照品及空白血样加示色谱图 1.0 .26304 566.07 80 图2对照品线性范围典型色谱图叠加 图3空白血样色谱图 图4对照品(650.00ng/ml)典型色谱图(蓝)和空白血样(黑)色谱叠加图 精密吸取1mL空白血清，分别加入适量齐拉西酮稀释标示溶，配置成不同浓度的标准溶液，标品浓度分别为20.31、40.62、81.25、162.50、325.00和650.00ng/ml，进样体积为100ul。图5所示为标准曲线，线性回归方程为Y=267.38X+5566.49， R2=0.9979，表明在20.31ng/ml-650.00ng/ml浓度范围内线性良好，同时该方法空白血清样品在齐拉西酮出峰位置(10.28min)无基质干扰。由于齐拉西酮-甲醇标准溶液和血清样品溶剂差异较大，建议标准品的加入体积不超过血清样品体积的5%。 图5标准曲线线性回归方程 2.2重现性考查 图6日内精密度重现性考查 取同一样品，按上述色谱条件进样6次，考察目标峰的保留时间及峰面积。结果显示保留时间 RSD<0.05%，峰面积RSD<0.6%，结果表明该方法重复性良好。重复性实验结果如图6，表4所示： 表4日内精密度重现性数据 No. Sample Name Retention Time ，min Amount ，ng/ml 1 日内精密度2-1 10.293 170.47 2 日内精密度2-2 10.297 167.77 3 日内精密度2-3 10.297 169.94 4 日内精密度2-4 10.297 169.86 5 日内精密度2-5 10.300 169.85 6 日内精密度2-6 10.300 168.96 7 Average 10.297 169.48 8 RSD 0.02% 0.57% 在相同色谱条件下，取浓度为40.63ng/ml， 162.50 ng/ml和325.00 ng/ml三个浓度点作为低(L)、中(M)、高(H)的三个加标浓度，分别平行处理3个样品，加标血样平均回收率为102.0%-105.6%，结果表明回收率准确，方法准确度良好，具体数据表如下所示： 表5血清加标回收率数据统计表 样品名 实际浓度 理论浓度 回收率 平均回收 (ng/ml) (ng/ml) 率 齐拉西酮-L1 43.36 40.63 106.7% 齐拉西酮-L2 42.32 40.63 104.1% 105.6% 齐拉西酮-L3 43.12 40.63 106.1% 齐拉西酮-M1 169.70 162.50 104.4% 齐拉西酮-M2 169.09 162.50 104.1% 104.4% 齐拉西酮-M3 170.18 162.50 104.7% 齐拉西酮-H1 330.09 325.00 101.6% 齐拉西酮-H2 332.20 325.00 102.2% 102.0% 齐拉西酮-H3 332.22 325.00 102.2% 结论 本文采用自动化样品前处理的Online-SPE 方法，借助HPLC-FLD分析，开发了精准监测血清中抗精神疾病类药物齐拉西酮的方法。该方法具有灵敏度高、重现性好和耗时短等特点。结果显示，此方法测定齐拉齐酮的线性范围宽，在20.31-650.00ng/ml范围内保持线性良好，保留时间 RSD<0.10%，峰面积 RSD<1.00%，结果表明该方法重复性好，准确度高，且回收率在102.0%-105.6%，可用于定量分析血清中的齐拉西酮，系统地为临床个性化、更精准、更合理、更安全地用药提供可靠依据。 ( 参考文献 ) ( 1. Hiemke C e t al. Consensus Guidelines for Therapeutic DrugMonitoring in Neuropsychopharmacology： Update 2017… Phar-macopsychiatry ) ( 2. Cherma M D ， Reis M， Hagg S et a l. Therapeutic drug monito-ring of ziprasidone in a clinical treatment setting. T her Drug M o nit 2008；30：682-688 ) 本文采用自动化样品前处理的Online-SPE 方法，借助HPLCFLD分析，开发了精准监测血清中抗精神疾病类药物齐拉西 酮的方法。该方法具有灵敏度高、重现性好和耗时短等特 点。结果显示，此方法测定齐拉西酮的线性范围宽，在20.31- 650.00ng/ml范围内保持线性良好，保留时间 RSD＜0.10%， 峰面积 RSD＜1.00%，结果表明该方法重复性好，准确度高， 且回收率在102.0%-105.6%，可用于定量分析血清中的齐拉西 酮，系统地为临床个性化、更精准、更合理、更安全地用药提 供可靠依据。