食品啤酒中氨基酸检测方案(液相色谱仪)

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LAAN-A-LC235A ApplicationnNNo.L529ANewShttp：//www.shimadzu.com.cn第一版发行日：2018年10月400-650-0439 高效液相色谱法 使用一体型 LC 系统 Prominence_1IV|"-i 的自动预处理功能同时分析氨基酸 No.L529A 在食品、制药等各种领域都需要进行氨基酸分析。在使用HPLC的氨基酸分析，常用的方法是柱后衍生化法。本公司的氨基酸分析系统也采用了柱后衍生化法。但是，基于所使用的色谱柱的特性，柱后衍生化法存在很难实现快速分析的问题。 关于使用 UHPLC系统，通过柱前衍生化法快速进行氨基酸分析的情况，已经在 L432A 进行了介绍。在这里为您介绍使用更加简便、并且是一体型的 HPLC 系统，通过自动柱前衍生化法进行氨基酸分析。 Y. Osaka 自动柱前衍生化 Prominence-i (LC-2030C)标配了自动进样器的自动预处理功能，如果使用“同时注入”功能，则可以从多个试剂瓶中依次吸引溶液，在针内进行混合。人们熟知的氨基酸衍生化反应试剂有邻苯二甲醛(OPA)、9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)等，这些试剂在室温下会与氨基酸进行快速反应。通过使用本功能，可以自动在针内进行反应。图1所示为设置内容，图2所示为自动柱前衍生化流程。如上所述，这种对试剂进行依次吸取的动作也可以轻松进行设置。 图 1 Prominence-i(LC-2030C)的预处理(同时注入)设定画面 图2使用 Prominence-i 进行自动柱前衍生化的流程 表1衍生物化学试剂 ● Mercaptopropionic Acid Reagent Add 10 uL of 3-mercaptopropionic acid into 10 mL of 0.1 mol/Lborate buffer. ) OPA Reagent Add 0.3 mL of ethanol into 10 mg of o-phthalaldehyde and dissolvec'mlompletely. Then add 0.7 mL of 0.1 mol/L borate buffer and 4mL ofultrapure water. ●D Mercaptopropionic Acid /OPA solution Mix equal volume of Mercaptopropionic Acid Reagent and OPAReagent. FMOC Reagent Dissolve 10 mg of 9-fluorenylmethl chloroformate into 50 mL ofacetonitrile. |分析结果 表2及表3所示为分析条件。图3所示为对20种蛋白质构成氨基酸成分进行分析的色谱图。 Column ： Shim-packM XR-ODSII 100mmL.×3.0 mml.D.，2.2 um Mode ：Low pressure gradient Mobile phase ： A) 20mmol/L Sodium acetate buffer (pH6) B) Water/Acetonitrile=100/900 C) 20 mmol/mL Sodium acetate buffer (pH5) containing 0.5 mmol/L EDTA-2Na Flow rate ： 1.0 mL/min Column temp. ：40℃ Injection volume ：1pL Detection Fluorescence detectorCh2) Ex. 266 nm，Em.305 nm表3梯度时间程序 表3梯度时间程序 Time (min) A.conc B.conc C.conc 0 95 5 0 0.2 93 7 0 1 93 0 4 87 13 0 5 0 15 85 7.5 0 30 70 12 0 35 65 14 0 45 55 14.01 0 95 5 17 0 95 5 0.0 1.0 3.0 4.0 5.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 140 mir 1，AsparticAcid2，GlutamicAcid3，Asparagine4，Serine5，Glutamine6，Histidine7，Glycine8，Threonine9，Arginine10，Alanine11，Tyrosine12，Methionine13，Valine14，Cystine15，Tryptophan16，Phenylalanine17，Isoleucine18，Leucine19，Proline20，Lysine 线性和重复性 针对各成分的氨基酸，对0.25、1.25、2.5、12.5、25 (Pro为2.5、12.5、25、62.5、125) (pmol/uL)浓度范围内的线性(r、线性相关系数)和12.5 pmol/uL下的重复分析(n=6)的面积重现性进行了评价。上述结果如表4所示。 表4线性和面积重复性 Linearity(r) Area(%RSD) Linearity(r) Area(%RSD) Asp 0.999096 1.343 Tyr 0.999793 0.985 Glu 0.999303 1.069 Met 0.999956 0.929 Asn 0.999717 0.656 Val 0.999687 0.850 Ser 0.999927 0.962 Cystine 0.999709 1.586 GIn 0.999955 0.990 Trp 0.999899 0.676 His 0.999927 0.680 Phe 0.999832 0.787 Gly 0.999941 0.871 lle 0.999754 0.786 Thr 0.999630 0.949 Leu 0.999904 2.379 Arg 0.999977 0.981 Pro 0.997545 10.643 Ala 0.999880 1.899 Lys 0.999794 0.720 其他氨基酸的分析例 在氨基酸中除了有20种蛋白质构成氨基酸成分之外，还有各种对健康有益的氨基酸。在这里为您介绍加入了近年来倍受人们关注的瓜氨酸、牛磺酸、茶氨酸、y-氨基丁酸 (GABA)的分析实例(图4)。 实际试样分析 图5所示为啤酒的分析例。用纯水对试样进行100倍稀释，使用0.22 um 滤膜过滤后，进行分析。其中，分析条件如表2及表3所示。 如上所述，通过使用 Prominence-i的自动预处理功能，可以简单地进行氨基酸柱前衍生化分析。衍生反应在针内进行，因此，可以将试剂和试样控制到最低限度，并将反应物全部导入色谱柱，可以进行高灵敏度的分析。同本公司过去在样品瓶内进行衍生反应的方法相比，不再需要准备在反应时使用的空样品瓶，因此，可以节省分析准备时间。 (谱峰编号参见图3及图4) 21， Citrulline22， Taurine 23， Theanine24， GABA 图4包含功能性成分的23种氨基酸成分的分析例(各12.5 pmol/uL) Prominence 及 Shim-pack 是岛津制作所株式会社的商标。 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 用户服务热线电话： 800-810-0439 ( 免责声明： ) ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ) ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ) ( 如有变动，恕不另行通知。 ) 在食品、制药等各种领域都需要进行氨基酸分析。在使用HPLC的氨基酸分析，常用的方法是柱后衍生化法。本公司的氨基酸分析系统也采用了柱后衍生化法。但是，基于所使用的色谱柱的特性，柱后衍生化法存在很难实现快速分析的问题。关于使用UHPLC系统，通过柱前衍生化法快速进行氨基酸分析的情况，已经在L432A进行了介绍。在这里为您介绍使用更加简便、并且是一体型的HPLC系统，通过自动柱前衍生化法进行氨基酸分析。