原料糖中氨基乙酰苯检测方案(液相色谱仪)

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2 郭丽萍金燕赛默飞(中国)有限公司 关键词：液相色谱；紫外； Acclaim 120 C18； Acclaim PolarAdvantageC16；原料糖；2-氨基乙酰苯 Key words： HPLC； UV detection； Acclaim 120 C18； AcclaimPolarAdvantage C16； Syrup；2-aminoacetophenone； 引言 2-氨基乙酰苯(2AP)在国外已经被确认为在许多食品(葡萄酒、果葡糖浆)中经常出现的一种重要的、具有芳香活性的微量物质。最早描述在食品中发现2AP可以使奶类食品产生不良口味，后来发现当酒中的2AP浓度超过了某个感官阈值时，就会造成所谓“非典型老化”的不良口味，简称“UTA”现象，这种UTA现象的存在会严重影响葡萄酒的口感和风味，果葡糖浆中也会出现UTA现象B 原料糖在生产过程中，果糖、葡萄糖产生分解产生许多的微量杂质，2AP是其中的一种。目前国内许多原料糖的生产厂家还未充分认识、重视这些能影响原料糖风味的微量物质的存在，所以很有必要开发有关原料糖微量成分的检测技术，保证产品质量能够更好的满足市场需求。 在线SPE方法 仪器： UltiMate 3000；包括：带在线脱气单元的双三元梯度泵，自动进样器，带有一个六通阀的柱温箱，紫外检测器，系统连接参见图1。 分析柱： Acclaim 120 C18， 3um， 3×150mm； SPE柱： Acclaim PolarAdvantage C16， 5pm， 4.3x10mm； 柱温：40℃； 淋洗液和流速：见表1和表2； 检测波长：220nm； 进样量：500pL； 仪器： UltiMate 3000；包括：带在线脱气单元的四元梯度泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器。 分析柱： Acclaim 120 C18， 3um， 3×150mm； 柱温：40℃； 图1仪器连接图 淋洗液：H0(1%HPO)/CH，CN=25：75流速： 0.5mL/min；检测波长：220nm；进样量：300pL； 表1分析柱梯度条件 时间/min 流速mL/min CH，CN% H，O(0.1%H，PO)% 0 0.5 20 80 1.5 0.5 20 80 10 0.5 95 5 11 0.5 95 5 12 0.5 20 80 18 0.5 20 80 时间/min 流速mL/min CH，CN% H，O(0.1%H，POA% 0 1 0 100 2.1 0 100 2.5 1 95 5 5 1 95 5 6 0.2 0 100 15 0.2 0 100 15.5 1 20 80 16 1 0 100 18 1 0 100 表3阀切换程序 时间(min)Time 阀位置 Valve position 0 1-2 6 1-6 15 1-2 样品前处理 标准品前处理 于100mL容量瓶中精确称取一滴2-氨基乙酰苯(2AP)标准物质的质量0.0318g， 加入25mL HPLC级乙腈，用超纯水定容至刻度，摇匀后制成0.318g/L的标准储备液。量取31pL的该标准储备液到50mL的容量瓶中，用超纯水定容到刻度，摇匀后制成200pg/L的标准储备液。再用超纯水逐级稀释分别得到0.1 pg/L、0.2 pg/L、0.25pg/L、0.5pg/L、1pg/L、5pg/L和10pg/L的标准品，分别经0.45um的滤膜过滤后装瓶，待测。 待测样品前处理 精确称取样品3g，放入10mL进样瓶中，用含2%HPO的超纯水定量到9g，摇匀后经0.45pm的滤膜过滤。在100℃下加热5min后，待冷却至室温，经0.45um的滤膜过滤，装瓶并待测。 结果和讨论 -维色谱样品分离谱图 图2样品和加标1 pg/L的样品叠加谱图(蓝色谱图为样品谱图；黑色谱图为加标1 pg/L的样品谱图) 图31pg/L标准品和加标1pg/L的样品叠加谱图(蓝色谱图为1ug/L标准品谱图；黑色谱图为加标1ug/L的样品谱图) 在线SPE标准品叠加谱图 图4标准品叠加谱图(浓度分别为0.1pg/L、0.2pg/L、0.25pg/L、0.5pg/L、1pg/L、5pg/L和10pg/L) 标准品数据 标准品数据见表4。 测定结果及加标回收率数据 实验数据及加标回收率数据见表5。 重复性数据 实验数据及加标回收率数据见表6。 Retention time (min) Area(mAu*min) Asym. (EP) S/N Plates (EP) 0.1ppb 7.957 0.0509 1.06 18.8 106105 0.2ppb 7.957 0.0611 1.11 49.1 97309 0.25ppb 7.957 0.0799 1.02 49.4 99197 0.5ppb 7.960 0.1122 0.98 64.1 99295 1ppb 7.953 0.1696 1.17 155.6 91554 5ppb 7.957 0.6444 1.05 318.8 92230 10ppb 7.957 1.2709 1.04 738.7 92120 表5实验数据及加标回收率数据 测得值(pg/L) 标准品加入值 (ug/L) 加标测得值((pg/L) 回收率 (%) 样品 未检出 1 1.0286 102.86 表6实验数据及加标回收率数据 10pg/L 1 2 3 4 5 RSD Retention Time(min) 7.957 7.960 7.960 7.963 7.960 0.03% Area(mAu*min) 1.2837 1.2972 1.2903 1.2909 1.2889 0.37% 本实验先按照传统的一维色谱条件对2-氨基乙酰苯标准品以及样品进行了定量分析，发现样品中2-氨基乙酰苯与杂质峰的分离度不好，基质干扰大；因此，选用双三元高效液相系统开发了在线固相萃取色谱方法，通过在线固相萃取，排除了大部分的基质，并使2-氨基乙酰苯与其它杂质峰达到了基线分离。优化条件后得到在0.1~10 pg/L的线性范围里2-氨基乙酰苯的标准曲线。因为在样品中未检测到2-氨基乙酰苯，所以对样品进行加标1 pg/L后进行分析，得到加标后2-氨基乙酰苯的浓度，测得回收率。结果表明本方法适合检测糖浆中2-氨基乙酰苯的含量，干扰少，检测时间短，峰形好，理论塔板数高，有良好的重复性，进样为500uL时检出限为0.016ug/L。 ( [1]. Katri n Hoenicke， Thomas J Simat， H ansSteinhart， U ntypical aging off-flavor i n w ine：formation of 2-aminoacetophenone a ndevaluation o f its influencing factors[J]. A n alyticaChimica Acta， 2002，458：29~37 ) ( [2] . Ron G B uttery， Louisa C L ing. Importance of2-aminoacetophenone t o the flavor of masacorn f lour products[J]. J ournal of Agricultural andFood Chemistry， 1994， 4 ( 1)： 1 ~2 ) ( [3] . ISBT 14.0-2003.2-Aminoacetophenone(2AP)[S] ) thermoscientific.com C 2012 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc. and itssubsidiaries. Specifications， terms and pricing are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your local sales representative for details. 上海 北京 免费服务热线：上海浦东新金桥路27号6号楼 北京东城区安定门东大街28号 800 8105118邮编：201206 雍和大厦西楼F座7层702-715室 4006505118电话：021-68654588 邮编：100007传真：021-64457830 电话：010-84193588传真：010-88370548 本实验先按照传统的一维色谱条件对2-氨基乙酰苯 标准品以及样品进行了定量分析，发现样品中2-氨基乙 酰苯与杂质峰的分离度不好，基质干扰大；因此，选用 双三元高效液相系统开发了在线固相萃取色谱方法，通 过在线固相萃取，排除了大部分的基质，并使2-氨基乙 酰苯与其它杂质峰达到了基线分离。优化条件后得到在 0.1~10 µg/L的线性范围里2-氨基乙酰苯的标准曲线。 因为在样品中未检测到2-氨基乙酰苯，所以对样品进行 加标1 µg/L后进行分析，得到加标后2-氨基乙酰苯的浓 度，测得回收率。结果表明本方法适合检测糖浆中2-氨 基乙酰苯的含量，干扰少，检测时间短，峰形好，理论 塔板数高，有良好的重复性，进样为500 µL时检出限为 0.016 µg/L。