动物肉制品中化学添加剂检测方案(PCR)

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公安系统“真假肉”检测能力建设 推荐方案 广州迪澳生物科技有限公司 2020年4月10日 目录 1 方案概述 3 2 实时恒温扩增荧光PCR技术 4 3 广州迪澳生物生物科技有限公司 5 3.1 公司简介 5 3.2 发展历史 6 3.3 产品系列 6 3.3.1 DEAOU-308C恒温荧光检测仪 6 3.3.2 检测试剂 7 3.3.3 售后服务 7 3.3.4 DEAOU-308C恒温扩增荧光检测系统的特点 7 4检测能力建设方案 9 4.1.1 动物源性成分检测程序 9 4.1.2具体步骤 9 5 仪器与信息系统数据通讯方案 11 6 Deaou-308C恒温扩增荧光检测系统的应用 12 7 品牌优势 14 8 部分客户案例 14 9 公安系统部分签约名单 15 附件1. 迪澳恒温扩增荧光检测系统 16 附件2. DEAOU-308C技术参数表 19 附件3 分子检测流程图 20 附件4 性能评价报告 21 附件5 恒温扩增荧光检测仪医疗器械注册证 22 20 1 方案概述 食品的质量和安全一直是社会关注的焦点，随着人们生活水平的提高，肉制品消费已经成为食品消费的主流，要确保广大消费者的切身利益，就要保证各种肉制品质量可靠。目前利用掺杂使假、以次充好等手段欺骗消费者而谋取暴利的事件屡屡出现，不仅扰乱了市场秩序，而且给消费者的身心健康带来许多负面影响。 猪肉作为餐桌上重要的动物性食品之一，因经济价值相对牛、羊低很多、同时养殖规模大，在肉类掺假中很常见。市场上的无良商家通过添加各种化学品，把味道调制成牛肉的味道，冒充牛肉销售以牟取暴利。鸭肉作为市场上经常销售的禽类，价格较低，而且肉质与羊肉接近，不法商家会使用各种化学添加剂，把味道调制成羊肉的味道，冒充羊肉销售以牟取暴利。 2013年2月，江苏无锡公安机关打掉一例以狐狸、水貂、老鼠等未经检验检疫的动物肉制品制售假羊肉的特大犯罪团伙，案值1000余万元。 2013年3月，内蒙古包头公安机关成功破获腾达食品有限公司制售假劣食品案，其生产的假劣牛肉干、羊肉干，销往全国15个省区市，案值600余万元。 2013年9月，西安市公安雁塔分局成功破获了今年全市最大的制造假牛肉案件，一举打掉制假窝点6个，抓获犯罪嫌疑人45名，查扣涉案车辆13部，现场查获成品、半成品“假牛肉”17500余公斤。 2013年10月22日，四川广安警方成功破获一个利用病死猪、牛肉生产并销售假冒伪劣牛肉干的犯罪团伙，抓获3名犯罪嫌疑人，查获冻病死猪牛肉10余吨、假冒伪劣牛肉干成品10余吨以及大量非法食品添加剂，涉案金额高达3000多万元。 2016年，攀枝花公安在打击食药环领域犯罪中，共出动警力1800余人次，清理出租房屋2000余间，检查重点部位、集贸市场、场所834处，清理检查食品、药品生产、销售单位453家次。破获刑事案件76件，其中，生产、销售有毒有害食品案1件，生产、销售不符合安全标准的食品案8件，生产、销售伪劣产品案2件，生产、销售假药案64件，其它1件。抓获违法犯罪人员17人，逮捕1人，依法移送起诉7人。办理破坏环境资源治安案件16件，已处罚12件。 2020年1月，江苏东台警方在开展打防管控“冬季攻势”期间，抽调治安、网安、技侦、三里桥和城东派出所等单位警力共计40余人组成专案组，雨夜奔袭成功捣毁一处大型制售假牛肉窝点，抓获涉案人员15人，查扣假牛肉及相关制品400余公斤，涉案资金30余万元。 为全面贯彻党的十九大和十九届二中、三中全会精神，认真落实习近平总书记关于食品安全“四个最严”要求和《中共中央国务院关于深化改革加强食品安全工作的意见》（中发〔2019〕17号），根据《国务院食品安全委员会关于印发2019年食品安全重点工作安排的通知》（食安委〔2019〕2号）和江苏省委省政府关于食品安全工作的部署要求，省公安厅、省农业农村厅、省商务厅、省市场监管局、省供销合作社按职责分工负责，对假冒伪劣食品开展治理行动。以农村地区、城乡结合部为重点，全面清理食品生产经营主体资格，严厉打击制售“三无”食品、假冒食品、劣质食品、过期食品等违法违规行为，坚决取缔“黑工厂”“黑窝点”和“黑作坊”。规范食品流通供应体系，净化消费市场，提高全省食品安全保障水平。 2019年7月25日，全国公安机关集中打击食药环犯罪“昆仑”行动部署会在京召开。按照公安部统一部署，江苏省公安厅自2019年7月至年底，组织全省公安机关集中开展打击食药环犯罪“昆仑”行动，重点打击涉及食品安全的犯罪行为，包括内制品、乳制品、农产品、水产品犯罪、假冒名烟名酒犯罪、食品非法添加和虚假宣传犯罪等行为。 “工欲善其事，必先利其器”，我国经济飞速发展，人们生活水平不断提升，人们对食品安全问题也越来越关注。食品安全问题是重要的民生问题，解决食品安全问题对保障我国人民生活健康具有重要作用。食品检测是保障食品质量的重要手段，只有不断提高检测水平，才能更好地保证食品安全。 2 实时恒温扩增荧光PCR技术 核酸等温扩增技术（isothermal nucleic acid amplification technology）是指一类分子生物学技术的总称，它们能在某一特定的温度下，扩大特定DNA或RNA片段的拷贝数。与上述两种PCR方法相比，核酸等温扩增技术的特点是可在特定温度条件下实现核酸的扩增。由于扩增反应的全过程均在同一温度下进行，使它们对仪器的要求大大简化，反应时间大大缩短，可通过加热模块、水浴槽等简单的设备完成反应。实时恒温扩增荧光PCR法是核酸等温扩增技术的一种，是通过Bst-DNA聚合酶及特异性引物在恒温条件下对特定的核酸片段进行特异性扩增，扩增产物（DNA）与核酸染料结合后发出荧光信号，根据所产生的扩增曲线判断结果。实时恒温扩增荧光PCR法具有如下特点： （1）温度恒定。反应是在连续等温的条件下进行，不用花费时间来改变温度； （2）高效灵敏。在45-60 min的时间内，其扩增效率可达到l0l0个数量级；扩增模板极限仅为几个拷贝； （3）特异性强。采用4/6条引物，识别6个位点，特异的扩增靶基因； （4）检测费用低。只要一特定的温度就能完成扩增反应，不需要昂贵的精密仪器和特殊试剂，总费用低； （5）操作简便。不需要进行双链DNA的预变性；反应不需要开盖，在一管内即可以完成全部检测； （6）检测简单。结果可根据有无“S”型曲线进行判断，也可依靠仪器自动判读。 核酸等温扩增技术因其具有高特异性、高效率和快速反应的特点，故从2003年开始逐步被用于医学的临床检测，目前主要是病原微生物的检测和传染性疾病的诊断。应用核酸等温扩增技术在动物源性检测方面也有不少报道。程晋霞，曾静等采用核酸等温扩增技术对食品中过敏原牛奶成分进行检测，并与实时荧光定量PCR方法对比，结果发现核酸等温扩增技术的检测灵敏度为0.5%，与Real-time PCR方法检测灵敏度相当，69份实际样本的检测结果与Real-time PCR方法一致。另外，冉光耀也在其论文中报告了采用核酸等温扩增技术对猪、狐狸、大鼠、鸡和鸭源性成分进行检测，猪、狐狸、大鼠、鸡和鸭的各引物的灵敏度分别可达到500fg、500fg、50fg、5pg和50fg，具有良好的灵敏度；可检出自制掺假率为0.01%的模拟样品和用各种热处理方式处理过的生鲜肉；猪源性成分恒温PCR检测法与我国出入境检验检疫行业标准方法（SN/T2051-2008）相比，结果一致性达到了97.6%。 3 广州迪澳生物生物科技有限公司 3.1 公司简介 迪澳生物为食品企业、政府机构、第三方检测提供分子检测整体解决方案，是“十二五”国家科技重大专项牵头企业、国内首个转基因检测行业标准起草企业，是国内食品安全分子检测的领航者。基于独创的恒温荧光检测平台，致力于分子检测设备及配套试剂的生产与研发。迪澳目前为食品、药品、化妆品、保健等生产加工企业、第三方检测机构、政府监管部门等客户提供精确高效、操作简捷的分子检测整体解决方案。 3.2 发展历史 2008年6月，迪澳生物成立于国家级高新技术园区——广州科学城，由留学归国生物科学家联合国内天使投资基金创立，注册资金2500万元。 2012年3月，由迪澳生物牵头申报的“结核病新型诊断产品研发及其产业化”课题获“十二五”国家科技重大专项立项支持。 2013年，通过高新技术企业认证。 2013年6月，由迪澳生物牵头申报的“高灵敏度和高特异性海洋动物细菌及病毒检测试剂产业化”课题获“海洋经济创新发展产业化示范项目”支持。 2014年，DEAOU-308C恒温荧光检测仪问世，全国市场正式启动。 2015年，“结核病新型诊断产品研发及其产业化申报”获“十三五”国家科技重大专项技持。 2016年，“十二五”国家科技重大专项顺利结题，“十三五”国家科技重大专项启动。 3.3 产品系列 主要包括DEAOU-308C恒温扩增荧光检测套装、配套试剂及售后技术服务。 3.3.1 DEAOU-308C恒温荧光检测仪 DEAOU-308C恒温扩增荧光PCR检测仪是由广州迪澳生物科技有限公司自主研发而成，采用现代微系统技术和最新的LED过滤处理技术，其检测灵敏度超越了主流的荧光检测系统（DEAOU-308C恒温扩增荧光检测仪参数请见附件1）。 DEAOU-308C恒温荧光检测仪资质： 1）2014年2月17日，获得ISO9001质量体系认证证书 2）2014年3月15日：仪器企业标准获得备案 3）2014年5月5日：获得CQC产品认证证书 4）2014年11月24日：获得医疗器械注册证 5）外壳：外观设计专利 6）软件：软件著作权登记 3.3.2 检测试剂 迪澳生物专注食品安全检测，在同类行业内产品种类是最丰富的，同时仪器和试剂的设计原理都是基于恒温荧光PCR的技术原理，结果准确性更高。 产品名称 用途 备注 马、驴源性核酸检测试剂盒 用于鉴别马/驴源性成分 根据检测需要选择核酸检测试剂盒的类别和数量。（检出限为0.5%） 鸭源性核酸检测试剂盒 用于鉴别鸭源性成分 黄牛源性成分核酸检测试剂盒 用于鉴别黄牛源性成分 羊源性成分核酸检测试剂盒 用于鉴别羊源性成分 水牛源性成分核酸检测试剂盒 用于鉴别水牛源性成分 牦牛源性成分核酸检测试剂盒 用于鉴别牦牛源性成分 猪源性成分核酸检测试剂盒 用于鉴别猪源性成分 鹅源性核酸检测试剂盒 用于鉴别鹅源性成分 狐狸源性核酸检测试剂盒 用于鉴别狐狸源性成分 鸡源性核酸检测试剂盒 用于鉴别鸡源性成分 水貂源性核酸检测试剂盒 用于鉴别水貂源性成分 鼠源性核酸检测试剂盒 用于鉴别大鼠源性成分 动物组织DNA快速提取试剂盒 用于提取动物组织的核酸 3.3.3 售后服务 可根据客户需求定制开发相关的检测试剂盒产品。 提供规范的分子实验室建设方案。 提供人员培训，特派专业工程师上门指导服务。 提供实验开展的分子检测整体解决方案。 迪澳生物提供7×24h全方位的技术支持。 3.3.4 DEAOU-308C恒温扩增荧光检测系统的特点 整套配置，便于携带 Deaou-308C恒温扩增荧光检测系统是基于恒温荧光PCR技术的完整实验系统。Deaou-308C恒温扩增荧光检测系统体积小，主机和配件全部整合到一个装备箱中，总重15kg，只需要有电源提供，无需添置其它设备即能完成样品处理、核酸提取、扩增反应、结果判断的检测全过程。 一机多用，满足多种检测需求 A、食源性致病菌检测：国标要求的13种常见致病微生物全覆盖； B、动物源性检测：鉴定10种常规食用的动物源成分和非常规的动物源成分（猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅等）； C、转基因检测：鉴定初筛基因、转基因玉米品系、转基因大豆检测品系、转基因水稻品系检测和转基因小宗农产品检测等40种转基因成分。 快速检测，上机45分钟出结果 45分钟内完成检测，且能实现扩增过程的实时监控。迪澳生物的恒温荧光检测系统最快20分钟可以判断阳性结果，45分钟判断阴性结果。 样品前处理简单 样品的快速处理，10分钟能完成对样品核酸的提取。 完善的智能系统 检测仪内置检测系统，具有独立的操控功能；仪器中可实现数据的存储、调出、结果分析、统计和报告，也可以连接电脑进行操作，配套专用检测分析软件。 设备维护方便 设备对使用环境适应性强，能在低至-20℃和高至55℃的环境中正常运行；能在湿度20%～85%的环境中正常运作；设备移动后无需校准即可使用。 灵敏度高，特异性强 动物源性检测产品最低检出限为0.5%，多种产品具有国家级或省级检测单位出具的验证和评价报告。 检测通量适中 16个检测位置，一次最多可检测16个样品。 智能判读 采用先进的数学模型进行数据处理和图形绘制，可自动判读结果。 4检测能力建设方案 4.1.1 动物源性成分检测程序 图1 动物源成分检测流程图 4.1.2具体步骤 （一）核酸提取 取50-100mg饲料样本，加入500μL Buffer A。 涡旋震荡混匀，80℃条件下热浴10-15分钟。 离心取10μL上清液，用1mL Buffer B稀释，即为核酸溶液，可用于后续PCR扩增。 （三）配制反应体系 试剂配制（在准备区进行，与扩增区分开，冰上操作） 若有n个待检样品，需配制n+2个反应（n个待检样品+1个阴性对照+1个阳性对照），将下表中试剂在EP管中混匀，按每管23 μl分装至0.2 ml PCR管中。 试剂 加入量（μl） 反应液 22 ×（n+2） Bst聚合酶 1.0 ×（n+2） 总体积 23 ×（n+2） 加样（在标本处理区进行，冰上操作） 在上述含有混匀试剂的PCR管中加入20μl的密封液（如扩增仪器带热盖可不加密封液），随后加入2μl模板（加样顺序为阴性对照、待检样品、阳性对照），10,000 rpm离心30s，即可上机检测。 （四）上机检测（在扩增区进行） 将反应管置于仪器恒温扩增荧光检测仪中，编辑实验名称，选择检测时间，点击开始检测。 依据检测试剂盒的说明书进行实验结果的判定。 图2. 结果判读示意图 5 仪器与信息系统数据通讯方案 参照国家“十二五”“十三五”规划及国家快检车方案中对于信息化系统建设的意见及要求，我司所配置的仪器均可实现信息化接口联网功能。 我司承诺配备专门的软件工程师对接本省信息化监管平台相关机构人员，实现我司仪器在数据处理软件系统平台上的正常运行，实现方式如下： 6 Deaou-308C恒温扩增荧光检测系统的应用 2015年12月21日威海晚报报道，威海食品药品稽查支队启用快检新技术一小时检出羊肉是否掺假 山东网络台：http://v.iqilu.com/shpd/shb/2015/1230/4290055.html 威海晚报： 2016年1月18日，烟台水母网报道，烟台使用动物源性检测仪抽检肉制品 一小时出结果 http://news.shm.com.cn/2016-01/18/content_4434988.htm 2016年1月14日，辽宁省食品药品监督管理局发布新闻，朝阳局运用高技术快速监测手段确保“两会”食品安全 http://www.lnfda.gov.cn/CL0883/37602.html?from=timeline&isappinstalled=0 7 品牌优势 广州迪澳生物科技有限公司是一家分子检测领域整体解决方案提供商，是“十二五”国家科技重大专项牵头企业、转基因检测SN行业标准起草企业，是国内食品安全分子检测的领航者。基于独创的恒温荧光检测技术平台，迪澳生物致力于分子检测设备及配套试剂的研发与生产。目前为包括食品、药品、化妆品、保健品等生产加工企业、第三方检测机构、政府监督部门提供精确高效、操作便捷的分子检测整体解决方案。 迪澳生物的产品在食品安全领域已经得到非常多的应用，包括了国家食品安全风险评估中心、国家乳制品技术评估中心、各地的食品药品监督管理局（北京、辽宁、广东、湖南、海南、山东等等）、各地的出入境检验检疫局（广东、辽宁、湖北、福建）、大型食品生产加工企业（恒大粮油、海天味业、国联水产、山东禹王集团等等）、第三方检测机构都在使用迪澳的产品进行食品安全检测。 8 部分客户案例 山东省威海市移动检测车项目 项目名称：食品快检实验室检测仪器 项目编号：WHGP2015-432 项目描述： 为创建国家食品安全城市和满足日常监督执法需要，山东省威海市食品药品监督管理局投资200余万元采购了一辆食品安全快检车和一批快检实验室设备，其中包括快检实验室装备——迪澳动物源性快速检测箱。该设备主要利用恒温PCR荧光检测技术，通过DNA对比，快速准确地鉴定产品中是否含有特定动物源性成分，适用于肉制品掺假鉴别，能够检测猪、牛、羊、鸭、狐狸等10余种动物源性成分，相比实验室检测具有检测时间短、操作简单、费用低、携带方便等特点，可以扩大肉品筛查范围，大大提高食品安全监管的科学性和有效性。 云南食药项目 项目名称：云南省食品药品监督管理局食品快速检测设备采购项目 项目编号：YNTTCG2016043 项目介绍： 由于近年肉类掺假的问题多发，为了进一步保障地区的肉类供应安全，云南省食药句针对掺假肉检测设备及试剂（共137套）而进行的公开招标，目的是把动物源性检测设备覆盖至云南省137个市县，让其建立起掺假肉的检测能力。云南省是全国首个对动物源性检测设备进行大范围覆盖的地区，该项目的意义在于让监管单位拥有对假肉及时检出并阻止问题产品流出市面的能力。 9 公安系统部分签约名单 序号 单位名称 1 陕西省安康市公安局 2 陕西榆横县公安局 3 陕西清涧县公安 4 陕西省兴平市公安局 5 陕西延安市公安局 6 陕西省杨凌市公安局 7 陕西榆林市公安局 8 上海市公安局食药环支队 9 临沂市罗庄区公安分局 附件1. 迪澳恒温扩增荧光检测系统 迪澳生物提供的恒温荧光PCR检测解决方案，简便易行，主要仪器设备可浓缩在一个行李箱大小的空间（图3）；检测操作也相当简单；自主开发的恒温荧光检测仪可实现结果自动判断，以“+”和“−”号表示阳性和阴性结果，无需专家解读；因此可以为贵单位提供准确、先进的检测手段的同时，节约实验室建设投入。 图3 迪澳恒温扩增荧光检测箱 序号 产品名称 图片 技术参数 用途 数量 1 恒温扩增荧光检测仪 检测原理：基于实时荧光信号检测的恒温PCR技术，无需升降温即可完成实验，可用于微生物、动物源性等项目的实时检测。 检测孔：≥16孔；反应体积：10～100µL；设备移动后无需校准，兼容常规分子实验耗材。 检测仪器自带触屏显示功能。 简单的结果显示方式：1）扩增曲线；2）出峰时间；3）检测结果。 结果打印：设备有打印输出功能，可连接热敏打印机实时打印检测结果。 系统功能1：独立系统，通过屏幕操作；仪器中可实现数据的存储、调出、结果分析、统计和报告；全中文的检测系统操作界面和电脑端操作软件，软件免费更新。 系统功能2：具有数据通信端口，可上传检测数据。 动物源性食品，食源性致病菌等检测项目 1 2 迷你离心机 转速：10000转/分 相对离心力：约7500g 外型尺寸：176×156×121（mm） 样品处理量：8×2.0mL/1.5mL/0.5mL/0.2mL离心管 （另配0.5mL和0.2mL离心套管） 定时范围：5s—99min59s 样品处理 1 3 金属浴 控温范围：室温+5℃-100℃ 模块温度均匀性：≤±0.3℃ 温度显示精度：0.1℃ 最高温度：100℃ 产品重量：≤1kg 样品处理 1 4 快速混匀器 振荡方式：圆周振荡 周转直径：4.5 mm 振荡量(1个试管)：max. 50mL 振荡转速：3,300rpm 外形尺寸：110×70 mm 样品处理 1 5 移液器 规格100 - 1000μL 规格10 - 100μL 规格0.5 - 10μL 样品处理 3 表1 迪澳恒温扩增荧光检测系统设备与参数 附件2. DEAOU-308C技术参数表 描述 特性 工作电压 100～240V，50～60Hz 最适工作环境温度 15～30℃ 储存温度/环境相对湿度 ﹣20℃～+55℃/20%～85% 电源 19.5V6.15A 加热方式 半导体 温控范围 室温～85℃ 温度准确度 ±1℃ 模块温度均匀度 ±1℃ 热盖 具有热盖功能 检测孔 16孔 反应体积 10～100 µl 耗材 0.2ml离心管或8联管 检测方式 实时荧光信号检测 检测光源 LED灯 滤光系统 双色荧光滤光片（460-480nm，510-530 nm） 激发光波长 470nm 检测光波长 520nm 定性或定量 可进行定性和半定量检测 结果显示方式 1）扩增曲线；2）出峰时间；3）检测结果 判读方式 1）根据扩增曲线判读；2)仪器自动判读 检测试剂 开放式恒温荧光检测试剂 操作软件 安卓软件及计算机软件 控制方式 本机触屏或计算机 尺寸 长375mm×宽315mm×高135mm 净重量 4.45 kg 外接设备 电脑（自备） 技术资料 全套安装、操作和维护使用说明书 软件更新 软件免费更新 质量保修期 1年免费维修，3年维护 资质 ISO 9001质量认证，CQC认证 附件3 分子检测流程图 图4 动物源性分子检测流程图 附件4 性能评价报告 附件5 恒温扩增荧光检测仪医疗器械注册证 食品的质量和安全一直是社会关注的焦点，随着人们生活水平的提高，肉制品消费已经成为食品消费的主流，要确保广大消费者的切身利益，就要保证各种肉制品质量可靠。目前利用掺杂使假、以次充好等手段欺骗消费者而谋取暴利的事件屡屡出现，不仅扰乱了市场秩序，而且给消费者的身心健康带来许多负面影响。