化妆品中普鲁卡因胺等7种组分检测方案(液质联用仪)

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SSL-CA20-541Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-557 Email： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LC-MS/MS 测定化妆品中普鲁卡因胺等7种组分 LCMSMS-557 摘要：本文建立了使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 联用测定化妆品中普鲁卡因胺等7种组分的方法。化妆品样品采用乙用提取，液体水基类化妆品经过简单净化， LC-MS/MS分析；膏霜乳液类化妆品经过 PCX 固相萃取小柱净化后， LC-MS/MS 分析。普鲁卡因胺等7种化合物在 0.5~50 ng/mL浓度范围内线性关系良好。加标回收和精密度实验测试表明，方法准确度高，重复性好。该方法快速、有效，，可应对化妆品中普鲁卡因胺等7种禁用组分的风险监测需求。 关键词：超高效液相色谱三重四极杆质谱化妆品局部麻醉药 普鲁卡因胺、利多卡因等药物为临床上治疗心律失常的药物，也可用作局部麻醉药。该药物如果添加于化妆品中，可能会给人带来肌肉松弛等护肤的愉悦感。然而，过量使用这些药物可能导致胸痛、头晕、出现幻觉等症状，且人体本身会产生该类药物的耐药性。 《化妆品安全技术规范》(2015年版)规定，普鲁卡因胺等7种局部麻醉药为化妆品中的禁用组分。 普鲁卡因胺等7种局部麻醉药可以采用 LC 法或LCMSMS法进行检测。 《化妆品安全技术规范》 (2015 年版)第四章2.23列出了《普鲁卡因胺等7种组分》的检测方法，该方法以 LC 法定量，l， LCMSMS 进行辅助定性确证。 本文参照《化妆品安全技术规范》 (2015年版)中的方法，建立了 LCMS-8050 测定化妆品中普鲁卡因胺等7种成分的检测方法。该方法快速、准确，可有效应对化妆品中普鲁卡因胺等7种局麻药的风险监测工作。 1.1化合物信息 表1化合物信息 序号 中文名称 英文名称 CAS 分子式 分子量 1 普鲁卡因胺 Procainamide 614-39-1 C13H22CIN；0 271.79 2 普鲁卡因 Procaine 59-46-1 C13H20N202 236.31 3 氯普鲁卡因 Chloroprocaine 3858-89-7 C13H20CIN202 307.21 4 苯佐卡因 Benzocaine 94-09-7 CgHHNO， 165.19 5 利多卡因 Lidocaine 137-58-6 C4H2N0 234.34 6 丁卡因 Tetracaine 94-24-6 C15H24N202 264.36 7 辛可卡因 Cinchocaine 85-79-0 C20H29N302 343.46 1.2仪器 本实验采用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统，具体配置为： 系统控制器：CBM-20A脱气机：DGU-20A5输液泵： LC-30AD×2自动进样器：SIL-30AC柱温箱： CTO-20A质谱检测器： LCMS-8050色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.97 1.3分析条件 液相条件 色谱柱： Shim-pack GIST C18 (50 mm x2.1 mml.D.，2um， 岛津(上海)实验器材有限公司，PN：227-30001-02) 流动相：A相-5mM乙酸铵(含0.1%甲酸)；B相-甲醇； 流速： 0.3mL/min 柱温：40℃ 进样量：1uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为10%，洗脱程程见表2。 表2村梯度洗脱程序 Time(min) Module Command Value 0.70 泵 B.Conc 10 2.00 泵 B.Conc 60 4.00 泵 B.Conc 90 5.00 泵 B.Conc 90 5.10 泵 B.Conc 10 7.00 Controller Stop 质谱条件 接口温度：300C 分D L 温 度 ： 2 5 0℃ 析仪器： LCMS-8050 离子化模式：ESI+ 加热模块温度：400℃离子源接口电压：4.0kV 扫描模式：多反应监测(MRM) 雾化气：氮气 3.0 L/min 驻留时间：30ms 干燥气：氮气10.0 L/min 延迟时间： 3 ms 碰撞气：氩气 MRM参数：见表3 表3MRM优化参数 化合物 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias (V) CE (V) Q3 Pre Bias (V) 普鲁卡因胺 235.90 163.25* -12 -17 -18 120.20 -12 -28 -24 普鲁卡因 236.90 100.25* -18 -16 -20 120.20 -12 -27 -23 氯普鲁卡因 270.85 100.25* -10 -16 -20 154.10 -10 -28 -29 苯佐卡因 166.05 138.10* -11 -13 -29 94.15 -11 -18 -19 利多卡因 234.95 86.25* -13 -21 -19 58.05 -10 -36 -23 丁卡因 265.25 176.25* -11 -18 -19 72.20 -12 -24 -28 辛可卡因 344.30 271.25* -13 -22 -24 116.15 -12 -53 -22 注：*表示定量离子 1.4标准品的配制 7种普鲁卡因胺储备溶液来源于客户；浓度为250 mg/L，溶剂为甲醇。 混合标准中间液：准确移取100uL各单标于10mL容量瓶中，用甲醇定容，得到2500 ng/mL混合标准中间溶液； 标准曲线配制：以水为溶剂，将混合标准中间液逐级稀释至浓度为0.5、1、2、20、5、10、20、50 ng/mL的标准点，上机分析。 1.5样品前处理方法 液态水基类：准确称取0.5g均质样品，加入10mL乙腈，涡旋混匀后超声20min。加入4.0g无水硫酸镁和2.0g氯化钠，涡旋后，4000 rpm 离心5 min， 取上清液于离心管中。用10 mL 乙重重复提取一次，合并上层有机相。 从合并的有机相中取2mL，加入0.25g 无水硫酸镁和0.4g PSA粉末，涡旋后以4000 rpm 离心2 min。取0.5mL 上清液加入0.5mL含0.1.%甲酸的5 mmol/L 乙酸铵水溶液混匀，过 0.22 um 滤膜后，上机分析。 膏霜乳液类：称取 0.5g样品于 15mL离心管中，加入8mL1%三氯乙酸，2mL乙腈，涡旋l min， 5000 r/min 离心5 min， 上清液待固相萃取小柱净化。 PCX固相萃取小柱依次用3mL甲醇、5mL 1%三氯乙酸进行活化。将待净化的样品液流经小柱后，用3mL1%甲酸甲醇溶液淋洗小柱，弃去淋洗液， 再用10 mL的5%氨水甲醇洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，用甲醇定容至10 mL。取0.5 mL 上清液加入0.5 mL含0.1.%甲酸的5 mmol/L 乙酸铵水溶液混匀，过0.22um 滤膜后，上机分析。 结果与讨论 辛可卡因 图17种普鲁卡因胺类化合物MRM 色谱图(10 ng/mL) 2.2线性范围 按照1.4项下配制方法，配制标准曲线。以化合物浓度X为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归分析，7个化合物在0.5~50 ng/mL 浓度内线性良好，相关系数均大于0.995。以0.5 ng/mL浓度点使用3倍信噪比的方式计算检出限，7个化合物的检出限为 0.005~0.2ng/mL. 图27种普鲁卡因胺化合物标准曲线(部分) 表477种普鲁卡因胺标准曲线参数(线性回归) 化合物 线性范围 (ng/mL) 相关系数r 加权系数 准确度(%) 检出限 2((ng/mL) 普鲁卡因胺 0.5~50 0.9998 无 95~106 0.03 普鲁卡因 0.5~50 0.9999 1/C 98~103 0.05 氯普鲁卡因 0.5~50 0.9976 1/C 98~108 0.05 苯佐卡因 0.5~50 0.9995 1/C 95~106 0.2 利多卡因 0.5~50 0.9996 无 93~107 0.005 丁卡因 0.5~50 0.9958 1/C 85~104 0.01 辛可卡因 0.5~50 0.9971 1/C 87~106 0.005 2.3重复性 对10ng/mL混合标准溶液连续分析6次，计算重复性。结果见表5。7种化合物的峰面积 RSD 为 0.60%~3.17%，重复性良好。 表577种化合物重复性结果 (n=6) 化合物 保留时间 RSD，% 峰面积RSD，% 化合物 保留时间RSD，% 峰面积 RSD，% 普鲁卡因胺 0.38 1.13 利多卡因 0.16 2.37 普鲁卡因 0.22 3.03 丁卡因 0.08 2.37 氯普鲁卡因 0.05 3.98 辛可卡因 0.04 4.50 苯佐卡因 0.13 3.11 2.4方法准确性和精密度 取化妆水和美白乳液样品，分别按照1.5前处理方式中的液态水基类和膏霜乳液类进行处理，样品中均未检出7种普鲁卡因胺。向样品中添加浓度为0.16、0.4、1.6 mg/kg 3个水平的加标量，每个水平重复3次，进行加标回收率和精密度试验。表6为实验结果，其中，7种化合物在2种基质3个浓度水平下，平均回收率为80.5%~110.6%，相对标准偏差为 0.44%~7.31%。 表67 种化合物加标回收和精密度结果(n=3) 2.05 6.20 91.8 1.84 5.13 1.92 92.7 (mg/kg) (mg/kg) (%) RSD% 1.82 0.16 92.1 RSD% 1.29 5.21 94.4 2.64 1.18 94.7 1.32 2.52 6.55 6.91 0.71 4.61 3.30 0.82 95.5 2.30 普鲁卡因 95.5 0.81 91.2 0.46 氯普鲁卡因 苯佐卡因 1.60 利多卡因 N.D. 0.16 丁卡因 辛可卡因 注：N.D.表示未检出。 |结论 本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 联用测定化妆品中普鲁卡因胺等7种化合物含量的方法。该方法在7min 内完成7种化合物的检测。普鲁卡因胺等7种化合物采用外标法定量，线性范围 0.5-50 ng/mL， 相关系数>0.9958，检出限为 0.005~0.2 ng/mL。液态水基类化妆品采用乙腈提取，简单净化后上机分析；膏霜乳液类化妆品采用乙腈提取后，采用 PCX固相萃取小柱净化后上机分析。加标结果显示， 7种化合物在0.16、0.4和1.6 mg/kg3个浓度水平下，平均回收率为 80.5%~110.6%， 岛津应用云 相对标准偏差为0.44%~7.31%。本文所建立的方法快速、有效，可应对化妆品中 普鲁卡因胺等7种局麻药的日常风险监测工作。 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心 Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications Center 74 化妆品样品采用乙腈提取，液体水基类化妆品经过简单净化，LC-MS/MS分析；膏霜乳液类化妆品经过PCX固相萃取小柱净化后，LC-MS/MS分析。普鲁卡因胺等7种化合物在0.5~50 ng/mL浓度范围内线性关系良好。加标回收和精密度实验测试表明，方法准确度高，重复性好。