茶叶中合成着色剂检测方案

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DiMA'@A reliable partner for your lab 茶叶中合成着色剂的测定 SPE-HPLC法解决方案 合成着色剂因其色彩亮丽、性质稳定、价格低廉，成为食品工业常用的添加剂之一。它们通常是以苯、甲苯、萘等化工原料合成，长期食用对人体健康具有一定的毒性，尤其是对少年儿童。我国对食品中添加合成着色剂有严格的限制， GB 2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中收载的合成着色剂有11种，分别为柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、喹啉黄、赤藓红和酸性红，并对其允许使用的食品类型和使用限量做出了明确规定。 迪马科技参考《食品中合成着色剂的测定(征求意见稿)》，对于复杂基质-茶叶，自主开发了茶叶中人工合成着色剂的检测方法，避免了使用征求意见稿方法时可能会遇到的回收低等问题，结果更加稳定。 1、适用范围 本方案适用于茶叶中柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、喹啉黄、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、亮蓝和赤藓红11种合成着色剂的测定，定量限为3.0 mg/kg. 2标准品配制 单标储备液1000 ug/mL， 称取适量色素单标，用水配制成1000 pg/mL 的单标储备液。 混标中间液50 pg/mL，分别吸取 0.5 mL单标储备液 1000 pg/mL 于 10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成50 pg/mL 的混标中间液。 3、提取 取1.0g样品于200mL烧杯中，加入50 mL 50%乙醇水溶液，均质2 min， 将上清液转移至50 mL离心管中，8000 rpm 离心2 min， 准确收集 20 mL 上清液于另一50 mL 离心管中，加入4mL甲酸，混匀，待净化。 4、净化——ProElut PWA-2 300 mg/6 mL (Cat.#65820) (1)活 化： 依次用5mL 甲醇、5 mL10%甲酸水，流出液弃去； (2)上 样： 将上样液加入柱中，流出液弃去； (3)淋 洗： 依次加入5mL 水、5mL甲醇，流出液弃去； (4)洗 脱： 加入6 mL 15%氨水甲醇，收集洗脱液； (5)重新溶解： 将洗脱液在50℃下氮气吹至0.5 mL， 用乙酸铵(20mM， pH9.0)定容至 1 mL， 8000 rpm 离心2 min， 收集上清，上机分析。 5、分析条件 色谱柱： Diamonsil C18(2) 250x4.6mm， 5 um (Cat.#： 99603) 流 速：1.0 mL/min 北京：400-608-7719 成都：028-86612625 上海：021-61263966沈阳：024-22943513青岛：131-5685-9195 广州：020-85593520 石家庄：0311-66686220 哈尔滨：180-4537-3042 进样量：10pL 柱 温：35℃ 检测器： PDA 400-800 nm 流动相：A：乙腈 B： 0.02 mol/L 乙酸铵溶液 梯度设置 时间(min) 0 20 30 31 40 A(%) 5 30 37 5 5 B(%) 95 70 63 95 95 6、添加回收结果 茶叶中人工合成着色剂的 HPLC 检测的添加回收结果。 目标化合物 回收率(%) 迪马科技自主开发方法(本文方案) 重现《食品中合成着色剂的测定(征求意见稿)》 添加浓度 30mg/kg (加标量：50pg/mL，0.6mL) 添加浓度 3.0mg/kg (加标量： 50pg/mL，0.06mL) 添加浓度 30mg/kg (加标量： 50pg/mL， 1.2mL) 添加浓度3.0mg/kg (加标量：50ug/mL，0.12mL) 柠檬黄 91.03 99.58 83.21 93.68 新红 108.04 101.45 80.48 84.08 苋菜红 106.59 100.61 81.16 82.92 靛蓝 96.74 96.32 30.47 34.63 喹啉黄1 98.49 91.05 64.44 69.27 胭脂红 105.93 98.42 86.89 83.66 日落黄 99.72 101.96 72.72 67.52 喹啉黄2 107.64 100.25 77.82 78.67 诱惑红 115.29 97.56 74.52 80.46 酸性红 98.20 93.63 91.89 96.17 亮蓝 105.08 98.99 76.91 78.72 喹啉黄3 104.99 89.96 90.05 83.54 喹啉黄4 106.76 104.83 78.21 91.51 赤藓红 86.65 93.14 86.68 86.94 目标化合物 回收率(%) 绿茶 添加浓度 30mg/kg(加标量： 50pg/mL， 1.2mL) 添加浓度 3.0mg/kg(加标量： 50pg/mL， 0.12mL) 柠檬黄 83.21 93.68 新红 80.48 84.08 苋菜红 81.16 82.92 靛蓝 30.47 34.63 喹啉黄1 64.44 69.27 胭脂红 86.89 83.66 日落黄 72.72 67.52 喹啉黄2 77.82 78.67 诱惑红 74.52 80.46 酸性红 91.89 96.17 亮蓝 76.91 78.72 喹啉黄3 90.05 83.54 喹啉黄4 78.21 91.51 赤藓红 86.68 86.94 检测波长610nm 1柠檬黄 2喹啉黄 1 3喹啉黄2 4喹啉黄3 5喹啉黄4 0 2 10 20 30 Time (min) 检测波长415nm 北京：400-608-7719上海：021-61263966成都：028-86612625沈阳：024-22943513济南：136-2642-4277青岛：131-5685-9195 天津：400-633-6606 广州：020-85593520 重庆：023-62568657 311-66686220 石家庄：0 西安：158-0293-5126 哈尔滨：180-4537-3042 添加水平为 30mg/kg 的茶叶中11种合成着色剂检测液相色谱图 添加水平为 3.0mg/kg 的茶叶中11种合成着色剂检测液相色谱图 检测波长610nm 茶叶中11种合成着色剂(空白)液相色谱图 北京：400-608-7719 上海：021-61263966 天津：400-633-6606广州：020-85593520成都：028-86612625沈阳：024-22943513重庆：023-62568657石家庄：0311-66686220济南：136-2642-4277青岛：131-5685-9195西安：158-0293-5126哈尔滨：180-4537-3042 相关产品信息 货号 名称 规格 样品前处理 65820 弱阴离子交换固相萃取柱 ProElut PWA-2 300mg/6mL，30/pk 244358 12管防交叉污染真空 SPE 萃取装置 12位 4803 1，3，6mL柱管通用连接器 15/pk 4806 考克(控制流量) 15/pk 99011 真空/正压两用泵，无油 1/pk 99013 抽滤瓶套装(包括硅橡胶管2米，2L抽滤瓶及橡胶塞) 1/pk 30039 FitMax 针头式过滤器 Nylon 13mm，0.22um 100/pk 30040 FitMax 针头式过滤器 Nylon 13mm，0.45pm 100/pk 色谱柱及保护柱 99603 反相高效液相色谱柱 Diamonsil C18(2) 250×4.6mm， 5pm 6201 EasyGuard C18 保护柱 10×4.0mm 1/pk 2个柱芯+1个柱套 HPLC溶剂•缓冲盐•离子对试剂 50101 乙腈 HPLC及 4L 50108 无水乙醇 HPLC级 4L 50102 甲醇 HPLC级 4L 50138 乙酸铵 HPLC级 100g 50144 甲酸 HPLC级 50mL 通用色谱产品 52401B 瓶架/蓝色(现货) 50孔 52401A 瓶架/白色(现货) 50 孔 1034 样品瓶(棕色/螺纹) 2mL， 100/pk 1035 样品瓶盖/含垫(已经组装) 100/pk H80465 HPLC 进样针 25pL 红色产品货号#1034、#1035火热促销中.. 广州：020-85593520 石家庄：0311-66686220 哈尔滨：180-4537-3042 天津：庆：安： 上海：阳：岛：京：都：南：津：庆：安： 　合成着色剂因其色彩亮丽、性质稳定、价格低廉，成为食品工业常用的添加剂之一。它们通常是以苯、甲苯、萘等化工原料合成，长期食用对人体健康具有一定的毒性，尤其是对少年儿童。我国对食品中添加合成着色剂有严格的限制，GB 2760-2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》中收载的合成着色剂有11种，分别为柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、喹啉黄、赤藓红和酸性红，并对其允许使用的食品类型和使用限量做出了明确规定。　　迪马科技参考《食品中合成着色剂的测定(征求意见稿)》，对于复杂基质-茶叶，自主开发了茶叶中人工合成着色剂的检测方法，避免了使用征求意见稿方法时可能会遇到的回收低等问题，结果更加稳定。茶叶中合成着色剂的测定１适用范围本方案适用于茶叶中柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、喹啉黄、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、亮蓝和赤藓红11种合成着色剂的测定，定量限为3.0mg/kg。2标准品配制(1) 单标储备液1000μg/mL，称取适量色素单标，用水配制成1000μg/mL的单标储备液。(2) 混标中间液50μg/mL，分别吸取0.5mL单标储备液1000μg/mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成50μg/mL的混标中间液。3提取取1.0g样品于200mL烧杯中，加入50mL50%乙醇水溶液，均质2min，将上清液转移至50mL离心管中，8000rpm离心2min，准确收集20mL上清液于另一50mL离心管中，加入4mL甲酸，混匀，待净化。4净化ProElut PWA-2 300mg/6mL (Cat.# 65820)(1)活化：依次用5mL甲醇、5mL10%甲酸水，流出液弃去； (2)上样：将上样液加入柱中，流出液弃去； (3)淋洗：依次加入5mL水、5mL甲醇，流出液弃去； (4)洗脱：加入6mL15%氨水甲醇，收集洗脱液； (5)重新溶解：将洗脱液在50℃下氮气吹至0.5mL，用乙酸铵(20mM，pH9.0)定容至1mL，8000rpm离心2min，收集上清，上机分析。 5分析条件色谱柱：Diamonsil C18(2) 250x4.6mm，5μm (Cat.#：99603)流速：1.0mL/min    进样量：10μL柱温：35℃检测器：PDA 400-800nm流动相：A:乙腈    B:0.02mol/L 乙酸铵溶液梯度