霉菌中斜面转接培养检测方案(霉菌培养箱)

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一、开箱检查:打开包装箱，查看斜面是否破损，菌株编号与说明书是否一致。二、开箱检查:仔细阅读菌株说明书，准备2个新鲜平板或斜面。三、器材灭菌:斜面试管表面消毒后，转移至生物安全柜中，管口灼烧灭菌冷却备用。接种锄和接种铲在酒精灯外焰翻转灼烧灭菌3-5分钟，冷却备用，冷却后用接种锄在斜面上相距0.5cm处切两条平行线（与试管垂直）。四、切分斜面:换接种铲在两条平行线之间相距0.5cm处切两条平行线（与试管平行），形成0.5cm*0.5cm的小正方形菌块。五、霉菌转接:用接种铲挑取菌块平放到平板或斜面（固体琼脂表面）上（菌块正面朝上）。转接多个平板或斜面，重复以上操作即可。六、完成培养:平板正放，斜面倾斜放置于霉菌培养箱中培养。（参照菌种说明书上的培养条件设置温度）1、实验材料 根霉，毛霉，黑曲霉，青霉，土豆琼脂培养基，培养皿，载玻片，盖玻片，镊子，显微镜，小刀，U形管等。 2、实验步骤  （1）配置培养基：根据原料用量配置土豆培养基。配置时，先急火煮沸，在温火加热20min，若有浑浊出现，则需过滤，然后定容。包扎土豆培养基，甘油等其他用品。灭菌后取出备用。培养小室准备及灭菌 在培养皿底部铺一张略小于皿底的圆形滤纸片，滤纸片上依次放上“U”形载玻片搁架、载玻片、盖玻片-四片，盖上皿盖，牛皮纸包扎，于恒温干燥箱中121℃灭菌30min烘干备用。（2）琼脂薄片制作：①将稍微冷却的培养基，倒在培养皿中，做成薄平板。培养基应该要倒 得薄而均匀。注意无菌操作。②用解剖刀将琼脂薄平板切成边长不大于1cm的琼脂薄片。④用解剖刀将琼脂薄片移至小室载玻片上（一个载玻片上方两块薄片）。（3）取菌接种：用接种环挑取少量待观察的霉菌孢子（霉菌菌种的表面轻轻刮取即可），接种于固体培养基边缘，以便于霉菌生长。接种时只要将带菌的接种环在载玻片上轻轻碰几下即可。接种量要少，以免培养后菌丝过于稠密而影响观察。（4）加盖玻片：用无菌镊子将皿内的盖玻片盖在琼脂薄层上，用镊子轻压盖玻片，使盖玻片和载玻片之间的距离相当接近，但不能压扁。盖玻片不能紧贴载玻片，要彼此留有小缝隙，一是为了通气，二是使各部分结构平行排列，易于观察。（5）倒保湿剂：每皿倒入约2-3mL20%的经灭菌处理的甘油，使皿内滤纸完全湿润，以保持皿内湿度，盖上皿盖。制成载玻片湿室。（6）正置培养：将平皿置于27℃霉菌培养箱中培养一周。（7）观察：将培养好的载玻片取出，置于显微镜下直接观察。 3、实验结果及分析 （1）根霉：菌丝无隔，有假根、匍匐菌丝。假根着生处有向上直立的孢囊梗，其顶端膨大成孢子囊，底部为半球形囊轴。（2）毛霉：孢囊梗直接由菌丝出，顶端为球形孢子囊。（3）黑曲霉：菌丝有隔，气生菌丝分化为分生孢子梗（无隔），顶端 膨胀为球状顶囊。（4）青霉：菌丝有隔，分生孢子梗顶端不膨大，无顶囊，多次分枝成几轮小梗，小梗顶端长孢子。分生孢子梗呈扫帚状。七、如何让霉菌产孢子？一般微生物都会在逆境下产孢子，比如低温、紫外照射等恶劣的生存条件，有的情况下，阳光照射也能促使产孢。不同的菌的产孢条件还不太一样，要因菌而异，和培养基也有关。可以找找相关资料查查产孢培养基，可以试试水琼脂培养基（直接在水中加琼脂、无其他营养物质）。