LC-MS/MS检测牛奶中氯前列醇残留

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依据国家标准《GB 31659.6-2022 食品安全国家标准 牛奶中氯前列醇残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，建立了使用岛津三重四极杆液质联用仪测定牛奶中氯前列醇残留的方法，该方法灵敏度高，远优于标准中检出限为1.5 μg/kg的要求。氯前列醇在0.2 μg/L~100.0 μg/L浓度范围内线性良好，相关系数r在0.999以上。加标浓度为1、10和100 μg/kg的样品，回收率在95.7%~102.7%之间。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于牛奶中氯前列醇残留量的准确检测。SSL-CA23-039Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-748 LC-MS/MS 检测牛奶中氯前列醇残留 LCMSMS-748 摘要：本文建立了使用岛津超高效液相色谱三重四极杆质谱联用 测 定牛奶中氯前列醇残留量的方法。氯 前列 醇 在 0.2 ug/L~100.0 ug/L 浓度范围内线性良好，相关系数r在0.999以上。在高、中、低三个浓度下，化合 物的保留时间和峰面积的 RSD%分别在0.05%~0.12%和0.53%~4.24%之 间 ，仪器精密度良好。加标浓度为1、10 和 100 ug/kg 的样品，回收率在 95.7%~102.7%之间。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可 用于 牛奶中氯前列醇残留量的准确定量检测。 关键词：：三重四极杆液质联用仪 牛奶 氯前列醇 技术特点： *相较《GB31659.6-2022》，本方法中氯前列醇灵敏度更高，并 具有更宽的线性范围。 心使用自动进样器的同 时 注入预处理功能配制基质匹配标准曲线。 氯前列 醇 是一种生殖激素 ， 可诱导调控奶牛的发 情周期。为提高奶牛生产性能，借助外源性激素作用 于母牛卵巢，可使其按人为设定的预定要求发生变化，经过孕激素处理 的 母牛卵巢机能都处 于 相同阶段，从 而达到发情同期化，集中妊娠、集中分娩。但牛奶中 的残留性激素对人体的生殖系统和生殖功能造成严重 影响，1，食用残留性激素的牛奶或其制品，显著增加患 前列腺癌或更年期乳腺癌的几率。 为了保障人们的食品安 全 ，农业农村部 首 次发布 了 《GB 31659.6-2022食品安全国家标准牛奶中氯前列 醇残留量的测定液相色谱-串联质谱法》。本文参考 标准 ，建立了牛奶中氯前列醇药物残留的检测方法，该方法快速、简单、灵敏，可实现对牛奶中氯前列醇 的有效检测。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 Nexera LC-40 X3与三重四极杆质谱仪 LCMS-8045 联用系统。具体配置为： 系统控制器 SCL-40 自动进样器：：SIL-40C X3 液 夜 LC-40B 仪：LCMS-8050温 泵 质 谱 箱 CTO-40S 色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.114 在线脱气机： DGU-405 1.2分析条件 液相条件 色 谱 柱： Shim-pack Scepter C18-120 (100 mm×.2.1 mm 1.D，1.9 um)岛津 (上海)实验器材有限公司 ， P/N：227-31012-05 动 A相-5mM甲酸铵水溶液，B相-乙腈 流相 柱温 35℃ 流 速 ：0.3 mL/min 洗脱方式： 梯度洗脱，初始浓度为B 相 10%， 进样体积：5uL 时间程序见表1 表1 梯度洗脱程序 Time Module Command Value 0.50 Pumps Pump B Conc. 10 3.00 Pumps Pump B Conc. 90 4.00 Pumps Pump B Conc. 90 4.01 Pumps Pump B Conc. 10 7.00 Controller Stop 质谱条件 离 子 源：ESI，负离手 模式 OL管温度：250°℃ 接口电压：0.5kV 加热模块温度：4400°℃ 雾 化 气：氮气 3.0 L/min 接口温度：300℃ 干 燥 气：氮气10L/min 扫描模式：多 多反应监测 (MRM) 加 热 气：空气10L/min MRM 参 数：见表2 碰 撞 气：氩气(230 kPa) 表2 MRM 参数 化合物 化学分子式 CAS NO. 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bais(V) CE(V) Q3 Pre Bais(V) 氯前列醇 C22H29CIO。 40665-92-7 423.1 127.0* 12.0 28.0 24.0 295.0 15.0 17.0 21.0 *表示定 量 离子 样品前处理 参考《GB 31659.6-2022食品安全国家标准牛奶中氯前列醇残留量的测定液相色谱-串联质谱法》中7.1和 7.2样品提取与净化的方法 ■结果与讨论 3.1专属性 空白样品和 0.2 ng/mL 氯前列醇药物的 MRM 色谱图如图1所示，色谱峰分离良好，通道无干扰。 图1 空白样品和 0.2 ng/mL 氯 前列 醇 药物 的 MRM 色谱图 3.2校准曲线和检出限 校准曲线分析采用自动进样器的 同 时注入预处理功能，吸出5uL经前处理的空白样品萃取液作为基质溶液，之后吸出等量5 uL 的 各浓度 混 合标准溶液(0.2、1、4、10、20、40、100 ng/mL)，同时注入两种溶液，供 液相色谱 -串联质谱测定。自动进样器的同时注入方式设置如图2所 示 。 ↓ 图2自动进样器的同时注入方式设置 以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系 数。根据 0.2 ug/L标样数据，以3倍信噪比计算氯前列醇的方法检出限，各化合物检出限以及线性相关系数如 表3所示。 图3 氯前列醇标准曲线 表3氯前列醇的校准曲线及检出限 化合物 校准曲线 相关系数 R 准确度% 检测限 (ng/mL) 定量限(ng/mL) 氯前列醇 Y=(6993.037)X+(194.5206) 0.9995 82.2~109.3 0.01 0.03 3.3重复性实验 取 0.2、10和100 ug/L标准品溶液，连续进样6次，考察仪器的重复性，测定结果见表4。 表4氯 前 列醇保留时间和峰面积 重 复性结果(n=6) 化合物 RSD% (0.2 ug/L) RSD% (10 ug/L) RSD% (100 ug/L) R.T Area R.T Area R.T Area 氯前列醇 0.05 4.24 0.10 0.82 0.12 0.53 3.4加标回收率 取空白牛奶2g，加入混标工作液，使加标浓度为1、10和 100 ug/kg，样品经提取及净化后，按照1.2中 的分析条件测定氯前列醇的加标回收率，实际样品分析同样采用自动进样器的 同 时注入预处理功能，吸取5mM 乙酸铵：乙腈=7： 3 (v/v) 溶液 替 代混合标准溶液，平行测定3次，其回收率在95.7~102.7%之间。基质空白 样品与加标浓度为1 ug/kg 的样品对比图见图4，具体结果见表5。 图4 基质 空 白样品与加标浓度为 1 ug/kg 的 样品 对 比色谱图 表 5 氯 前 列 醇回收率结果(n =3) 化合物 加标浓度 1 ug/kg 加标浓度 10 ug/kg 加标浓度 100 ug/kg 回收率% RSD% 回收率% RSD% 回收率% RSD% 氯前列醇 96.8 3.27 95.7 3.93 102.7 0.72 结论 依据国家标准《GB 31659.6-2022食品安全国家标准牛奶中氯前列 醇 残留量的测定液相色谱-串联质谱法》，建立了使用岛津三重四极杆液质联用仪 测 定牛奶中氯前列醇残留的方法，该方法灵敏度高，远优于标准中检出 限为 1.5 ug/kg 的要求。氯 前列醇在 0.2 ug/L~100.0 ug/L 浓度范围内线性良好，相关系数r在0.999以上。加 标浓度为1、10和100 ug/kg的样品，回收率在95.7%~102.7% 之间。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于牛奶中氯前列醇残留量的准确检 测 。 岛津应用云