高效液相色谱法测定化妆品中己脒定二(羟基磺酸)盐等7种组分

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本文使用岛津高效液相色谱仪，参考《化妆品安全技术规范》（2022年版）征求意见稿建立了一种化妆品中己脒定二(羟基磺酸)盐等7种组分的测定方法。该方法采用双检测器（PDA+ELSD）的方式，优于标准中只使用单检测器（PDA）的检测方法，使分析所需的色谱柱（C18柱）种类更广泛，不再仅仅拘泥特定色谱柱；同时检出限也优于标准规定，因此，能更有效检测化妆品中的己脒定二(羟基磺酸)盐等7种组分。SSL-CA23-083Excellence in Science Excellence in ScienceLC-375 高效液相色谱法测定化妆品中己脒定二(羟 基磺酸)盐等7种组分 LC-375 摘要：本文利用岛津高效液相色谱仪，建立一种简便、快速、准确检测化妆品中己脒定二(羟基磺酸)盐等7种组分的分析方法，以应对《化妆品安全技术规范》(2022年版)征求意见稿中，第四章4.3己脒定二(羟基磺酸)盐等7种组分的检 测 。该方法采用外标法定量，采用二极管阵列和蒸发光散射检测器同时检 测 分析，其保留时 间和峰面积重复性良好。加标回收实验中，各物质回收率在93.6~108.4%之间。该方法操作简捷，为化妆品 检 测 提供很好的参考 。 关键词： HPLC 抗菌 化妆品 技术特点： *可应对《化妆品安全技术规范》 (2022年版)征求意见稿中，第四章4.3项目。 小改进了标准规定的分析方法，用常规C18柱即可满足要求。 心该方法检出限和定量限优于标准要求。 肤，因此对化妆品中的这7种抗菌剂进行监测是必要的。 本文利用岛津高效液相色谱仪，串联PDA 和蒸发 光散射检测器，通过液体浸泡提取法，建立了化妆品中 己脒定二(羟基 磺 酸)盐等7种组分的检测方法，供检 测人员参考。 实验部分 1.1仪器 本实验使用岛津 Prominence 系列高效液相色谱系统。具体配置为： 系统控制器 ：CBM-20A 自动进样器 器：SIL -20AC XR 柱温 箱 CTO-20AC 输液泵 LC -20AD XR 脱气 机：DGU-20AS 检测器 SPD-M20A， ELSD-LTⅢI 色谱工作站： LabSolu t ions Ver. 6.102 1.2分析条件 色 谱 柱： ShimNex CS C18 (250 mm x4.6 mm l.D.， 5 um， 岛津(上海)实验器材有限公司，P/N：380-01230-01) 动 A相：0.1%三氟乙酸 +0.0067 g EDTA· 2Na； B 相 ：乙腈 强 ：1mL/min PDA检测波长： 210nm、270nm 进样体积 只：10pL ELSD 温 度 ： 50°C 洗脱方式：：梯度洗脱， B相起始浓 度 为10%，时间程序如表1所示。 表1 梯度洗脱时 间 程序 时间 (min) 单元 处理命令 值 0 泵 B Conc 10 40.0 泵 B Conc 90 43.0 泵 B Conc 90 43.1 泵 B Conc 10 51 控制器 STOP 1.3标准溶液的配置 取各组分标准物质适量，用甲醇定容配制成含 己 脒定 二 (羟基磺酸)盐0.40 mg/mL、氯己定0.60 mg/mL、十二烷基三甲基溴化铵 8.0 mg/mL、十二烷基二甲基苄基 氯 化铵、苄索氯铵、十四烷基二甲基苄基 氯 化铵、十 六烷基二甲基苄基氯化铵 2.0 mg/mL的储备溶液，再以提取溶剂(1%甲酸水溶液：甲醇=1：1)稀释，配 制 成以下浓度的混合标准工作溶液，待上机分析 。 表2混合标准系列溶液 NO. 化合物名称 混合标准系列溶液浓度 (ug/mL) STD1 STD2 STD3 STD4 STD5 STD6 1 己脒定二(羟基磺酸)盐 2.0 5.0 10 20 40 80 2 氯己定 3.0 7.5 15 30 60 120 3 十二烷基三甲基溴化铵 40 100 200 400 800 1600 4 十二烷基二甲基苄基氯化铵 10 25 50 100 200 400 5 苄索氯铵 10 25 50 100 200 400 6 十四烷基二甲基苄基氯化铵 10 25 50 100 200 400 7 十六烷基二甲基苄基氯化铵 10 25 50 100 200 400 1.4样品前处理方法 按下图所示流程进行样品前处理(粉类基质样品先加入1mL水，腊基样品先加入1~2 mL四氢呋喃 ，使样 品均匀分散，再加入提取溶剂超声提取) ■结果与讨论 2.1标准溶液色谱图 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 min 图 1己脒定 二 (羟 基磺酸)盐 等7种组分标 准 溶液色谱图 (1.己脒 定 二 (羟基磺酸)盐；2.氯己定；3.十二 烷 基 三甲基 溴 化铵；4.十 二烷 基 二 甲基 苄 基氯化铵；5.苄索氯铵；6.十四烷基二甲基苄基氯化铵；7.十六烷基二甲基苄基氯化铵 ) 表3己 脒 定二(羟基磺酸)盐等7种组分信息 NO. 化合物名称 英文名称 CAS 号 保留时间 (min) 1 己脒定二(羟基磺酸)盐 2-hydroxyethanesulphonic acid 659-40-5 13.74 2 氯己定 Chlorhexidine 55-56-1 18.07 3 十二烷基三甲基溴化铵 Dodecyltrimethylammonium bromide 1119-94-4 27.08 4 十二烷基二甲基苄基氯化铵 Dodecyldimethylbenzylammonium chloride 139-07-1 30.87 5 苄索氯铵 Benzethonium chloride 121-54-0 31.31 6 十四烷基二甲基苄基氯化铵 Tetradecyldimethylbenzylammonium chloride 139-08-2 34.40 7 十六烷基二甲基苄基氯化铵 Benzyldimethylhexadecylammonium chloride 122-18-9 37.57 2.2线性范围 按照1.3配制成各浓度标准溶液，以各目标物浓度为横坐标，目标物峰面积为纵坐标，以外标法绘制标准曲线，所得校准曲线线性关系良好，线性相关系数大 于 0.999。曲线结果如下图、线性方程及相关系数如下表4所示。 图22己 脒定 二 (羟基磺酸)盐等7种组分标准曲线 表4 校准曲线参数 NO. 化合物名称 相关系数r 准确度度(%) 检测限灵((ug/g) 定量限(ug/g) 1 己脒定二(羟基磺酸)盐 0.9999 94.8~101.5 0.05 0.15 2 氯己定 0.9999 79.3~102.5 0.1 0.3 3 十二烷基三甲基溴化铵 0.9999 91.52~103.6 0.05 0.15 4 十二烷基二甲基苄基氯化铵 0.9998 68.8~103.3 0.1 0.3 5 苄索氯铵 0.9994 52.0~105.1 0.1 0.3 6 十四烷基二甲基苄基氯化铵 0.9997 58.0~104.7 0.1 0.3 7 十六烷基二甲基苄基氯化铵 0.9999 86.1~101.7 0.1 0.3 2.3重 复性考察 按照1.3步骤配制低、中、高三个浓度标准溶液(分别对应 STD1、STD3、STD5)，连续进样6次，考察 分析方法保留时间和峰面积的重复性。结果表明：各组分保留 时 间 的 RSD% 在 0.01%-0.08%之间，峰面积的 RSD% 在 0.04%-4.58%之间，方法重复性良好，仪器精密度良好。结果见表5。 表5重复 性 测试(n=6) NO. STD1 (RSD%) STD3 (RSD%) STD5 (RSD%) 化合物名称 R.T. Area R.T. Area R.T. Area 1 己脒定二(羟基磺酸)盐 0.06 1.05 0.03 0.15 0.04 0.79 2 氯己定 0.05 0.29 0.02 0.16 0.04 0.04 3 十二烷基三甲基溴化铵 0.03 4.48 0.08 4.58 0.02 2.76 4 十二烷基二甲基苄基氯化铵 0.02 1.50 0.02 0.57 0.02 0.28 5 苄索氯铵 0.02 1.38 0.02 0.50 0.02 0.21 6 十四烷基二甲基苄基氯化铵 0.02 3.36 0.02 1.95 0.02 0.58 7 十六烷基二甲基苄基氯化铵 0.01 1.10 0.01 0.44 0.02 0.20 2.4加标回收实验 按照1.4步骤 中制 备样品和加标样品，三个水平加标浓 度 分别对应 STD1、STD3、STD5 这三个浓度点，结果如下表6所示。测试结果显示：各水 平 的加标回收率在93.6%~108.4%之间，相对标准偏差 RSD% 在 0.54~4.92% 之间 。 表6样品加标 实 验结果(n=6) NO. 化合物名称 样品浓度 (ug/mL) 加标 (STD1) 加标 (STD3) 加标 (STD5) 回收率% RSD% 回收率% RSD% 回收率% RSD% 1 己脒定二(羟基磺酸)盐 N.D. 95.7 1.53 95.9 1.71 102.4 1.87 2 氯己定 N.D. 94.6 1.53 95.9 1.78 101.9 1.79 3 十二烷基三甲基溴化铵 N.D. 96.6 1.75 100.2 4.92 108.4 1.12 4 十二烷基二甲基苄基氯化铵 N.D. 93.9 2.51 100.0 2.99 107.8 0.54 5 苄索氯铵 N.D. 94.3 1.43 99.4 2.48 107.4 0.89 6 十四烷基二甲基苄基氯化铵 N.D. 94.3 2.00 101.1 3.78 106.3 1.26 7 十六烷基二甲基苄基氯化铵 N.D. 93.6 1.86 98.0 1.93 105.8 1.92 注 ：N.D.表示未检出 。 结论 本文使用岛津高效液相色谱仪，参考《化妆品安全技术规范》 (2022年版)征求意见稿建立了一种化妆品 中 己脒定二(羟基磺酸)盐等7种组分的测定方法。该方法采用双检 测 器 (PDA+ELSD) 的方式，优 于 标准 中 只 使用单检测器 (PDA)的检测方法，使分析所需的色谱柱 (C18柱)种类更广泛，不再仅仅拘泥特定色谱柱；同 时检出限 也 优于标准规定，因此，能更有效检测化妆品中的 己 脒定二(羟基 磺 酸)盐等7种组分。 岛津应用云