【设备更新】NanoTemper助力小分子靶向无序蛋白（IDP）的研究

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NanoTemper Monolith及Promethus助力小分子靶向无序蛋白（IDP）的研究前列腺癌是全球男性最常见的癌症之一。早期、低级别的癌症可以通过手术或放射成功治疗。对于患有前列腺以外的高级别肿瘤的患者，标准治疗与雄激素治疗相结合。雄激素消融阻断前列腺肿瘤赖以生长和存活的男性激素，最初是有效的；然而，在没有雄激素的情况下，前列腺癌会再次生长，并发展为更具侵袭性的形式，称为去势抵抗型前列腺癌（CRPC）。抗去势前列腺癌患者不可避免地会对抗雄激素疗法产生耐药性，部分原因是雄激素受体（AR）突变或剪接变体能够恢复AR信号。上海奕拓生物和上海中国科学院生物与化学交叉研究中心朱继东/朱光亚团队合作的研究显示配体活化的AR可以形成转录活性的聚合物。AR的结构化和非结构化区域都有助于AR的有效相分离，无序N端起主要作用。AR液-液相分离行为具有转录活性和抗雄激素功效。抗雄激素可以以配体独立的方式促进AR抗性突变体的相分离和转录活性。该研究进行了基于相分离的表型筛选，并鉴定了ET516分子，ET516特异性破坏AR聚合物，有效抑制AR转录活性，并抑制表达AR抗性突变体的前列腺癌细胞的增殖和肿瘤生长。研究的结果表明液-液相分离是一种新的耐药机制，并表明靶向相分离可能为药物发现提供一种可行的途径。https://doi.org/10.1038/s41589-022-01151-yIF: 16.174 Q1在这项研究中，来自于NanoTemper的微量热泳动MST互作技术以及nanoDSF蛋白稳定性技术发挥了重要的作用。图注：微量热泳动(MST)实验，作者用AR (NTD，1-555aa)–mEGFP蛋白与不同浓度的ET516（蓝色）以及Enza（红色）孵育进行MST实验。mEGFP蛋白用作阴性对照（绿色）。使用亲和力分析软件拟合数据。结果表明，ET516与NTD的亲和力Kd值25µM，表明ET516可以作为很好的候选分子。图注：与ET516孵育的AR AF-1（144-450 aa，0.3 mg/mL）中的TSA测定加热过程从25℃增加到81.5℃，升温速率为1℃/min。记录发射强度比（Em350nm\/Em330nm），分析荧光强度比（左图）和一阶导数（右图）。 监测蛋白内源荧光的nanoDSF实验显示，ET516处理后AR AF-1中的荧光比率呈剂量依赖性下降，进一步证实了ET516和AF-1的相互作用。热位移TSA结果表明，AF-1是典型的固有无序蛋白，其在加热过程中没有明显的发射强度变化；然而，与ET516孵育诱导了AF-1熔化温度的剂量依赖性变化，表现为球状蛋白，表明ET516与重新分布后稳定的构象AF-1结合。Promethus系列仪器通过内源荧光检测，无需加入染料，对缓冲液没有要求，高精准的检测精度可以保证即使是极小结构变化造成的Tm值shift都可以很好表征。 对于固有无序蛋白，因为其蛋白的无序性的特性，其他常规方法难以进行检测。在这篇工作中，通过MST技术及nanoDSF技术，很好的筛选到目的分子。Monolith系列分子互作仪基于MST技术，不依赖于分子量的改变，蛋白用量少，对于蛋白聚集耐受度高，可以轻松表征不同类型的分子间相互作用。生物分子互作仪 Monolith XPromethus系列仪器，以nanoDSF技术为核心，通过检测蛋白内源荧光监测蛋白的稳定性，该技术检测蛋白浓度宽泛，低浓度也可轻松表征，媲美DSC的高精准检测结果，快速高通量的检测速度，在小分子筛选上具有不可比拟的优势。蛋白稳定性分析仪 PR PantamoTEMPER M O TEMPER NanoTemper Monolith 及 Promethus 助力小分子靶向无序蛋白 (IDP) 的研究 前列腺癌是全球男性最常见的癌症之一。早期、低级别的癌症可以通过手术或放射成功治疗。对 于患有前列腺以外的高级别肿瘤的患者，标准治疗与雄激素治疗相结合。雄激素消融阻断前列腺 肿瘤赖以生长和存活的男性激素，最初是有效的；然而，在没有雄激素的情况下，前列腺癌会再 次生长，并发展为更具侵袭性的形式，称为去势抵抗型前列腺癌 (CRPC)。抗去势前列腺癌患 者不可避免地会对抗雄激素疗法产生耐药性，部分原因是雄激素受体 (AR)突变或剪接变体能够 恢复 AR 信号。 上海奕拓 生 物 和 上海中国科学院生物与 化 学交叉研究中心朱继东/朱光 亚 团 队 合作的研究显示 配 体 活 化 的 AR 可 以 形成转 录 活性的聚合物。AR的结构化和非结构化区域都有助于AR的有效相分 离，无序N端起主要作用。AR 液-液相分离行为具有转录活性和抗雄激素功效。抗雄激素可以以 配体独立的方式促进AR 抗性突变体的相分离和转录活性。该研究进行了基于相分离的表型筛 选，并鉴定了 ET516 分子， ET516特异性破坏AR聚合物，有效抑制 AR 转录活性，并抑制表达 AR 抗性突变体的前列腺癌细胞的增殖和肿瘤生长。研究的结果表明液-液相分离是一种新的耐药 机制，并表明靶向相分离可能为药物发现提供一种可行的途径。 https：//doi.org/10.1038/s41589-022-01151-y/F ：16.1744Q1 Targetingandrogen receptorphase separationtoovercome antiandrogen resistance R ece iv ed ： 22 Ja n u a ry 2022 J ingjing XieO124， Hao He ， Wenna Kong "， Ziwen L i '， Zhenting Gao?，Daoqing Xie ’， Lin Sun "， Xiaofei Fa n ’， Xi a ngqing Jiang ，Qiangang Zheng ， A ccep t ed：25 Au gust 2022 Guo L i， Jidong ZhuO a nd Guangya ZhuO13 在这项研究中，来 自于 N a n o T e m pe r 的微量热泳动 M ST 互作技术以及 na no D S F 蛋白稳定性技 术发挥了 重 要的作用。 MST ET516/NTD-EGFP Enza /N T D-EGFP ET516/E G FP 图注：微量热泳动(MST)实验，作者用 AR (NTD， 1-555aa)-mEGFP 蛋白与不同浓度的ET516(蓝色)以及 Enza(红色 )) 孵育进行 MST 实验。 mEGFP 蛋白用作阴 性对照(绿色)。使用亲和力分析软件拟合数据。结果表明， ET516 与 NTD 的亲和力 K.值 25uM， 表明ET516 可以作为很好的候选分子。 Thermal shift 图注：与E T 516孵育的 AR AF-1 (144-450 aa， 0.3 m g/mL) 中的 TSA测定 加热过程从25℃增加到81.5℃，升温速率为 1℃/min。记录发射强度比 (Em350nmVEm330n m)，分析荧光强度比(左图)和一阶导数(右图)。 监测蛋白内源荧光的 nanoDSF 实验显示， ET516 处理后 ARAF-1中的荧光比率呈剂量依赖性下 降，进一步证实了 ET516禾 AF-1的相互作用。热位移 TSA 结果表明， AF-1是典型的固有无序 蛋白，其在加热过程中没有明显的发射强度变化；然而，与ET516孵育诱导了 AF-1熔化温度的 剂量依赖性变化，表现为球状蛋白， 表明ET516与重新分布后稳定的构象 AF-1结合。 P r om ethu s 系 列 仪器通过内源荧光检测 ，无需加入染料 ，对缓冲液没 有 要求，高精准 的 检测精 度 可以 保 证 即 使是极小结构变 化 造成的 Tm 值 shi ft 都可以很好表征。 对于固有无序 蛋白 ，因 为其 蛋 白的无序性的特性，其 他常规方法难以进行检测。在这篇工作中，通过 M S T 技术及 nanoDSF 技 术，很好的筛选到 目 的分子。 M o nolith 系列分子 互 作 仪 基于 M ST 技术，不依赖 于 分子量的改变，蛋白用量少，对 于 蛋白聚集 耐 受 度高，可以轻松表征不同类型的分子间相互作用。 生物分子互作仪 Monolith X Promethus 系列仪器，以 nanoDSF 技术为核心，通过检测蛋白内源荧光监测蛋白的稳定性，该技术检测蛋白浓度宽泛，低浓度也可轻松表征，媲美 DSC 的高精准检测结果，快速高通量的检 测速度，在小分子筛选上具有不可比拟的优势。 蛋白稳定性分析仪 PR Panta