高效液相色谱法测定巧克力中三聚氰胺

智能文字提取功能测试中

为加强市场监督，保障食品安全GB/T 22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》标准中规定了3种测定运料乳与乳制品中三聚氰胺的方法。本方案参考上述标准中高效液相色谱法，对巧克力样品进行相关分析，保障食品安全，保护人类健康。部分数据结果如下，下载可查看详细报告：1.三聚氰胺三聚氰胺标样（20μg/mL）典型谱图1.三聚氰胺巧克力样品测定谱图文件号： FLYQ-AD-FA-01浙江福立分析仪器股份有限公司成都应用中心 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法分析报告 一、参考标准 依据国家标准《GB/T 22388-2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》 二、方法介绍 试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱测 定，外标法定量。 三、试剂和材料 3.1试剂 3.1.1乙腈：：色谱纯。 3.1.2甲醇：色谱纯。 3.1.3氨水：分析纯，含量为25%-28%。 3.1.4三氯乙酸：分析纯。 3.1.5柠檬酸：分析纯。 3.1.6辛烷磺酸钠：色谱纯。 3.1.7甲醇水溶液：准确量取 50mL 甲醇和 50mL水，混匀后备用。 3.1.8三氯乙酸溶液 (1%)：准 准确称取 5g三氯乙酸于500mL 容量瓶中，用水溶解并定容至 刻度，混匀后备用。 3.1.9氨化甲醇溶液 (5%))：：准确量取 5mL氨水和95mL甲醇，混匀后备用。 3.1.10离子对试剂缓冲液：准确称取 2.10g柠檬酸和2.16辛烷磺酸钠，加入约980mL 水溶 解，定 定容至1L备用。 3.1.12三聚氰胺标准品： CAS 108-78-01，纯度 99.44%，有证书。 3.1.13阳离子交换固相萃取柱： CNW Poly-Sery MCX SPE 混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯苯基高聚物，60mg， 3mL。 3.1.14微孔滤膜：0.45um， 有机相。 3.1.15氮气：纯度 99.999% 邮编： 610052 分析 员 ：刘海侠赵倩 审核：金迁 日期：2021.7.22. 3.2仪器设备 3.2.1高效液相色谱仪：福立LC5090 高效液相色谱仪，配备 LC5090 在线脱气机、LC5090二元高压输液泵、LC5090自动进样器、LC5090 柱温箱、LC5090 紫外检测器。 3.2.2分析天平：精度 0.0001g 。 3.2.3 50mL 具塞离心管。 3.2.4 10mL塑料离心管。 3.2.5高速离心机。 3.2.6涡旋混合器。 3.2.7流动相抽滤装置。 3.2.8 MultiVap-10 定量平行浓缩仪。 3.2.9固相萃取装置。 四、溶液配制 4.1标准溶液配制 4.1.1三聚氰胺标准储备溶液：准确称取 13.3mg三聚氰胺标准品于 10mL 容量瓶中，用甲 醇水溶液 豆((3.1.7)溶解并定容至刻度，配制成浓度为 1.33mg/mL的标准储备液 友 ，，于4℃避 光保存 。 4.1.2三聚氰胺标准使用溶液：吸取 1.00mL三聚氰胺标准储备液(1.33mg/mL)，用甲醇水 溶液(3.1.7)稀释定容至10mL， 配制成浓度为 133ug/mL 的标准使用液，于4℃避光保存。4.1.3标准曲线绘制：吸取不同体积的三聚氰胺标准使用溶液 (133ug/mL)，用流动相稀释，配成浓度为0.44，，00.8， 2.0， 20， 40， 80ug/mL的三聚氰胺标准系列溶液。 五、分析结果 5.1试剂空白谱图 邮编： 610052 审核：金迁 日期：2021.7.22. [min] 图1证 试剂空白谱图 5.2三聚氰胺标准溶液典型谱图及结果 [min] 图2三聚氰胺标准溶液谱图 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积|minl luAUI LuAU*s] 1 三聚氰胺 13.041 123421.8 1583924.1 123421.8 1583924.1 系统评价表 柱长：250mm 死时间： 峰序 组分名 保留时间 半高峰宽 容量 理论 分离度 拖尾 minl Iminl 因子 塔板 因子 1 三聚氰胺 13.041 0.19985 0.0000 23589 0.000 0.975 邮编： 610052 审核：金迁 日期：2021.7.22. 5.3重复性实验 图3 三聚氰胺标准溶液八针重复性谱图 峰序 组分名 保留时间 保留时间 面积 面积 峰高 峰高 平均值RSD 平均值 RSD 平均值 RSD Iminl [%] luAU*s [% luAU % 1 三聚氰胺 13.097 0.066 3218568.4 0.149 247949.5 0.149 5.4标准曲线 分别将一系列不同浓度的三聚氰胺标准溶液(4.1.3)各 20pL， 进行 HPLC分析。然后以峰 面积为纵坐标，以含量为横坐标，绘制标准曲线。 5.4.1三聚氰胺标准溶液(0.4ug/mL)谱图及结果 [min] 地址：四川省成都市成华区成致路50号3栋2单元3楼 邮编： 610052 分析 员 ：刘海侠赵倩审核：金迁 电 话 ：15657600027日期：2021.7.22. 图4 三聚氰胺标准溶液(0.4ug/mL)谱图 分析结果表 峰序 组分名 保留时间min 峰高LuAU」 峰面积 LuAU*s 1 三聚氰胺 13.057 2496.5 32122.4 2496.5 32122.4 系统评价表 柱长：250mm 死时 间 ： 5.4.2三聚氰胺标准溶液 (0.8ug/mL)谱图及结果 图5三聚氰胺标准溶液(0.8ug/mL)谱图 分析结果表 系统评价表 柱长：250mm 死时间： 峰序 组分名 保留时间[min」 半高峰宽Iminl 容量因子 理论塔板 分离度 拖尾 因子 1 三聚氰胺 13.038 0.19846 0.0000 23911 0.000 1.004 邮编： 610052 审核：金迁 日期：2021.7.22. 5.4.3三聚氰胺标准溶液(2.0ug/mL)谱图及结果 图6三聚氰胺标准溶液(2.0ug/mL)谱图 分析结果表 系统评价表 5.4.4三聚氰胺标准溶液(20ug/mL)谱图及结果 图7 三聚氰胺标准溶液 (20ug/mL)谱图 地址：四川省成都市成华区成致路50号3栋2单元3楼 邮编： 610052 分析 员 ：刘海侠赵倩 审核：金迁 日期：2021.7.22. 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 minl luAUI luAU*s 1 三聚氰胺 13.041 123421.8 1583924.1 系统评价表 柱长：250mm 死时间： 5.4.5三聚氰胺标准溶液 (40ug/mL)谱图及结果 图8三聚氰胺标准溶液(40ug/mL)谱图 分析结果表 244929.7 3226132.7 系统评价表 柱长：250mm 死时间： 峰序 组分名 保留时间 半高峰宽 容量 理论 分离度 拖尾 minl min 因子 塔板 因子 1 三聚氰胺 13.253 0.20436 0.0000 23297 0.000 0.951 邮编： 610052 审核：金迁 日期：2021.7.22. 5.4.6三聚氰胺标准溶液 (80ug/mL)谱图及结果 图9三聚氰胺标准溶液(80ug/mL)谱图 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 minl 峰高 峰面积LuAU」 LuAU*s」 1 三聚氰胺 13.260 465209.4 6400829.8 465209.4 6400829.8 系统评价表 柱长：250mm 死时间 ： 5.4.7三聚氰胺标准曲线方程及相关系数 组分 [三聚氰胺 ]：曲 线 方程： C i =0.0751865+1.24739E-005*A i 校 正 因 子 ：f 0=0.0751865， fl =1.24739E-005相关 系 数 ：r ^2=0.99997 地址：四川省成都市成华区成致路50号3栋2单元3楼邮编： 610052分析 员 ：刘海侠赵倩审核：金迁 电 话 ：15657600027日期：2021.7.22. 5.5检出限 5.5.1三聚氰胺标准溶液 (0.4ug/mL))七针重复性谱图 图10三聚氰胺标准溶液 (0.4ug/mL)七针重复性谱图 峰序 组分名 平均时间时间RSD% 平均面积 面积RSD%平均峰高 峰高RSD% 平均含量 含量RSD%含量最小值 含量最大值谱图数 1 三聚氰胺 13.063 0.033 32071.0 0.760 2473.7 0.822 0.1359 170.723 0.0000 0.47597 5.5.2三聚氰胺检出限结果 以取样2.0g计，本方法的检出限、定量限如下表所示： 组分名 含量 [ug/mL] 含量 [ug/mL] 含量 [ug/mL] 含量 lug/mLJ 含量 [ug/mL] 含量 [ug/mL] 含量 [ug/mL] 检出限 [mg/kg] 定量限 [mg/kg] 三聚氰胺 0.4692 0.4753 0.4753 0.4762 0.4794 0.4752 0.4759 0.025 0.25 5.6奶粉样品中三聚氰胺谱图及回收率结果 5.6.1奶粉试样空白 图11 奶粉试样空白谱图 地址：四川省成都市成华区成致路50号3栋2单元3楼 邮编： 610052 审核：金迁 日期：2021.7.22. 分析结果表 峰序 组分名 保留时间|min 峰高 uAU 峰面积 luAU*s 含量 [ug/gJ 1 三聚氰胺 13.033 840.6 11197.8 0.5372 总计： 840.6 11197.8 0.5372 5.6.2奶粉样品谱图及结果 [min1 图12奶粉样品谱图 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 |minl 峰高 [uAU] 峰面积 LuAU*s」 含量 Lug/g」 1 三聚氰胺 13.100 15070.5 196533.0 6.3168 总计： 15070.5 196533.0 6.3168 分析结果表 注：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值为 0.0274，为算术平均值6.3455的0.43%，符合不得超过算术平均值10%的要求。 5.5.3奶粉样品加标三聚氰胺 (10mg/kg)谱图及回收率结果 邮编： 610052 分析 员 ：刘海侠赵倩审核：金迁 电 话 ：15657600027日期：2021.7.22. 图13奶粉样品中加标三聚氰胺 (10mg/kg) 谱图 分析结果表 峰序 组分名 保留时间min| 峰高[uAU] 峰面积luAU*s| 含量 [ug/g] 1 三聚氰胺 13.065 34589.5 488813.1 15.4315 总计： 34589.5 488813.1 15.4315 总计： 34589.5 488813.1 15.4315 分析结果表 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量minl LuAUJ luAU*sl [ug/g] 1 三聚氰胺 13.060 34486.8 487441.9 15.3887 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量minl luAU uAU*s Lug/g」 1 三聚氰胺 13.064 34584.1 488908.6 15.4345 总计： 34584.1 488908.6 15.4345 奶粉中三聚氰胺(mg/kg) 试样空白(mg/kg) 加标量(mg/kg) 测定值 (mg/kg) 加标回收率/% 相对标准偏差% 加标回收率范围/% 5.81 0.54 10 15.43 90.8 0.25 90.4~90.8 15.39 90.4 15.43 90.8 注：添加浓度为10mg/kg，回收率在90.4~90.8%之间，相对标准偏差为 0.25%，符合回收率在80%-110%之间，相对标准偏差小于10%的要求。 5.7液体奶样品中三聚氰胺谱图及回收率结果 5.7.1液体奶试样空白 [min] 图14 液体奶试样空白谱图 地址：四川省成都市成华区成致路50号3栋2单元3楼 邮编： 610052 分析 员 ：刘海侠赵倩审核：金迁 电 话 ：15657600027日期：2021.7.22. 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量 [min] LuAU] luAU*s [ug/g] 三聚氰胺 13.071 313.4 4344.3 0.3234 总计： 313.4 4344.3 0.3234 5.7.2液体奶样品谱图及结果 图15液体奶样品谱图 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 min」 luAU luAU*s Lug/g」 三聚氰胺 13.124 6295.6 80575.5 2.7007 总计： 6295.6 80575.5 2.7007 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量min| luAU uAU*s| [ug/g] 1 三聚氰胺 13.125 6286.4 80169.3 2.6880 注： 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值为 0.0064，为算术平均值 2.6912的0.24%，符合不得超过算术平均值10%的要求。 邮编： 610052 审核：金迁 日期：2021.7.22. 5.7.3液体奶样品加标三聚氰胺 (10mg/kg)谱图及回收率结果 图16 液体奶样品中加标三聚氰胺((10mg/kg)谱图 分析结果表 分析结果表 分析结果表 1 三聚氰胺 13.063 26998.6 359987.5 11.4141 总计： 26998.6 359987.5 11.4141 液态奶中三聚氰胺(mg/kg) 试样空白(mg/kg) 加标量(mg/kg) 测定值 (mg/kg) 加标回收率/% 相对标准偏差% 加标回收率范围/% 2.37 0.32 10 11.40 87.1 0.11 87.0~87.2 11.39 87.0 11.41 87.2 注：添加浓度为10mg/kg，回收率在87.0~87.2%之间，相对标准偏差为0.11%，符合回收率在 80%-110%之间，相对标准偏差小于10%的要求。 邮编： 610052 分析 员 ：刘海侠赵倩审核：金迁 电 话 ：15657600027日期：2021.7.22. 六、实验结果 方法验证汇总表 化合物 检出限 [mg/kg] 保留时间RSD(%) 峰面积 RSD(%) 标准曲线相关系数 样品中含量[mg/kg] 加标回收率(%) 定量限[mg/kg] 三聚氰胺 0.025 0.066 0.149 0.999 5.81((奶粉) 90.4-90.8(奶粉) 0.25 2.37(液体奶) 87.0-87.2(液体奶) 由以上实验结果可知，本方法符合 GB/T 22388-2008 《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方 法》的要求。 邮编： 610052 分析 员 ：刘海侠赵倩审核：金迁 电 话 ：15657600027日期：2021.7.22.