LC-MS/MS检测水产品中的地西泮残留

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依据国家标准《SN/T 3235-2012 出口动物源食品中多类禁用药物残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》建立了使用岛津三重四极杆液质联用仪测定鱼肉中地西泮残留的方法。地西泮在0.2 μg/L~50 μg/L浓度范围内线性良好，相关系数r在0.999以上。加标浓度为0.5~2 μg/kg的样品，回收率在83.8%~93.5%之间。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于水产品中地西泮残留量的准确检测。SSL-CA23-230 Excellence in ScienceLCMSMS-795 LC-MS/MS 检测水产品中的地西泮残留 LCMSMS-795 摘要：本文建立了使用岛津超高效液相色谱三重四极杆质谱联用测定水产品中的地西泮残留的方法。地西泮 在 0.2 ug/L~50.0 ug/L浓度范围内线性良好，相关系数 r 在0.999以上。在高、中、低三个浓度下，化合物的保留 时间和峰面积的 RSD% 分别在 0.04%~0.06% 和0.66%~4.65%之间，仪器精密度良好。加标浓度为 0.5~2 ug/kg 的样品，回收率在83.8%~93.5%之间。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于水产品中地西泮残 留量的准确定量检测。 关键词：：三重四极杆液质联用仪水产品 地西泮 技术特点： 必相较《SN/T 3235-2012》，本方法检测地西泮的灵敏度更高。 ※标准曲线的线性范围更宽，，可适用于不同残留水平的水产品分析。 地西泮 (Diazepam， C16H13CINzO)属于苯二氮 卓类镇静剂，具有镇静、抗惊厥等作用，畜牧生产中 经常被用作动物生长促进剂，以达到镇静催眠、促进 生长和增重催肥的目的。 近年来，一些不法商贩擅自在水产动物捕捞和运 输过程中非法使用地西泮，导致其在水产品中残留，人体长期摄入这类水产品，中枢神经系统会受到严重 干扰，被许多国家列为水产动物捕捞和运输过程中禁 用药物。我国《水产养殖用药明白纸2022年1号》规定在水产养殖过程中不得使用地西泮， 《GB 31650- 2019 食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》中 也规定地西泮不得在动物性食品中检出。 为了保障人们的食品安全，我们参考标准《SN/T 3235-2012 出口动物源食品中多类禁用药物残留量检 测方法液相色谱-质谱/质谱法》，建立了水产品中 地西泮残留的检测方法。样品中残留的地西泮，分别 用氨化乙腈和酸化乙腈提取， QuEChERS 吸附剂净化 后，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。该 方法快速、简单、灵敏度高，可实现对水产品中地西 泮的有效检测。 1.1仪器 本实验采用岛津 Nexera LC-40 X3与三重四极杆质谱仪 LCMS-8045 联用系统。具体配置为： 系统控制器：SCL-40自动进样器：SIL-40C X3输液泵LC-40B质 谱 仪：LCMS-8045呂·柱温箱CTO-40S色谱工作站LabSolutions Ver. 5.114 在线脱气机： DGU-405 1.2分析条件 液相条件 色谱柱主：：Shim-pack Scepter C18-120 (100mm×.2.1 mm l.D， 1.9 um)岛津(上海)实验器材有限公司，P/N： 227-31012-05 流动相 A 相-0.1%甲酸水溶液，B相-0.1%甲酸-甲醇溶液。柱 流 温：35℃速0.25mL/min 进样体积： 10uL 洗脱方式： 梯度洗脱，，初始浓度为B相5%，时间程序见表1 表1 梯度洗脱程序 Time Module Command Value 4.00 Pumps Pump B Conc. 55 5.00 Pumps Pump B Conc. 95 8.00 Pumps Pump B Conc. 95 8.01 Pumps Pump B Conc. 5 13.00 Controller Stop 质谱条件 离子源：ESI， 正离子模式 DL 管温度：250°℃ 接口电压：3.5kV 加热模块温度：400°℃ 雾化气：氮气 3.0 L/min 接口温度：300°℃ 干燥气：氮气 10 L/min 扫描模模式：多反应监测(MRM) 加热气：空气10L/min MRM参参数：见表2 碰撞童气：氩气(230kPa) 表2 MRM 参数 化合物 化学分子式 CAS NO. 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bais(V) CE(V) Q3 Pre Bais(V) 地西泮 C16H13CINzO 439-14-5 285.1 193.1* -11.0 -31.0 -19.0 154.1 -11.0 -27.0 -28.0 *表示定量离子 样品前处理 参考 《SN/T 3235-2012出口动物源食品中多类禁用药物残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法》中7.1和7.2样品提取与净化的方法。 结果与讨论 3.1专属性 空白样品和 0.2 ng/mL地西泮药物的 MRM 色谱图如图1所示，色谱峰分离良好，通道无干扰。 Q285.10>193.10(+) 2.56e2 图1 空白样品和 0.2 ng/mL地西泮药物的 MRM 色谱图 3.2校准曲线和检出限 选取空白样品按照标准中7.1和7.2样品的前处理步骤获取空白基质液，再用空白基质液稀释标准中间液配 制成各浓度的基质校准曲线(0.2、0.5、1、2、5、10、20、50 ng/mL)，液相色谱-串联质谱测定。以特征 离子质量色谱峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。根据0.2ug/L标样数据，以3倍信噪比计算地西泮的方法检出限，其结果如表2所示。 图2地西泮标准曲线 表3地西泮的校准曲线及检出限 化合物 校准曲线 相关系数R 准确度% 检测限 (ng/mL) 定量限(ng/mL) 地西泮 Y=(21668.53)X+(1371.065) 0.9994 83.8~113.8 0.03 0.11 3.3重复性实验 取 0.5、5和50 ug/L标准品溶液，连续进样6次，考察仪器的重复性，测定结果见表4。 表4地西泮保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 化合物 RSD%((0.5ug/L) RSD% (5 ug/L) RSD% (50 ug/L) R.T Area R.T Area R.T Area 地西泮 0.06 4.65 0.06 0.66 0.04 0.92 3.4加标回收率 取空白鱼肉2g，加入混标工作液，使加标浓度为0.5~2 ug/kg，样品经提取及净化后，按照1.2中的分析 条件测定地西泮的加标回收率，平行测定3次，其回收率在 83.8%~93.5%之间。基质空白样品与加标浓度为 1 pg/kg 的样品对比图见图3，具体结果见表5。 基质空白样品 加标浓度为lug/kg样品 图3 基质空白样品与加标浓度为 1 ug/kg的样品对比色谱图 LCMSMS-795 表5地西泮回收率结果(n=3) 化合物 加标浓度 0.5 ug/kg 加标浓度1 ug/kg 加标浓度 2ug/kg 回收率% RSD% 回收率% RSD% 回收率% RSD% 地西泮 83.8 8.86 89.4 5.90 93.5 6.41 结论 依据国家标准《SN/T 3235-2012出口动物源食品中多类禁用药物残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法》建立了使用岛津三重四极杆液质联用仪测定鱼肉中地西泮残留的方法。地西泮在0.2 ug/L~50 ug/L浓度范围内 线性良好，相关系数r在0.999以上。加标浓度为0.5~2 ug/kg 的样品，回收率在83.8%~93.5%之间。该方法 灵敏度高，分析时间短，结果准确，，可用于水产品中地西泮残留量的准确检测。 岛津应用云