化妆品中禁用物质卡立普多的含量测定 高效液相色谱法

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一、摘要本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定化妆品中卡立普多的含量。色谱条件：C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样量为10μL，检测器为蒸发光散射检测器。实验结果：卡立普多的理论塔板数为17399，拖尾因子为1.05；重复性测试中，将卡立普多标准溶液连续进样7针，卡立普多保留时间的RSD为0.051%，峰面积的RSD为2.697%；灵敏度测试中，卡立普多的仪器检出限为6.674μg/mL，仪器定量限为22.248μg/mL；卡立普多在测定浓度范围内具有良好的线性关系，确定系数R2大于0.99；对护手霜试样进行测定，卡立普多均未检出，加标回收率为114.2%。因此，Wooking K2025高效液相色谱仪满足《GB/T 40899-2021 化妆品中禁用物质溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的测定 高效液相色谱法》中卡立普多含量测定的需求。二、背景卡立普多，别名为肌安宁，卡来梯，RELA。为甲丙氨酯的衍生物，白色结晶性粉末，，微具特异臭，易溶于乙醇、氯仿。为中枢性肌肉松弛药，有镇静及抗焦虑作用，用于治疗急性肌肉痉挛及扭伤等。卡立普多是我国《化妆品安全技术规范（2015年版）》规定的禁用原料。文档编号：LC-K2025-01-221104 化妆品中禁用物质卡立普多的含量测定 高效液相色谱法 参考——GB/T 40899-2021 一、摘要 本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定化妆品中卡立普多的含量。色谱条件：C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样量为10μL，检测器为蒸发光散射检测器。实验结果：卡立普多的理论塔板数为17399，拖尾因子为1.05；重复性测试中，将卡立普多标准溶液连续进样7针，卡立普多保留时间的RSD为0.051%，峰面积的RSD为2.697%；灵敏度测试中，卡立普多的仪器检出限为6.674μg/mL，仪器定 量限为22.248μg/mL；卡立普多在测定浓度范围内具有良好的线性关系，确定系数R2大于 0.99；对护手霜试样进行测定，卡立普多均未检出，加标回收率为114.2%。因此，Wooking K2025高效液相色谱仪满足《GB/T 40899-2021化妆品中禁用物质溴米索伐、卡溴脲和卡 立普多的测定高效液相色谱法》中卡立普多含量测定的需求。 二、背景 卡立普多，别名为肌安宁，卡来梯，RELA。为甲丙氨酯的衍生物，白色结晶性粉末，，微具特异臭，易溶于乙醇、氯仿。为中枢性肌肉松弛药，有镇静及抗焦虑作用，用于治疗急 性肌肉痉挛及扭伤等。 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 卡立普多是我国《化妆品安全技术规范（2015年版）》规定的禁用原料。 三、实验过程 1范围 适用于水剂类、乳液类和膏霜类化妆品中卡立普多的测定。 2原理 试样经溶剂超声提取后，提取液经离心、氮吹、重新定容并过滤，以配备蒸发光散射检 测器的高效液相色谱仪进行测定，根据保留时间初步定性，外标法定量。 3试剂与材料 3.1水：符合GB/T6682的一级水； 3.2甲醇：色谱纯； 3.3乙腈：色谱纯； 3.4氯化钠：优级纯； 3.5 40%乙腈溶液：量取40mL乙腈（3.3）加入100mL容量瓶中，加水稀释并定容至刻度；3.6卡立普多对照品：CAS号78-44-4； 3.7卡立普多标准储备液：准确称取一定量的卡立普多对照品（3.6），用40%乙腈溶液（3.5）溶解，配制成浓度为1mg/mL的卡立普多标准储备液，于4℃避光保存，有效期2个月；3.8卡立普多标准系列工作液：分别准确吸取一定量的卡立普多标准储备液，用40%乙腈溶 液（3.5）配制成卡立普多标准系列工作液，浓度依次为50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 300μg/mL和500μg/mL； 3.9护手霜试样； 3.10 0.22μm微孔有机滤膜。 4仪器与设备 4.1高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温 箱、K2025 ELSD蒸发光散射检测器、Wookinglab色谱工作站； 4.2分析天平：精确到0.0001g； 4.3涡旋振荡器； 4.4超声波清洗机； 4.5离心机：转速不低于5000r/min； 4.6氮吹装置； 4.7具塞比色管：10mL，带刻度； 4.8具塞塑料离心管：10mL。 5测定步骤 5.1样品处理 称取约1g（精确至0.001g）护手霜试样（3.9），置于10mL具塞比色管（4.7）中，加 入甲醇（3.2）并定容至刻度，混匀，加入2g氯化钠（3.4）破乳，超声提取20min，冷却至 室温。转移所得悬浮液5mL至具塞塑料离心管（4.8）中，5000r/min离心5min。取上清液 1mL氮吹至干，用40%乙腈溶液（3.5）重新定容至1mL，经0.22μm微孔有机滤膜（3.10） 过滤，取续滤液，待测。 5.2色谱条件 a）色谱柱：C18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm或者相当的色谱柱； b）流动相：乙腈+水=40+60（体积比），等度洗脱； c）流速：1.0mL/min； d）进样量：10μL； e）柱温：30℃； f）蒸发光散射检测器：雾化器冷却模式，漂移管温度50℃，载气为氮气，气体流速为3mL/min。 6实验结果 6.1重复性测试 按照上述色谱条件（5.2）进行采集，卡立普多标准溶液（浓度为200μg/mL）的色谱 图如图1所示，积分结果如表1所示。 图1卡立普多标准溶液的色谱图 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 表1卡立普多标准溶液色谱图积分结果 目标物 保留时间 峰面积 峰高 理论塔板数 分离度 对称/拖尾因子 （min） （mAU.s） （mAU） 卡立普多 11.067 80.120 6.385 17399 - 1.05 由表1中数据可知，卡立普多的理论塔板数为17399，拖尾因子为1.05，具有良好的 峰形。 将卡立普多标准溶液连续进样7针，叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。 图2卡立普多标准溶液连续进样7针叠加的色谱图 表2卡立普多标准溶液连续进样7针重复性数据统计 目标物 1 2 3 4 5 6 7 平均值 RSD% 卡立普多 保留时间 11.061 11.069 11.067 11.052 11.066 11.060 11.062 11.062 0.051 峰面积 77.193 75.628 80.120 75.737 77.398 74.865 73.829 76.396 2.697 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 将卡立普多标准溶液连续进样7针进行重复性测试，卡立普多保留时间的RSD为 0.051%，峰面积的RSD为2.697%，具有良好的定性定量重复性。 6.2仪器灵敏度测试 灵敏度测试的谱图如图3所示，计算结果见表3。 图3仪器灵敏度的色谱图 表3仪器灵敏度测试数据 目标物 浓度 峰高 噪声 S/N LOD LOQ （μg/mL） （mAU） （mAU） （μg/mL） （μg/mL） 卡立普多 50 0.427 0.019 22.5 6.674 22.248 由表3中数据可知，卡立普多的仪器检出限为6.674μg/mL，仪器定量限为22.248μ g/mL。 6.3含量测定 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 6.3.1校准曲线 按照色谱条件（5.2），将卡立普多标准系列工作液（3.8）上机测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线，线性方程和确定系数如图4~图5所示。 图4卡立普多的校准曲线 由图4可知，卡立普多在测定浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R2大于0.99。卡立普多标准系列工作液叠加的色谱图如图5所示。 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 图5卡立普多标准系列工作液叠加的色谱图 6.3.2含量测定 以护手霜作为试样，按照流程（5.1）对其进行处理，并进行加标回收实验。依据公式 （1）计算护手霜试样中卡立普多的含量。 式中::w----为试样中卡立普多的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); C----为通过校准曲线得到的试样中卡立普多的浓度,单位为微克每毫升(g/mL）； V----为试样的定容体积,单位为毫升(mL); m--为试样的质量,单位为克(g); 1000--为换算系数。 试样的色谱图及试样加标的色谱图如图6~图7所示。 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 时尚min 图6护手霜试样的色谱图 图7护手霜试样加标的色谱图 依据公式（1）进行计算，试样中未检测到卡立普多，加标回收率为114.2%。 四、结论 通过对卡立普多的理论塔板数、重复性、灵敏度、线性的测试以及对护手霜试样中卡立 普多的含量进行测定，实验结果表明：卡立普多的理论塔板数为17399，拖尾因子为1.05，具有良好的峰形；重复性测试中，将卡立普多标准溶液连续进样7针，卡立普多保留时间的 RSD为0.051%，峰面积的RSD为2.697%，具有良好的定性定量重复性；灵敏度测试中， 卡立普多的仪器检出限为6.674μg/mL，仪器定量限为22.248μg/mL；卡立普多在测定浓 度范围具有良好的线性关系，确定系数R2大于0.99；对护手霜试样进行测定，卡立普多未 检出，加标回收率为114.2%。因此，Wooking K2025高效液相色谱仪满足《GB/T 40899-2021化妆品中禁用物质溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的测定高效液相色谱法》中 卡立普多含量测定的需求。 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 附1：仪器配置清单 序号 单元 K2025二元高压梯度系统 A) Pump Unit泵单元 1 62MPa二元高压输液泵（内置溶剂托盘） 2 流动相瓶（肖特瓶，1L） 3 脱气机 4 四通道溶剂切换阀 5 自动在线清洗系统 B) Sample Injector进样器 1 自动进样器 2 样品瓶（2mL，含瓶盖） 3 脱气组件 4 100μL定量环C) Column Oven柱温箱 1 色谱柱恒温箱（室温以下10℃至85℃） 2 色谱柱：Kromasil 100-5-C18 4.6mm×250mm，5µm D) Detector检测器 1 蒸发光散射检测器 E) Workstation工作站 1 Wookinglab（中文版） *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 附2：悟空Wooking K2025高效液相色谱仪（可靠、精准、友好、合规） *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。