三方联手研究新方法，快速检测动物源性食品中9种N-亚硝胺类化合物

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动物源性食品中9种N-亚硝胺类化合物QuEChERS-同位素稀释-气相色谱-串联质谱法测定        亚硝胺是一类含有N-亚硝基（N-NO）的亚硝基化合物，广泛存在于饮用水、熏肉制品和腌制蔬菜中。蛋白质腐败分解时可以产生胺类物质，因此蛋白质含量丰富的食物往往容易N-亚硝胺类化合物含量超标，此外经过烟熏、油炸、腌制的动物源性食品也容易产生亚硝胺。        当下动物源性食品中N-亚硝胺类化合物污染种类较多，对人体危害较大，但国标GB 5009. 26-2016 仅针对N-二甲基亚硝胺的检测，且存在样品前处理复杂、标准方法回收率低、再现性差等问题，因此建立同时快速检测多种N-亚硝胺类化合物的方法有一定现实意义。        由集美大学水产学院、厦门海关技术中心、福建省市场监督管理局共同发表了《QuEChERS-同位素稀释-气相色谱-串联质谱法测定 动物源性食品中9种N-亚硝胺类化合物》文献，其中前处理产品，用到了迪马科技的PLS-A、C18净化填料。         结论表明，采用迪马科技的PLS-A净化填料时，净化效果较好，对油脂、色素等杂质的净化效果理想。另外，GB 5009.26-2023食品安全国家标准  食品中N-亚硝胺类化合物的测定 第二法 QuEChERS-气相色谱-质谱/质谱法，前处理过程也使用了迪马科技的PLS-A净化填料(ProElut® QuE 15mL Tube, 150mg PLS-A, Cat.#: 64640)。吸附剂的选择       肉制品、水产品等动物源性食品通常含有色素、脂肪酸等复杂基质，很容易影响测定的准确性。C18通常用来去除脂肪酸、色素，同时吸附非极性化合物，PLS-A可较好地吸附有机酸、脂肪酸、糖、色素等干扰物质。根据何淑娟等的研究，本文选取PLS-A粉末、C18粉末和EMR小柱对其净化效果进行对比。准备待测样品3份，将样品中加入200μL N-亚硝胺类化合物内标工作液，其中两份样品分别用150mg PLS-A和150mg C18进行净化处理，第三份样品采用EMR小柱净化，3份样品按照1. 2. 2节进行处理，其中EMR小柱加入1mL水进行活化后再加入1. 2. 2 节的待净化液4mL进行净化，样品回收率见图2。结果表明，采用PLS-A 时，净化效果较好，对油脂、色素等杂质的净化效果理想。因此本文采用PLS-A 作为净化剂。‍‍色 谱Chinese Journal of ChromatographyVol.39 No.196~1032021年1月January 2021 孔祥一,等:QuEChERS-同位素稀释-气相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中 9种 N-亚硝胺类化合物第 1期·97· 青年编委专辑（上）·研究论文 DOI: 10.3724/SP.J.1123.2020.06010 QuEChERS-同位素稀释气相色谱串联质谱法测定 动物源性食品中 9种 N-亚硝胺类化合物 孔祥一1，2，庄丽丽²，方恩华2，林鹏,，郑子龙,，郑向华,，徐敦明'，2* (.集美大学水产学院,福建厦门361021;2.厦门海关技术中心,福建厦门361000;3.福建省市场监督管理局,福建福州350003) 摘要：建立了同时测定动物源性食品中 9种 N-亚硝胺类化合物的气相色谱串串联质谱分析方法。当下动物源性食 品中 N-亚硝胺类化合物污染种类较多，对人体危害较大，但国标 GB 55009 26-2016仅针对 N-二甲基亚硝胺的检测，且存在样品前处理复杂、标准方法回收率低、再现性差等问题，因此建立同时快速检测多种 N-亚硝胺类化合物的方 法有一定现实意义。称取10.0g样品,置于50 mL离心管中,加入200 pL内标工作液和10 mL乙腈,冷冻 30 min 后,加入4g硫酸镁和1g氯化钠进行脱水,以9000 r/min 离心5 min.取5 mL 上清液使用150 mg 聚苯乙烯二乙 烯苯(LS-A)粉末净化,再使用1.6g MgSO,和0.4 g NaCl 脱水,过 0.22 um滤膜,上机分析。在初始温度为50℃时采用程序升温模式,0.16 min 后,以 900 ℃/min 的速率将温度升至220℃。采用毛细管气相色谱柱 HP-Inno-wax 60 mx0.25 mmx0.25 pm)分离,使用电子轰击电离(I)源检测,在多反应监测模式下,以保留时间和特征离 子对信息进行定性和定量分析，使用内标法定量 N-亚硝胺类化合物。结果表明，N-亚硝胺类化合物在 0. .1~50 0ug/L范围内具有良好的线性关系,方法的检出限6/N=3)和定量限6/N=10)分别为 0.03~0.30 pg/kg 和0.10~1.00 pg/kg。对不同样品基质进行0.5、1.0、3.0 pg/kg3个水平的加标回收试验,9种N-亚硝胺类化合物的回收 率为 80.4%~98.5%, RSD (=6)为2.41%~12.50%。应用建立的方法检测市面上常见的动物源性食品,除N-亚 硝基乙胺、N-亚硝基吗啡胆碱外，其他 7种 N-亚硝胺类化合物均有不同程度检出。检测结果表明，腌制水产品中 N-亚硝胺类化合物含量普遍高于其他样品。研究建立的方法操作简单，不需要长时间蒸馏提取，可快速对动物源 性食品中 N-亚硝胺类化合物进行定性和定量分析，且样品和试剂的消耗量更少，节省成本，对环境污染小。该法的 建立对我国动物源性食品中 N-亚硝胺类化合物残留水平的控制、检测标准的制定和采取相应的管理措施具有一定 的理论和现实意义。 关键词：气相色谱串串联质谱；QuEChERS；N-亚硝胺类化合物；动物源性食品 中图分类号:O658 文献标识码：A 文章编号:1000-8713 @021)01-0096-08 Determination of nine N-nitrosamines in animal derived foods by QuEChERS-isotope dilution combined with gas chromatography-tandem mass spectrometry KONG Xiangyi 2, ZHUANG Lili, FANG Enhua, LIN Peng,9 ZHENG Zilong', ZHENG Xianghua', XU Dunming1,2* Q. Fisheries College of Jimei University, Xiamen 361021, China; 2. Xiamen Customs Technology Center, Xiamen 361000, China; 3. Fujian Administration for Market Regulation, Fuzhou 350003, China) Abstract: In this study, a comprehensive analytical method based on gas chromatography-tan-dem mass spectrometry GC-MS/MS) was developed for the determination of nine N-nitrosa-mines in animal derived foods. There are many kinds of N-nitrosamines in foods that are harmful 收稿日期:2020-07-03 *通讯联系人.Tel: (592)6800818,E-mail:Dunmingxu@ 163.com. 基金项目:国家重点研发计划 Q019YFC1605400);食品安全国家标准项目 (spaq-2019-40);福建省自然科学基金项目 C017J01020). Foundation item: National Key Research and Development Program of China No. 2019YFC1605400); National Food Safety Standard Project No. spaq-2019-40); Natural Science Foundation of Fujian Province No.2017J01020) 徐敦明：厦门海关技术中心研究员，受聘第二届食品安全国家标准审评委员会委 员，海关总署科技委专业委委员，海关技术规范食品检验专业技术委员会委员、国 家燕窝市场专业委员会专家委员、厦门市食品安全委员会专家委员会副主任委员、福建农林大学/集美大学食品安全检测与控制方向硕士生导师。长期从事食品安 全研究与检测、食品安全科普，专业于有毒有害物的分析。近年，主持参与 35项与 食品安全相关的国家及省部级科技项目，主持参与 28项国家标准、行业标准的制 修订。发表学术论文 60余篇，撰写专著 6部，授权专利 10项，获各类科技进步奖 17项、省标准贡献奖4项。 十… ++十+ +++十艹+ 十十 +十+十· -艹十… 十…十 to human health. However, the national standard GB 5009.26-2016 pertains only to the detec-tion of N-dimethylnitrosamine; there are many drawbacks of this method, such as complicated sample preparation, low recovery rate, and poor reproducibility. Hence, it is of practical signif-icance to establish a method for the simultaneous determination of a variety of N-nitrosamines The optimal extraction conditions for the developed method were as follows: 10. 0 g aliquots of the sample were placed in a 50 mL centrifuge tube, followed by the addition of 10 mL acetoni-trile and 200 puL internal working standard solutions. After 30 min of freezing treatment, 4 g magnesium sulfate and 1 g sodium chloride were added for dehydration, and the tube was cen-trifuged at 9 000 r/min for 5 min. After vortex centrifugation, 5 mL of the clear supernatant was purified using 150 mg polystyrene divinylbenzene (PLS-A). The purified extractswere dewatered using 1.6 g MgSO and 0. 4 g NaCl, and then filtered through a 0. 22 um membrane filter unit prior to GC-MS/MS analysis. Temperature-programmed was applied at an initial tem-perature of 50 ℃. After 0.16 min, the temperature was raised to 220℃ at the rate of 900℃/min for 5 min. N-Nitrosamines were separated on an HP-Innowax column60 mx0.25 mmx 0.25 um). Identification and quantification were achieved using an electron impact ionnCI) source in positive ion mode with multiple reaction monitoring(RM). The internal standard method was used to quantify the N-nitrosamines. Under the optimal conditions, the correlation coefficients of the standard calibration curves were not less than 0.99 in the range of 0.1-50. 0ug/L. The limits of detection were 0.03-0.30 pg/kg6/N=3), and limits of quantification were 0.15-1.00 ug/kg6/N=10). At spiked levels of 0.5, 1.0, and 3.0 ug/kg, the average recoveries of N-nitrosamines in spiked samples ranged from 80.4% to 98.5%, with relative standard deviations between 2.41% and 12.50%. This method was used to determine animal derived food products, except N-itrosomethylethylamine and N-nitrosomorpholine, others were founded. The results showed that N-nitrosamines levels in salted aquatic products were generally higher than those of the other samples. The method established in this study is simple to operate, and it does not require any time-consuming distillation extraction. Furthermore, there is minimal consumption of samples and reagents; consequently, the experiment cost is reduced, and the method is environmentally friendly. This method has theoretical and practical significance for the control of N-nitrosamines residues in animal derived foods, establishment of detection standards, and corresponding management measures. Key words: gas chromatography-tandem mass spectrometry GC-MS/MS); QuEChERS; N-nitrosamines; animal derived foods 亚硝胺是一类含有 N-亚硝基（(-NO）的亚硝基 化合物［”］，广泛存在于饮用水、熏肉制品和腌制蔬 菜中［”］。蛋白质腐败分解时可以产生胺类物质，因 此蛋白质含量丰富的食物往往容易 N-亚硝胺类化 合物含量超标，此外经过烟熏、油炸、腌制的动物源 性食品也容易产生亚硝胺。1937年,Freund第 一次报道了两例由于职业接触 N-亚硝基二甲胺 （NDMA）而导致中毒的案例，目前已经证实亚硝胺 对生物具有很强的基因毒性，可诱导人体的食管、肝 脏和肾脏等器官发生癌症［,］，其中 DNDMA、N二乙 基亚硝胺 NDEA)被国际癌症研究机构 (RAC)评 定为 2A级致癌物，其他的 N-亚硝胺类化合物为 2B 级致癌物。目前,我国在 GB 2762-2017食品安全国 家标准食品中污染物限量》中也对动物源性食品中 DMA 限量指标做了要求，其中肉及肉制品（肉类 罐头除外）的限量为 3 gpg kg，水产动物及其制品 （水产品罐头除外）的限量为 4 gpg kg。动物源性食 品中的 N-亚硝胺类化合物严重危害人体健康，如何 控制动物源性食品生产过程中 N-亚硝胺类化合物 的产生也是当前 N-亚硝胺类化合物研究的重要方 向，开发对 N-亚硝胺类化合物含量进行快速检测和 定量的技术尤为重要［页］。 热能分析仪作为基于化学发光设计的专门测定 N-亚硝胺类化合物的检测器，具有检测快速、灵敏 度高的优点［ ，,］，但其价格昂贵，应用范围窄，且使 用过程中经常需要检修和维护，一般实验室都未配 备，故基于热能分析仪的 N-亚硝胺类化合物检测法 未能广泛应用。此外，针对亚硝胺的检测方法还有 色谱-核磁法、电化学检测法10-13、液相色谱 法、液相色谱-质谱法5.16、气相色谱-氮磷检测 器法、气相色谱-质谱法18-20等。其中电化学检 测方法的精度和灵敏度仍有待提高；液相色谱串串联 质谱法对相对分子质量较小的 N-亚硝胺类化合物 的响应无法达到要求；气相色谱质质谱法容易产生 DMA 假阳性现象，气相色谱串串联质谱法因其高特 异性和高灵敏度，是目前针对 N-亚硝胺类化合物检 测最为广泛使用的方法。 N-亚硝胺类化合物的前处理方法主要包括液 液萃取法、水蒸气蒸馏萃取法、超临界萃取法和 QuEChERS 等。目前国内对N-亚硝胺类化合物的 标准检测方法为 GB 5009.26-2016《食品安全国家 标准食品中 N-亚硝胺类化合物的测定》，其提取方 法为水蒸气蒸馏法，但该方法的样品需求量过大，操 作过程复杂，耗时较长，且回收率波动较大；朱萌萌 等［等采］采用蒸馏萃取法结合气相色谱串串联质谱法对 肉制品中 10种挥发性 N-亚硝胺类化合物进行检 测，可实现蒸馏和提取同时进行，但仍存在耗时较长 和样品用量大等问题，在面对大量待测样品时具有 一定的局限性；何淑娟等［等和］和高蕙文等［利利］利用净 化剂对 N-亚硝胺类化合物提取液进行净化后氮吹 至近干，但 N-亚硝胺类化合物在氮吹至近干时损失 较大，容易造成回收率较低；李玮等［ 使］使用 N-丙基 乙二胺（PSA）、十八烷基键合硅胶（C18）和无水硫 酸钠对 N-亚硝胺类化合物提取液进行净化和除水，但 SA 的净化效果较弱，可能导致定量结果不准 确；硫酸钠除水效果较弱，可能造成除水不彻底，从 而影响仪器性能。 QuEChERS 是近年来国际上兴起的一种新型 农产品检测的快速样品前处理技术，是利用基质分 散萃取机理来吸附样品中的杂质，从而达到保留目 标物和净化样品的目的。本文通过优化样品前处理 条件、色谱和质谱条件,建立了QuEChERS-同位素 稀释-气相色谱-串联质谱同时快速测定动物源性食 品中 9种 N-亚硝胺类化合物的方法。该方法具有 操作简单、提取高效、更加经济的优点，可准确、快速 测定动物源性食品中的 N-亚硝胺类化合物。 1实验部分 1.1 仪器与试剂 7890 气相色谱-7000 三重四极杆质谱仪美国 Agilent 公司);2-16KL高速离心机 德国 Sigma 公 司); VORTEX 3 涡旋混匀仪德国IKA公司)。 乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯均为色谱纯（德国 Merck 公司); MgSO,和 NaCl 均为分析纯广州西 陇化工有限公司），聚苯乙烯二乙烯苯聚合物（PLS-A）、十八烷基键合硅胶吸附剂（ C1）（北京迪马公 司);增强型脂质去除EMR)小柱 美国 Agilent 公 司);实验用水由 Milli-Q 超纯水系统美国Milli-pore 公司)制备。 9种N-亚硝胺类化合物标准品包括 NDMA、N-亚硝基乙基甲基胺 (NMEA)、NDEA、N-亚硝基二丁 胺 NDBA)、N-亚硝基二丙胺 NDPA)、N-亚硝基哌 啶 NPIP)、N-亚硝基吗啉 NMorPh)N-亚硝基二 苯胺 NDPhA)及内标N-亚硝基二甲胺-d6 NDMA-d6)、N-亚硝基二正丙胺-d14 NDPA-d14),均购自 英国 LGC 公司,质量浓度均为1000 pg/mL。 孔祥一,等:QuEChERS-同位素稀释-气相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中 9种 N-亚硝胺类化合物 1.2 实验方法 1.2.1 标准溶液的配制 将9种N-亚硝胺类化合物标准品(0000ug/mL)用乙腈稀释配制成1.0 pg/mL 的混合标准 工作液，低于--1 ℃避光保存，有效期 6个月。 将内标标准品(000 pg/mL)用乙腈稀释配制 成1.0 ug/mL 的内标工作液,低于-18℃避光保 存，有效期 6个月。 1.2.2 样品前处理 液态样品摇匀后提取处理；粉状样品直接提取 处理；其他样品取可食部分组织捣碎。将制备好的 试样于 00~ ℃冷藏保存，待测。 提取:称取10g精确至0.01g)试样,置于50mL 离心管中，加入 00 .L内标工作液和 10 L 乙腈，涡 旋 1 min 混匀,置于冰箱-20℃冷冻 30 min,加入陶瓷 均质子2粒、4gMgSO4和1g NaCl,涡旋 1 min,于0℃以9 000 r/min 离心5 min,上清液待净化。 净化:取 150 mg PLSA粉末和5mL水,置于 15 L 离心管中，振荡后加入 5 L 上述上清液，并 涡旋1 min,于0℃以9 000 r/min 离心5 min。 除水：将净化液转移至另一 15 mL离心管中，加入1.6 g MgSO4和0.4g NaCl,涡旋 30s,于0℃以9 000 r/min 离心5 min,取1 mL上层有机相过 0. 2 m 微孔滤膜，然后移入进样瓶中上机检测。 1.2.3 分析条件 色谱柱:毛细管气相色谱柱 HP-Innowax 60 m x0.25 mm×0.25 um,美国 Agilent 公司);进样口 温度:220℃;载气:氦气;流速60 mL/min;溶剂放 空模式；程序升温模式：初始温度 05 ℃，保持 .0 16min,以 900℃/min 升温至220℃,保持5 min;进 样量5pL。 电子轰击电离（(I）源；离子源温度 225 ℃；传 输线温度250℃;溶剂延迟6 min;电子能量:70 eV;采集模式：MRM模式。9种亚硝胺类化合物及内标 的保留时间、前体离子、子离子、碰撞能量（CE）见 表1。 表1 9种 N-亚硝胺类化合物及 2种内标的质谱参数 Table 1 MS/MS parameters of the nine N-nitrosamines and two internal standards((S) Compound CAS No. Retention Precursor ion Product ions Collision IS time/min (n/z) (n/z) energies/eV N-Nitrosodimethylamine (NDMA) 6275-9 6.29 74.0 42.1,44.0 19,3 NDMA-d6 N-Nitrosodimethylamine-d6 NDMA-d6) 17829-05-9 6.28 80.0 46.1,50.1 22,5 一 N-Nitrosomethylethylamine NMEA) 10595-95-6 6.65 88.0 42.0,71.0 17,2 NDMA-d6 N-Nitrosodiethylamine NDEA) 55-18-5 6.88 102.0 56.0,85.0 15,2 NDMA-d6 N-Nitrosodi-n-propylamine NDPA) 621-64-7 7.98 130.2 43.0,113.1 9,7 NDPA-d14 N-Nitrosodi--propylamine-d14 NDPA-d14) 93951-96-3 7.93 144.1 50.1,126.1 11,1 一 N-Nitrosodi--butylamine (NDBA) 924-16-3 9.44 116.0 74.1,99.0 8,2 NDPA-d14 N-Nitrosopiperidine NPIP) 100-75-4 9.73 114.0 41.0,84.0 13,5 NDPA-d14 N-Nitrosopyrrolidine (NPYR) 930-55-2 9.98 100.0 43.1,55.1 9,5 NDPA-d14 N-Nitrosomorpholine (MorPh) 59-89-2 10.37 116.2 56.0,86.1 11,5 NDPA-d14 N-Nitrosodiphenylamine (DPhA) 86-30-6 14.16 169.0 167.1,168.1 30,17 NDPA-d14 *Quantitative ion. 2结果与讨论 2.1 提取液的选择 N-亚硝胺类化合物相对分子质量较小，极性较 强，在强极性溶剂中溶解性更强，常用的提取溶剂有 乙腈、二氯甲烷和乙酸乙酯［四四］。实验对这 3种溶剂 进行对比，结果见图 1。可以看出，乙腈对 N-亚硝胺 类化合物的溶解性较强，对油脂和色素等杂质溶解 度相对较小，提取效率最佳；乙酸乙酯对极性强的 N-亚硝胺类化合物提取效果较差，且容易与油脂共 萃取，从而对上机造成干扰；二氯甲烷提取效果差，且操作中由于挥发性极强容易造成误差。因此本实 图 1不同提取溶剂对 9种 N-亚硝胺类化合物回收率的影响 Fig.1 Effect of different extraction solvents on the recoveries of the nine N-nitrosamines 验选择乙腈作为提取溶剂。 2.2 吸附剂的选择 肉制品、水产品等动物源性食品通常含有色素、脂肪酸等复杂基质，很容易影响测定的准确性。18 通常用来去除脂肪酸、色素，同时吸附非极性化 合物,PLS-A可较好地吸附有机酸、脂肪酸、糖、色素 等干扰物质。根据何淑娟等［””］的研究，本文选取 PLS-A粉末、C18粉末和 EMR 小柱对其净化效果进 行对比。准备待测样品 3份，将样品中加入 200 pL N-亚硝胺类化合物内标工作液，其中两份样品分别 用150 mg PLS-A和150 mg C18 进行净化处理,第 三份样品采用EMR 小柱净化,3份样品按照1.2.2节进行处理，其中 MR 小柱加入 1 L 水进行活化 后再加入.. .2 2节的待净化液4 mL进行净化，样品 回收率见图 2.结果表明，采用 PLS-A时，净化效果 较好，对油脂、色素等杂质的净化效果理想。因此本 文采用 PLS-A 作为净化剂。 图 2不同净化方式对 9种 N-亚硝胺类化合物回收率的影响 Fig.2Effect of different purification methods on the recoveries of the nine N-nitrosamines PLS-A: polystyrene divinylbenzene polymer; EMR: enhanced lipid removal. 经由 LS-A 净化后的溶液含水，需除水后才能 进行仪器分析,本方法采用 MgSO,和 NaCl 作为除水 剂NaCl 可以增强溶液极性，减小 N-亚硝胺类化合 物在水中的溶解度，得到更高的萃取效率；MgSO4除 水能力更好，但在吸水过程中会大量放热，亚硝胺在 高温条件下易挥发，减少 MgSO,的用量可减少损失，但减少过多又容易导致除水不彻底。经对比研究最 终采用1.6g MgSO,和 0.4 g NaCl 除水。 2.3 色谱、质谱条件的选择 参考翟孟婷等［的的］的研究结果，选用毛细管气相 色谱柱 HP-Innowax 60 mx0.25 mmx0.25 u.m)。按 .. .2 3节条件对 9种 N-亚硝胺类化合物进行测 定，得到总离子流色谱图和 RM 色谱图（见图 3）。 6 11 5 图339种 N-亚硝胺类化合物及其内标的总离子流 和 MRM色谱图(0 pg/L) Fig.3 Total ion current and MRM chromatograms of the nine N-nitrosamines and their ISS(0 pg/L) 2.4 基质效应 基质效应（ME）是指在测定过程中，由于待测 成分的离子化效应被改变，从而信号受到增强或者 抑制的现象。基质效应会影响结果的准确度。本文 参考 Al-Kaseem 等“的方法,采用标准曲线法基 质效应=基质匹配溶液斜率与溶剂标准溶液斜率的 比值×100%）来考察 N-亚硝胺类化合物在动物源性 食品中的基质效应。ME 值在85%~115%之间可认 为该基质不存在基质效应。用空白样品提取液作为 标准溶液的稀释溶液，使标准溶液和样品溶液的离 子化效应相同。结果表明，9种 N-亚硝胺类化合物 的 E 值均小于 70%，可认为亚硝胺在动物源性食 品中表现出较强的基质抑制效应，为确保测定的准 确性，本文采用内标法进行准确定量。 2.5标准曲线、检出限和定量限 精密吸取 9种 N-亚硝胺类化合物混合标准工 作液和内标工作溶液适量，用乙腈稀释成质量浓度 为0.1、0.5、1.0、5.0、20.0和50.0 ug/L的系列混 合标准溶液，其中内标的质量浓度均为 020 0gng mL，实验按浓度由低到高的顺序进样分析。以 N-亚硝胺类化合物及其对应氘代同位素内标的浓 度比值为横坐标，以 N-亚硝胺类化合物及其对应氘 代同位素内标的峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲 线，从而获得线性方程和相关系数（((），见表 2.结 果表明，线性相关系数均不小于 .0 99，说明 N-亚硝 胺类化合物在0.1~50.0 pg/L范围内有良好的线 性关系。以定量离子信噪比（ ( N）为 3和 10时的 响应定义方法的检出限（(OD）和定量限（(OQ），9种 N-亚硝胺类化合物的检出限和定量限分别为 0.03~0.30 pg/kg 和0.10~1.00 pg/kg。 表2 9种 N-亚硝胺类化合物的线性方程、相关系数、检出限和定量限 Table 2Linear equations, correlation coefficients R), limits of detection (ODs) and limits of quanti-fication(OQs) of the nine N-nitrosamines Compound Linear equation R² LOD/ LOQ/ ag/kg) ag/kg) NDMA y=0.96x+0.04 0.997 0.05 0.15 NMEA y=0.87x+0.04 0.996 0.10 0.30 NDEA y=0.68x+0.03 0.997 0.10 0.30 NDPA y=1.57x+0.08 0.996 0.10 0.30 NDBA y=2.76x+0.23 0.990 0.10 0.30 NPIP y=2.92x+0.14 0.996 0.30 1.00 NPYR u=1.80x+0.08 0.996 0.20 0.60 NMorPh y=3.72x+0.19 0.996 0.10 0.30 NDPhA u=37.57x+1.68 0.997 0.03 0.10 y: peak area ratio of the quantitative ion of the analyte to the internal standard; x: mass concentration ratio of the ana-lyte to the internal standard. 2.6准确度和精密度 按照前述方法，对不含 N-亚硝胺类化合物的鱼 肉、虾肉、牛肉和腊肠等 4种空白样品进行添加回收 试验,设定添加水平为0.5、1.0、3.0 pg/kg,考察方 法的准确度和精密度，结果见表 3.结果表明，9种 N-亚硝胺类化合物的回收率为80.4%~98.5%, RSD 为 2.41%~12.50%,方法准确度和精密度良好。 表3 9种 N-亚硝胺类化合物在动物源性食品中的添加回收率和相对标准偏差（(=6） Table 3Spiked recoveries and RSDs of the nine N-nitrosamines in animal derived foods 6=6) Spiked/ Fish Shrimp Beef Preserved pork Analyte (g/kg) Recovery/% RSD/% Recovery/% RSD/% Recovery/% RSD/% Recovery/% RSD/% NDMA 0.5 85.9 9.58 88.5 10.80 86.5 11.80 84.1 10.80 1.0 85.3 3.51 96.3 8.51 84.3 7.51 82.3 6.51 3.0 97.1 3.10 92.0 5.14 91.1 3.14 95.1 2.41 NMEA 0.5 86.5 10.20 86.5 11.50 82.4 8.11 89.5 12.50 1.0 92.5 4.12 91.2 7.85 92.0 4.55 90.1 5.11 3.0 96.4 2.85 97.3 2.45 96.0 2.82 95.4 2.74 NDEA 0.5 89.7 10.70 89.5 9.23 83.5 11.60 84.1 11.40 1.0 90.4 3.57 92.4 6.88 94.1 5.98 93.1 3.78 3.0 97.6 2.77 96.5 2.85 98.5 2.96 97.5 2.78 NDPA 0.5 91.4 11.10 88.5 9.44 89.8 9.04 85.2 11.20 1.0 94.1 7.45 95.2 8.55 96.3 8.87 94.2 8.51 3.0 98.4 3.74 98.5 3.25 97.2 3.71 97.2 3.28 NDBA 0.5 90.7 9.85 82.1 8.51 83.7 7.61 87.2 10.20 1.0 92.8 7.56 91.4 7.44 92.8 7.74 91.4 7.94 3.0 97.5 2.88 97.1 4.12 98.5 3.52 96.5 3.87 色 谱 第39卷 表 3 （续） Table 3 Continued) Analyte Spiked/ ug/kg) Fish Shrimp Beef Preserved pork Recovery/% RSD/% Recovery/% RSD/% Recovery/% RSD/% Recovery/% RSD/% NPIP 0.5 94.5 8.57 81.1 9.21 84.5 8.11 92.5 9.18 1.0 93.4 8.35 92.8 6.89 97.1 7.05 95.2 9.00 3.0 96.3 3.04 95.6 3.57 96.3 3.54 95.4 3.95 NPYR 0.5 82.5 9.88 85.2 9.77 89.7 12.40 96.5 9.04 1.0 92.7 8.57 89.5 6.22 90.5 8.95 92.5 8.44 3.0 97.4 3.98 95.6 5.47 96.5 3.57 95.2 4.12 NMorPh 0.5 85.5 8.35 88.5 9.02 82.8 8.93 95.4 8.21 1.0 89.3 6.54 89.2 4.58 89.5 5.23 86.8 5.89 3.0 95.3 3.52 94.8 3.28 95.1 4.57 90.4 3.75 NDPhA 0.5 80.4 8.04 84.3 7.81 88.5 6.83 95.4 7.98 1.0 92.0 3.47 86.0 5.14 89.7 6.52 85.8 7.14 3.0 98.1 3.07 94.5 2.58 97.1 2.56 85.4 2.71 2.7实际样品检测 按照本文建立的方法对采集的 60批动物源性 食品，包括肉糜、腌制肉制品、水产制品等样品进行 分析，有 18批样品中检出 N-亚硝胺类化合物（见表 4),其中 NDMA、NDBA、NPIP、NPYR、NDPhA 的检 出率最高，且部分腌制水产品的 DMA 含量高出我 国 GB 2762-2017《食品安全国家标准食品中污染物 限量》中的限量值 NDMA≤3 pg/kg),其中腌制鱿 鱼丝样品中的 NDMA 含量甚至高达7.93 pg/kg。 表 4实际样品中 9种 N-亚硝胺类化合物的检测结果 Table 4 Detected results of the nine N-nitrosamines in real samples Compound Contents/ (g/kg) Meat paste Pickled bacon Aquatic products NDMA 0.05-1.13 0.70-4.65 0.30-7.93 NMEA ND ND ND NDEA 0-2.42 0-3.27 0.10-2.55 NDPA 0.12-1.41 0.03-0.88 0-1.33 NDBA 0-1.72 0-1.65 0-3.16 NPIP 0-1.06 0-1.95 0-1.84 NPYR 0.45-2.42 0-1.35 0-4.38 NMorPh ND ND ND NDPhA 0-2.01 0-1.84 0-2.01 ND; not detected. 3 结论 建立了 QuEChERS-同位素稀释-GC-MS/MS测 定动物源性食品中 9种 N-亚硝胺类化合物残留的方 法。方法的回收率和精密度良好，线性范围广，重复 性好，检出限低，可以同时对 9种 N-亚硝胺类化合物 快速地进行定性和定量分析，从而为动物源性食品中 N-亚硝胺类化合物含量的安全评价提供依据。 参考文献： [1] Ma Q, Xi H, Wang C, et al. 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