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第2楼2007/12/25
---称取5.0±0.05 g粉碎的样本至50ml聚苯乙烯离心管中与25ml pH8.5 50mM Tris-Base缓冲液(见配液4)混合,用振荡器振荡0.5h,以达到均质的目的;
----加入15ml正己烷,用振荡器振荡5min以除去脂肪;
----3000g以上,10-15℃离心15min;
----用移液器除去上层的正己烷相及中间薄薄的脂肪层;
----再加入15ml正己烷,用振荡器振荡5min除去脂肪;
----向均质液中加入0.5ml浓盐酸振荡1h;
----称取6.0g±0.05g均质物(相当于1.0g组织样本)至10ml聚苯乙烯离心管中;
----以下步骤从(带有低脂肪的肝、肉等组织)回收的第一个离心步骤开始进行处理;
再用RIDA C18 柱以下列方式纯化(要严格控制过柱时的流速)
RIDA C18柱以下列方式纯化
----用3ml甲醇洗涤柱子,流速为1滴/秒;
----用2ml洗涤液(pH3.0 50mM磷酸二氢钾缓冲液(见配液2))洗涤柱子;
----样本进柱(组织样本的全部上清液,15滴/分钟);
----用2ml pH3.0 50mM磷酸二氢钾缓冲液(见配液2)洗涤柱子;
----用正压去除残留的液体并且用空气或氮气吹2min,干燥柱子;
----用1ml甲醇洗脱样本,流速为15滴/分钟;
----于50~60℃的弱空气或氮气流下完全蒸发溶剂;
----用1ml去离子水溶解干燥的残留物;
----取20l用于分析。