【每周一问】一个板油给我发的站内短信，我把问题和俺的回复贴出来大家分享

[quote]原文由 zhouyuhu 发表:我最近在用4-氨基安替比林比色法测苯酚含量。想问几个问题，请您多多赐教：
1 不同型号分光光度计对测量结果有影响吗？
肯定是有影响的，就是同一型号的仪两台仪器，用同一标准溶液测定，结果都不一样，因为仪器条件不同，仪器状态等因素不同．但这种影响，我个人认为对最后的测定结果影响非常小，差别小于０.００２个吸光度，所以这位板油不用担心这个问题，除非两台仪器的性能差别比较大，就比如７２１和２５５０一样．这种差别表现在很多方面，比如波长准确度啊，透射比准确度啊，仪器的噪声啊，杂散光，漂移等．如果波长准确度和透射比准确度没问题的话，那噪声则对浓溶液的影响比较大，杂散光则对稀溶液的影响比较大，这位板油在做的时候要注意啊．
2 国标上说以蒸馏水为参比液，把零号管的吸光度扣除，做标准曲线。可不可以直接用零号管作为参比溶液？
您问的这个问题很好，这个涉及空白和参比的问题．简单的说，所谓的空白就是试剂空白，为了扣除所加试剂中待测组分对结果的影响．而参比则是为了消除单色光对测定结果的影响．首先对两者进行一下区别．如果按您说的把零号管放在参比上，我个人认为是可以的，这样两者的作用就一起消除掉了，如果您的实验不是很精确的话，可以这么做．不过建议您把国标方法和您做的方法做个比较，看看最后对结果的影响有多大，如果影响很小，当然可以这么做了．
3 若样品吸光度为零，带入到方程中求出样品含量为负值怎么办？怎样解释呢？
这个问题就涉及到检出限的问题，如果吸光度是零，那肯定在检出限以下了，您再代入方程中就没有意义了．您说呢？所以建议您做一下检出限，一般要求对空白进行多次测定（１３，２０）取平均，及为检出限，但我看过一本书上说０.０１个以下吸光度都算未检出．您可以综合参考一下．
　　还有就是为什么会出现负的呢，这与您做的标准曲线有关系，您标准曲线的截距是负的吧，这样您把零吸光度代进去计算，结果就是负的．理论上来说标准曲线是过原点的一条直线，但是实际上都会在纵坐标上产生一个截距的，正负都有可能，我个人认为截距对测定结果的影响非常小，所以有的软件有让标准曲线强制过零这一项，您可以注意一下这个问题，顺便问一下，您用的什么型号的仪器．
4 比色皿的不同光程之间测出值是否成倍数关系?
这与朗伯－比尔定律有关Ａ＝ＫＢＣ，其中Ｂ为比色皿的光程长，一般现在用最普遍的就是１厘米的比色皿，当然也有别的尺寸的，２厘米的，还有微量的等等，不知道您用的是多少的？如果您用１厘米的测定出来吸光度为０.２，那用２厘米的测定出来０.４了．说到这里，我想提醒一下，如果测定出来吸光度比较大，超出了标准曲线最高点，有人选择了稀释样品溶液，来保证测定结果在标准曲线范围之内，但我听一个专家讲过，稀释或浓缩带来的误差相对而言比较大，还不如对比色皿的尺寸进行更换呢．这里还有一个条件的限制，如果您的仪器只支持１厘米的比色皿，那只能选择稀释样品溶液了．
5 做标准曲线的吸光度值非常低，但线性很好，可以用吗？
　这里涉及到一个灵敏度的问题，一般情况下标准曲线的斜率代表方法的灵敏度，没看到您的数据，不好下结论．您把标准曲线的浓度和吸光度列出来，帮您分析分析，从表面上看，如果线性好的话，　应该没问题．
　　以上是个人拙见，仅代表个人观点，仅供参考．

1.肯定有影响.
2.如果扣除应该可以的.
3.负值??这个yunhu解释的很完善
4.同一种溶液,同一台仪器,可以的.比色皿要一至,你不能拿着仪器原配的和自己买的2种来回比,那就有问题哦.
5.我认为可以用.

冬季回答的干脆利落,比我罗嗦的强多了

其实还是说详细些要好,大家看的明白

无限感动中……
我用的是752型
非常感谢！让我学到了这么多！

1 不同型号分光光度计对测量结果有影响吗？
影响肯定有，但不会太大，要不然大家做同一个样品的结果就都不一样了！
2 国标上说以蒸馏水为参比液，把零号管的吸光度扣除，做标准曲线。可不可以直接用零号管作为参比溶液？
可以，我们一直都是这样做的。
3 若样品吸光度为零，带入到方程中求出样品含量为负值怎么办？怎样解释呢？
没必要进行计算，结果报小于最低检出限。
4 比色皿的不同光程之间测出值是否成倍数关系?
和线性范围一样，一定范围内成 倍数关系。
5 做标准曲线的吸光度值非常低，但线性很好，可以用吗？
可以用，但当样品含量低时应注意准确度。

3 若样品吸光度为零，带入到方程中求出样品含量为负值怎么办？怎样解释呢？


我觉的负值应该是噪音＋实验误差，这是难免的

可是我要做曲线啊，在曲线上应该怎么表示呢？

可以通过回归方程计算而不在曲线上显示