【求助】新柱子没用几天就莫名其妙出现双峰怎么办？

验收过了么？没验收就给工程师反应情况换个吧

LZ，用保护柱了吗？

ashel(ashel) 发表:用的反相C18的长柱子，因为之前的可能用的时间长了，经常拖尾，清洗、再生过也不行，所以买了新柱子，结果新柱子在开始用的两天是好好的，所有的峰都很好，但是用到第三天第四天的时候就会很快出现拖尾，然后就变成双峰，一开始以为柱子的问题，和商家联系，换了两次，这次用第三个新的柱子了，还是这样，到第三天就突然双峰了，因为我同时检测四个物质，到后来四个物质都出现了双峰，现在真是郁闷死了，我的流动相是 乙腈：20mM的乙酸铵溶液=30：70，样品用的流动相溶解的，乙酸铵现在也都是现配现用的，进样量20ul，后来试过 10ul，同样双峰，为什么会这样呢？

下面是两个图，第一张是一开始好的时候的图，第二张就是出现双峰的图（样品浓度不一样）




分裂的四个峰

应助达人

20mM的乙酸铵的ＰＨ是多少？我也觉得要加保护柱，可能是柱头污染了。咨询一下色谱柱工程师，问一下能不能反冲，如果能，那就反冲一下试试，如果能恢复，就说明色谱柱头污染。

没有用保护柱，只有一个在线过滤器，乙酸铵溶液的PH值大概在6.5左右

您好，从表观上看，柱子已经坏掉了。

原因分析：
1您的色谱柱是否耐受你所选择的流动相PH值；
2柱温箱温度是多少，是否超过柱子耐受范围；
3流速多少，压力多少，是否超过柱子最大耐受压力；
4样品是什么东西，这个很重要，也许含有的一些小杂质会损坏柱子，比如含有微生物，金属，催化剂等等。

色谱柱填料碎了，粒径的分布发生改变，是造成多重峰的根本原因。

你没测乙酸铵溶液的pH值吗？怎么能不知道流动相的PH就上也液相的呢？

你的看法有问题吧。如果是柱子污染了，那么基线会不断漂移，新柱子不可能那么快就污染。原因可能是新买的柱子固定相塌陷了，要再生下。用小流速的甲醇或者异丙醇长时间冲洗，使固定相恢复原状就好了，个人意见。

ph值（6.3）是在柱子的使用范围内（2-8）

柱温是30，这个也在柱子的允许范围内

流速是0.8，流动相跑的时候压力940 psi左右（正常出第一张图的时候，后来出双峰的时候压力那个时候已经降低到800左右了）

样品是空白血浆样品添加了标准品处理过后上样，空白血浆样在该条件下可以算是很干净的了，基本没有杂峰（上面第一张图就可以看出）

这样的情况我也出现过
这个是正常的峰

这个是浓度改变后出现的双峰


我也不知道具体的是什么原因~可能是样品浓度的改变而照成双峰的出现。