【第三届原创参赛】农残实验室标准操作程序(9月)

乐果

2010/09/08

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实验室建设

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农残实验室标准操作程序（SOP）

一。目的

为了保证新鲜水果和蔬菜中的农药残留在法定的最大残留允许限量（MRLs）以下，。达到安全农产品的要求，特提供前处理方法的一个标准操作规程，以便对有机磷、有机氯、氨基甲酸酯类农药准确分析。

二.内容提纲

1. 仪器设备

2. 试剂和实验材料

3. 样品制备方法

4. 分析方法

5. 定性

6. 定量

7. 确证

8. 报告

三.正文：

1.仪器设备

组织粉碎器

电子称（0.1g）

超声波

振荡器

均质器

旋转蒸发仪

水浴锅

氮吹仪

离心机

SPE装置

气相色谱配有ECD检测器

气相色谱配有TSD检测器

液相色谱配有UV检测器

2.试剂和材料

乙腈 HPLC级

丙酮 HPLC级

正己烷 HPLC级

甲醇 HPLC级

乙酸乙酯 HPLC级

氯化钠（ACS级）

具塞量筒（100ml）

玻璃漏斗（直径9公分）

离心管10cm

定量滤纸（检验无干扰物）

烧杯（150ml）

微量移液器（50、200、1000微升）

NH₂固相萃取柱(Varian 500mg/6ml、500mg/3ml、250mg/3ml)

Carb固相萃取柱(Varian 500mg/6ml、500mg/3ml、250mg/3ml)

PSA固相萃取柱（Varian 500mg/6ml）

C18固相萃取柱（Varian 500mg/6ml）

Florisil固相萃取柱（Varian 1000mg/6ml）

微膜过滤（0.45μm Φ25mm 0.45μm Φ13）

样品瓶（棕色或无色2ml 色谱科）

标样储液瓶（棕色 10ml 20ml 40ml 色谱科）

分析柱 ECD 60m×0.32mm×0.25μm DB-5

30m×0.32mm×0.25μm DB-5

TSD 60m×0.32mm×0.25μm DB-1701

30m×0.32mm×0.25μm DB-1701

HPLC C18 4.6mm×25cm×5μm Waters

C8 4.6mm×25cm×5μm Waters

RP18 4.6mm×25cm×5μm Waters

3.样品制备方法

3.1样品处理

a.每日从原料库及车间采集原料样品及半成品样品，样品数量不少于5个，重量不少于454克.

样品按照农业部NY/T789-2004标准取样，不进行洗涤。

下面列举某些样品处理方法

种类	处理
杏仁和所有坚果	去核取果肉
梨	去籽
香蕉	去皮
豆类	全部
甜菜萝卜	根茎和叶分别取样
胡萝卜	去顶
樱桃	去籽
柑橘类	去皮
椰子	取果肉、果汁
玉米	去种皮
大蒜、洋葱	去茎、去皮
葡萄	去茎
韭葱	去根
芒果	去核
瓜	去茎
油桃	去核
葱	去根
豌豆	全部
桃	去核
花生	去皮
青椒	全部
菠萝	去皮
李子	去核
草莓	去冒
小南瓜	带茎
西红柿	全部
叶菜类	去根
花菜类	去叶
猕猴桃	去皮

ｂ.对于较大样品如西瓜、土豆、茄子等先切成块，菜板上要垫上牛皮纸，每一个样品换一张，菜刀每个样品要冲洗一次。要保证样品均匀有代表性，不要切得太碎或成为液体。

ｃ．在粉碎机中加工样品，加工好的样品要放在聚乙烯袋中。

3.2样品萃取

3.2.1取样10-20g在离心管中，加入30ml乙腈在均质机中高速均浆3min

3.2.2离心机离心3min将上清液倒入100ml具塞量筒中，残留物再加入20ml乙腈。

3.2.3超声波萃取20min后离心合并上清液。在具塞量筒中加入25ml PH=7.0饱和食盐水，充分震荡静置分层。

3.2.4静止10min，让乙腈相和水相充分分离。

3.3样品净化

3.3.1蒸发

a. 将上层乙腈液分离后除水，均匀分装在三个旋转蒸发瓶中。

b. 减压浓缩至近干。分别加入2ml丙酮正己烷（1：1）、2ml

正己烷、2ml乙腈，用于有机磷、有机氯、氨基甲酸酯检测。

3.3.2用于有机磷检测

a. 将烧杯中2ml丙酮正己烷过串联的Carb/NH₂，再用15ml丙酮正己烷充分清洗直至洗净分别过SPE柱（C/N）。

b. 接收液氮吹仪氮吹近干后1：1丙酮正己烷定容1ml。再用GC分析。

3.3.3用于有机氯检测

a. 将烧杯中2ml正己烷过Florisil柱，再用15ml正己烷充分清洗直至洗净分别过SPE柱.

b.接收液氮吹仪氮吹近干后1：1丙酮正己烷定容1ml。再用GC分析。

3.3.4用于氨基甲酸酯类分析

a. 将烧杯中2ml乙腈加入适量水过C18柱之后除水过PSA柱。

b. 接收液氮吹仪氮吹近干后乙腈定容1ml。再用HPLC-UV分析.

4.分析方法

4.1进样程序

遵循下列程序：溶剂、低浓度混标、高浓度混标、溶剂、样品（≯13个），低浓度混标。

4.2有机磷扫描

4.2.1仪器配置：TSD检测器，DB-1701柱，Star化学工作站

4.2.2进样量1微升

4.2.3操作条件：进样口260℃，检测器300℃，柱温80℃保持1min以30℃升温至280℃保持20min；载气为氮气流速为1.5ml/min氢气4ml/min空气为175ml/min。

4.3有机氯扫描

4.3.1仪器配置：ECD检测器，DB-5柱，n2000化学工作站

4.3.2进样量1微升

4.3.3操作条件：进样口260℃，检测器300℃，柱温80℃保持1min以30℃升温至280℃保持20min；载气为氮气流速为1.5ml/min.

4.4氨基甲酸酯类农药扫描

4.4.1仪器配置;HPLC装有四元泵溶剂梯度淋洗系统，BREEZE色谱工作站，UV检测器。

4.4.2进样量20微升

4.4.3操作条件

流速0.5ml/min

时间（min）	乙腈（%）	水（%）
0	20	80
2	20	80
16	90	10
18	90	10
18.1	20	80

5.定性

样品测得的保留时间要与农药标样测得的保留时间相符，对于GC，先出峰的RT误差≯0.005min，后出的峰RT误差≯0.01min对于HPLC，RT误差≯0.15min

6.定量

6.1单点校正：

公式：

样品响应值（峰面积）

×标样量（ng）

＝农药量（ng）

标样响应值（峰面积）

注：

a. 测得的农药包括在每日检查仪器的混标中，用混标中相应标样的响应值和含量计算。

b. 测得的农药不包括在每日检测的混标中或混标中峰面积变化＞125%或＜75%的目标物，要用相近浓度的单个标样校正，计算用校正标样的响应值和含量。

c. 标样量：气相色谱1μl标样含标样量，液相色谱201μl标样含标样量。

6.2多点校正：

公式：

样品响应值

＝农药量（ng）

斜率

注：配制至少三个浓度的单个标样，做标准曲线，计算斜率

6.3样品中农药残留量计算（以ng/mg或ppm表示）

X(ppm)=

农药量（ng）

样品量（mg）

6.4添加回收率测定

为了保证分析结果的准确，每日在分析样品时，要添加一组包含六总农药标样的混标到任意一个测试样品中，计算添加回收率。回收率应在70-120%范围内。

7.确证

发现样品中有超过最大残留限量的农药残留（超标），需要进一步确证，给出准确和精确的定性、定量结果。

在检测当天，由另一位分析人员重新称取该样品换用不同的提取试剂（乙酸乙酯）按照SOP程序重新分析，并将样品保存于冷冻室内，贴好标签（注明样品号、日期、超标农药、超标残留量）

在分析时换用不同的柱子或不同的检测器进行确证。

8.报告

8.1质量保证数据表（回收率结果表）

8.2 样品分析报告