微雨燕双飞
第5楼2010/11/02
答:
a 2,4-二硝基氟苯衍生优点:DNFB衍生产物分析时信噪比较高,因而检出限较低;在同一款色谱柱上,DNFB衍生产物的峰形更对称;DNFB可以衍生半胱氨酸(异硫氰酸苯酯不行)
b 2,4-二硝基氟苯衍生缺点:副产物较多,如2,4-二硝基苯酚和2,4-二硝基氟苯残留物均有可能干扰分析,所以其方法开发中调整流动相的工作更艰难一些;另外,再图上也可看出,虽然19种2,4-二硝基氟苯-氨基酸衍生物与干扰物全分开了,但分离度要差于异硫氰酸苯酯衍生;衍生天冬酰胺和谷氨酰胺时,这两种化合物分别分解为天冬氨酸和谷氨酸,因而在游离氨基酸分析时,不可用于这两种化合物的分析,对于蛋白质分析无影响,因为蛋白质水解过程中两种酰胺已经分解成相应的氨基酸,这与衍生无关。
A异硫氰酸苯酯衍生:除半胱氨酸以外其余均可衍生;分离度更好;
B 异硫氰酸苯酯缺点:信噪比较低,因而检出限稍高;无法用于半胱氨酸衍生。
根据两种方法的特点:游离氨基酸,比如注射液、啤酒、其他生物样品中游离氨基酸的分析时,一般建议采用DNFB法;蛋白质中氨基酸,比如粮食、饲料、动物蛋白等中氨基酸组成分析,建议采用异硫氰酸苯酯法。
快乐
第6楼2010/11/03
谢谢 微雨燕双飞版主这样详细的解答。
微雨燕双飞
第8楼2010/11/03
很多资料都指出要用安瓿瓶,但是需要火焰封口,操作很麻烦,做实验前就被我否定了。我使用的是20 ml细口带隔垫旋盖的瓶子,瓶身为棕色,厚壁(约0.5~1 mm),盖为硬质聚四氟乙烯,内衬隔垫也是聚四氟乙烯。因为壁很厚,根本不必担心爆炸,您想一下,安瓿瓶的壁更薄,也没爆炸啊。我起初担心会泄露,但事实证明根本不漏气,实验前我先用盐酸水溶液试过了,质量未损失。图片暂时没有。