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【求助】延长梯度时间、更换长柱子均无法得到很好的分离？

  • zhangcsno114
    2010/09/30
    • 私聊

液相色谱（LC）

  • PP-HPLC无法分开

    研究对象是动物组织的一种分子量约为10KD的蛋白（通过 SDS-PAGE检测判定的分子量，尚未鉴定无法确定该蛋白是否有报道），具体分离纯化过程所用的是酸性缓冲液，目的是通过RP-HPLC纯化得到高纯度的样品进行鉴定。有空白运行梯度排除了梯度峰，Simadzu VP-ODS C18,4.6×150mm ,5μm柱子。1ml/min 流动相A:0.1%TFA 水溶液，流动相:0.08%TFA 乙腈溶液。10%A 平衡5min,30min内梯度到60%B。延长梯度时间、更换长柱子均无法得到很好的分离。改善梯度条件（在10%A 平衡5min,55min内梯度到60%B，90%B 5min 10%A 5min）峰型同前，降低进样浓度，换长柱子也没有改善。
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    +关注 私聊

  • 有水有渝

    第1楼2010/09/30

    应助达人

    用RP-HPLC的保留时间是多少，能用GPC吗？

0
    +关注 私聊

  • Vigorous

    第2楼2010/09/30

    那你换一种填料的珠子呢？是不是这种填料不适合？

0
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  • 21kgtan

    第3楼2010/09/30

    10KD的大分子用C18好像不合适
    建议换成C8或者C4的柱子可能会好些

0
    +关注 私聊

  • flyaway

    第4楼2010/09/30

    我也觉得应该换GPC的柱子，至少换成300A的柱子吧

0
    +关注 私聊

  • juegen

    第5楼2012/08/11

    我也觉得应该换GPC的柱子，至少换成300A的柱子吧

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