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【求助】335nm处吸光值都非常低，怎么办？

  • feixiang3152
    2010/11/29
    • 私聊

毛细管电泳（CE）

  • 大家好：
    我最近在做蛋白质修饰率的测定。可是我每次做的结果都是未修饰和修饰过的在335nm处吸光值都非常低，大概在0.003或0.004。我采用的是TNBS法，具体如下：
    1mL蛋白液（修饰蛋白和未修饰蛋白）+1mL4%碳酸氢钠+1mL0.1%TNBS，混匀后40°反应2h，再加入1mL10%SDS和0.5mL1N盐酸，在335nm处读取吸光值。修饰后蛋白质的吸光值/修饰前蛋白质的吸光值为残留氨基酸量。每次测定的结果都非常奇怪，那么低，我感觉不可信，根据原理应该是修饰后的吸光值小于修饰前的吸光值才合理啊。我也不知道吸光值应该在怎样的范围内正常？我们实验室没有人做过，请大家指点一下吧！哪里有问题呢？谢谢
  • 分
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    +关注 私聊

  • userwzy

    第1楼2010/11/29

    你为何选335nm，我记得蛋白一般在280nm，有相对较强的吸收啊

0
    +关注 私聊

  • sunpengwjh

    第2楼2010/11/30

    选择此波长时候有具体的文献支持？

0
    +关注 私聊

  • i_am_ling

    第3楼2010/11/30

    楼主做的有试剂空白么？

0
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