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【求助】毛细管环糊精电泳分离黄酮

毛细管电泳(CE)

  • 各位请教一个棘手的问题:

    本人用毛细管环糊精电泳分离中药中的黄酮类物质,用的硼砂,β环糊精体系,ph是9..4左右。分离7个marker,包括槲皮素,芦丁,芹菜素,黄芩苷等。

    如果直接用缓冲液,对照品可以分开,但是中药样品里的杂峰和待测物分不好,所以参照文献,加入了乙腈作为改性剂,效果很好,峰很尖,并且峰的保留时间延长后能够很好的分离,但是问题出现了:

    1. 开始做的时候还好,慢慢的峰的重现性就很差,甚至连顺序都有差异。然后峰出现拖尾,变宽。我的乙腈的加入比例是1:4,即缓冲为4份,乙腈为1份。是否太大?

    2. 出现峰变宽的情况应该如何处理?用高浓度的NAOH冲柱子?我有尝试过,但是发现效果不是很理想。
    3. 进样的时候,每针之间用什么溶剂冲比较好?坛子里有人说用NAOH,但也有说NAOH不好的 ,到底如何解决?

    4..如果想改善样品中各个峰的分离度,即优化条件,主要靠调节什么??(比如想改善峰与峰之间的分离度,在反相液相色谱里面就是加大水相)

    希望高手能够回答,谢谢
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  • sunpengwjh

    第1楼2010/12/15

    可以试一下用碱液冲洗,后用缓冲溶液平衡,看看怎么样!

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  • babylon

    第2楼2010/12/15

    我尝试用1M的NAOH冲洗后,用水冲再用缓冲液平衡,但是改善不太明显。你说的缓冲液平衡的时间是多长?1小时?我只平衡了10min而已

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  • userwzy

    第3楼2010/12/16

    如果是开始分离好,后来重复性变差,感觉是柱子的状态不好了。 普通的进样之间,只有buffer 冲洗就可以了,有的时候需要NaOH,H2O,buffer, 有些时候可以用酸,NaOH,H2O,buffer, 甚至用有机溶剂冲洗。

    想改善分离度,你可以先调节一下ACN的比例。

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  • babylon

    第4楼2010/12/17

    感觉毛细管电泳用着用着就效果不太稳定了,不过确实,多用buffer平衡一下就会有很好的重复性

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  • sunpengwjh

    第5楼2010/12/18

    可以的,每次进样之间也可以用缓冲溶液来平衡一下!

    babylon(babylon) 发表:感觉毛细管电泳用着用着就效果不太稳定了,不过确实,多用buffer平衡一下就会有很好的重复性

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  • poplar_yang

    第6楼2010/12/18

    感觉是柱子的状态不好了

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  • babylon

    第7楼2010/12/20

    是的,今天电流加不上去了?不晓得为什么
    瓶子底下还有小液珠
    像倒流进去的

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  • i_am_0

    第8楼2010/12/20

    有小液珠?什么意思?小瓶不是都有缓冲溶液的么?能在详细的说一下么?

    babylon(babylon) 发表:是的,今天电流加不上去了?不晓得为什么
    瓶子底下还有小液珠
    像倒流进去的

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  • cpudaxiao

    第9楼2010/12/24

    你的条件里乙腈的比例太大了,所以导致重现性差。可以做个浓度梯度看一下。
    在分离缓冲液的成分固定时可以调节浓度和PH,或者加分离改性剂。
    进样时每针之间不要用浓NAOH,对管壁的改变太剧烈了,用8-10 MIN 的缓冲液冲就好了,连续进三针以后考虑用0.1 M 的NAOH冲1-2 min就可以了,

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  • babylon

    第10楼2011/01/02

    九楼,浓度梯度怎么个做法?俺考察了的,只有在4:1的时候峰分得还可以。要不分不开,很麻烦;另外高手,乙睛的浓度在多少重现性好一点??

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