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【求助】请论坛前辈指教荧光定量分析

  • zlovewei520
    2011/05/25
  • 私聊

分子荧光光谱

  • 有这么几个问题请教,
    1、工作曲线如何建立?在仪器上具体如何操作。
    2、分子荧光的读数很不稳定,对同一浓度的溶液荧光光强读数前后不一致,这是否正常?
    非常感谢。
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  • 悠旸

    第1楼2011/05/25

    1.外标法做工作曲线。这与大多数分析仪器类似的,具体就是定好激发和发射波长,在一定浓度范围内横坐标的浓度和纵坐标的相对强度成正比。
    2.荧光因为相应值为相对强度通常是几百上千,所以看上去比紫外吸收值波动大,还有一个原因是荧光通常是单光束仪器,要求光源及主机充分预热。并且环境特别是温度对相对强度影响很大,所以要保持恒温恒湿。另外检查是否有漏光现象

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  • zwyu

    第2楼2011/05/25

    还有一个需要考虑的因素是物质荧光本身的不稳定性。

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  • zlovewei520

    第3楼2011/05/25

    回复两位前辈,我使用了蒸馏水做样品溶液测定的。感觉波动值比较大。想请问一下,荧光光度计的准确度和精确度如何认定?适用仪器分析的1%原则吗?还有我打算使用维生素E做样,使用水溶液可以吗?

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  • qz20032000

    第4楼2011/05/31

    您所谓的荧光值不稳定如果是单向的,就完全有可能是样品本身的原因,而不是仪器的稳定性有问题。

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