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【求助】红霉素不出峰

  • jiashaodong1
    2011/06/10
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 最近用高效液相(C18色谱柱 250mm * 4.6, 5um)做红霉素标准品时检测不到色谱峰。看文献大多数都用磷酸盐缓冲溶液和乙腈作为流动相,之后用紫外(210nm)检测。目前因为缓冲盐干扰其他组员的检测,所以不得不尝试用纯水(或者加了0.5%醋酸的纯水)和乙腈做流动相。但是奇怪的是进样品后即使用100%乙腈冲一个小时都见不到峰。我可以确定标准品,检测器和色谱仪器没有问题。当然样品浓度也够大。。有没有遇到这种情况的啊??个人感觉是标准品一直留在色谱柱里没出来,但是觉得说不通啊!!晕!!! 希望大家给指点下,先谢了~~~ 【目前手边没有其它C18色谱柱】

    再补充的详细些。色谱柱为Thermo scientific BDS Hypersil C18,比较新。楼下“老多”说的不是什么流动相都出峰也是我比较关心的。难道红霉素必须得用缓冲盐?
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  • 老多_小多

    第1楼2011/06/10

    不是什么流动相都可以出峰的

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  • hudayaoxue

    第2楼2011/06/11

    要注意样品在流动相中的溶解度问题。

    比如,一个物质在甲醇中溶解好,在乙腈中溶解度差。你用乙腈与水作流动相,洗不下来。用甲醇与水,则保留时间比较长。把二者按一定比例混合,则可以得到比较合适的保留时间。

    在不用盐的情况下,你可以考虑乙腈与甲醇以一定比例混合作有机相,然后水相用纯水。

    另外,红霉素呈碱性。可适当添加微量三乙胺(0.1%)改善峰形。

    自己还没做过。大致规律是这样。你摸索一下。

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  • 该帖子已被版主-boboenid007加2积分,加2经验;加分理由:很有参考性~~
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  • xiaoqing5182001

    第3楼2011/06/11

    红霉素在纯水的溶解度很小 这个是限制因素
    可以尝试下把缓冲盐的浓度减小 很低的缓冲盐浓度就行
    祝你好运!

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  • 有水有渝

    第4楼2011/06/13

    应助达人

    红霉素为白色或类白色的结晶或粉末;无臭,味苦;微有引湿性。在甲醇、乙醇或丙酮中易溶,在水中极微溶解。



    这个条件下如何影响其它组分的分离的?

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  • jiashaodong1

    第5楼2011/06/13

    谢谢!

    xiaoqing5182001(xiaoqing5182001) 发表:红霉素在纯水的溶解度很小 这个是限制因素
    可以尝试下把缓冲盐的浓度减小 很低的缓冲盐浓度就行
    祝你好运!

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  • jiashaodong1

    第6楼2011/06/13

    不是影响其他组分,要是用缓冲盐会影响其他组员的实验。

    有水有渝(xky0230699) 发表:红霉素为白色或类白色的结晶或粉末;无臭,味苦;微有引湿性。在甲醇、乙醇或丙酮中易溶,在水中极微溶解。



    这个条件下如何影响其它组分的分离的?

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  • jiashaodong1

    第7楼2011/06/13

    首先表示感谢。结合所有人的回复,看样子这个溶解度对红霉素的影响还真是不小。我试试你的说法,要是得到好结果我会及时反馈信息的~~~

    hudayaoxue(hudayaoxue) 发表: 要注意样品在流动相中的溶解度问题。

    比如,一个物质在甲醇中溶解好,在乙腈中溶解度差。你用乙腈与水作流动相,洗不下来。用甲醇与水,则保留时间比较长。把二者按一定比例混合,则可以得到比较合适的保留时间。

    在不用盐的情况下,你可以考虑乙腈与甲醇以一定比例混合作有机相,然后水相用纯水。

    另外,红霉素呈碱性。可适当添加微量三乙胺(0.1%)改善峰形。

    自己还没做过。大致规律是这样。你摸索一下。

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  • 老多_小多

    第8楼2011/06/13

    流动相会影响组分在色谱柱的PKa值,就是分配,而且这个跟填料也有关系
    流动相不合适,也许一直被保留出不来也是可能的

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  • hbshixhj

    第9楼2015/05/03

    楼主 有没有结果呀

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  • 浪淘沙隐

    第10楼2015/05/04

    使用了0.5%的醋酸,波长又是210nm,这样的条件下,基线漂移非常严重的,色谱峰因为基线的漂移被掩盖了都有可能。

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