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【极限体验】利用Ultimate XB-C18柱分析某酸性黄酮类样品的初步探讨(6月份)

幽灵龙猫

2011/06/12

前言
黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环（A环和B环）通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物，其基本母核为2-苯基色原酮。黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团。黄酮类小部分以游离态（苷元）的形式存在，多数与糖结合成苷。
本实验主要内容为运用Ultimate XB-C18柱对两个连有葡萄糖醛酸基的黄酮类化合物进行分析，这两个主要成分为某药物在大鼠尿液中极性较大的代谢产物，为了制备得到这两个代谢产物，首先我们对该流分进行了分析条件的摸索，主要考察了在水相添加不同的酸对目标成分峰形的影响。
1. 仪器和试剂
岛津高效液相色谱，LC-10AD泵，SPD-10A检测器，古老的N2000工作站。
甲醇(色谱纯，天津大茂)，水(重蒸水，SPU)，三氟乙酸(TFA, Dikma, USA)，乙酸(分析纯，天津大茂)，其它试剂均为分析纯。
2. 色谱条件
色谱柱：Ultimate XB-C18柱(5μm, 4.6x250mm)
流动相：甲醇-水(35:65,v/v)；水含0.01%乙酸或0.01%三氟乙酸
流速：1 mL/min
柱温：35℃
检测波长：271nm
进样量：20μL
3.样品的制备
因为涉及保密内容，此部分略去。
4.实验结果

图1. 流动相为甲醇-水(35:65,v/v)，水含0.01%乙酸，该条件下的色谱图

图2.流动相为甲醇-水(35:65,v/v)，水含0.01%三氟乙酸，该条件下的色谱图
5.结果与讨论
5.1 实验目的
本实验主要应用Ultimate XB C18柱对某药物大鼠口服给药后尿液代谢产物进行柱色谱后得到的某流分中的两个主要成分进行分析条件摸索，目的是为制备液相提供条件参考。
5.2 添加不同酸的考察
试用该色谱柱时就和小S交流过，要耐酸，但是考虑到对色谱柱的保护，我们只在水相中加入体积含量为0.01%的酸(实际上，刚开始听实验室一个过来人说加6滴，我稀里糊涂就听了，殊不知这样很不可取，我们要有量的概念)。
我被警告过说三氟乙酸对色谱柱不好，为了保护我心爱的Ultimate XB C18柱，我就听取别人的建议，不用三氟乙酸，用乙酸代替，但是结果和我们期待的差的太远，从图1 可以看出，0.01%的乙酸几乎没起多大作用，色谱峰拖尾之严重程度，让人感觉很杯具。
之前一直用三氟乙酸，于是，就重新配了一个含有0.01%三氟乙酸的水，这时候我们就看到了图2，看到这样的图，您的心情是不是也一下子由阴转晴，至少我是很happy的，无论是峰形还是分离度都很满意。我们还可以看到，相同的进样量，图1 电压值仅20多mv，而图2 电压值达到160mv，宽而扁的拖尾峰变成了尖而正态的色谱峰。
5.3 总结
一句话，三氟乙酸该用的时候还是得用，但是这和待分析成分的理化性质有很重要的关系，如果你的化合物酸性很强，我建议你还是不用乙酸的好，不给力啊，但是以上这些结果归根结底还是要把功劳送给Ultimate XB C18柱，没有它就没有这么精彩的结果，也不会给大家的实验带来有参考意义的内容。

精
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dahua1981

第1楼2011/06/12

应助达人

是不是因为乙酸稳定性不如三伏乙酸啊

0

头像更新中，请稍候…

第2楼2011/06/12

能跑出这样的图，说明你是高手
拖尾能拖成这样，说明这样品是好样品

0

幽灵龙猫

第3楼2011/06/12

这是我的VIP样品酸加多了回收的时候还怕变纠结中。。
环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:能跑出这样的图，说明你是高手
拖尾能拖成这样，说明这样品是好样品

0

精
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第4楼2011/06/12

那就回收到一定体积的时候用冷冻干燥。。
幽灵龙猫(xiaodu2007693) 发表:这是我的VIP样品酸加多了回收的时候还怕变纠结中。。

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小卢

第5楼2011/06/12

梯度走的？30min的小峰是目标物吗？

0

xmqhp

第6楼2011/06/13

应该是有污染了，或这乙酸跟某些成份有反应产生的杂质。

0

阿三

第7楼2011/06/13

什么原因啊？

0

头像更新中，请稍候…

第8楼2011/06/13

原因我已经清楚了，他这样品吧，加乙酸不行，跑成这样
得加三氟乙酸，跑出两个很好的峰，等他上图吧
我已经抢先看完了
阿三(junqiwudi) 发表:什么原因啊？

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头像更新中，请稍候…

第9楼2011/06/13

不是，是样品对酸的选择性
xmqhp(xmqhp) 发表:应该是有污染了，或这乙酸跟某些成份有反应产生的杂质。

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头像更新中，请稍候…

第10楼2011/06/13

实际上，刚开始听实验室一个过来人说加6滴，我稀里糊涂就听了，殊不知这样很不可取，我们要有量的概念

鄙视鄙视，马后炮啊
我就不信，你做制备的时候还算酸浓度

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