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细胞破碎方法
去年冬天
2011/09/25
私聊
综合仪器采购
1、高速
组织
捣碎
:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度
此法适用于动物
内脏
组织、植物肉质
子等。
2、
玻璃
匀浆器匀浆
:先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将
细胞
研碎,此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机
高,适用于量少和动物脏器组织。
3、
超声
波处
理法
:用
定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂,此法
适用于
微生物
材料,用
肠
杆菌
制备各种酶,常选用50-100毫
克菌
体/毫升浓度,在1KG至10KG
频率
下处理10-15分钟,此法的缺点是在处理过程会产生大量的热,应采取相应降温措施。对超声波敏感和
核酸
应慎用。
4、反复冻融法:
将细胞在-20度以下冰冻,室温融解,反复几次,由于细胞内冰粒形成和剩余
细胞液
的盐浓度增高引起溶胀,使细胞
结构
破碎。
5、化学处理法:
有些动物细胞,例如
肿瘤
细胞可采用十二烷基磺酸钠(
SDS
)、去氧
胆酸钠
等
细胞膜
破坏,
细菌细胞壁
较厚,可采用
溶菌酶
处理效果
好。
无论用哪一种
方法
破碎组织细胞,都会使细胞内
蛋白质
或核酸水解酶释放到
溶液
中,使
大分
子生物降解,导致天然物质量的减少,加入二异丙基氟磷酸(DFP)可以
抑制
或减慢
自溶作用
;加入碘
乙酸
可以抑制那些活性中心
需要
有疏基的蛋
白水
解酶的活性,加入苯甲磺酰
氟化物
(PMSF)也能清除蛋白水解酥活力,但不是全部,还可通过选择pH、温度或
离子
强度等,使
些条件都要适合于目的物质的提取。
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+关注
私聊
wccd
第1楼
2016/02/08
应助达人
高速破碎发用的最广泛。
0
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