快乐 2011/10/01
[back=rgb(251, 251, 249)][color=rgb(241, 11, 0)][size=4][font=SimHei]极限色谱柱可以反向冲洗吗？原因是？ 答：[/font][/size][/color][/back][back=rgb(251, 251, 249)][color=#0021b0][size=4][font=SimHei]极限的是可以反向冲洗的。由于两端的筛板是一致的。[/font][/size][/color] [color=rgb(241, 11, 0)][size=4][font=SimHei]如果色谱柱柱前段被污染，解决办法有哪些呢？[/font][/size][/color] [font=SimHei][color=rgb(241, 11, 0)][size=4]答：[/size][/color][color=#0021b0][size=3]解决办法有清洗和再生。 [/size][/color][/font][/back][back=rgb(251, 251, 249)][color=#0021b0][size=3][font=SimHei] 1、再生被污染HPLC柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除。如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的，利用简单的清洗步骤来除去这些污染物往往就能恢复其色谱性能。 2、经过等度运行后的色谱柱，有时用90～100％含量的溶剂B（双溶剂反相系统中洗脱能力较强的溶剂，如甲醇、乙晴、四氢 呋喃等）冲洗20个柱体积可以清除污染物（色谱柱的柱体积和空柱管体积概念不同，一根4.6x250mm柱子的柱体积只有2.5ml，4.6x150mm是1.5ml,2.1x150mm是0.28ml,4.6x50mm是0.5ml,3.0x150mm是0.64ml）。 3、如果使用的是缓冲盐系统，不要直接切换到强溶剂，突然转换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲盐沉淀，这样会导致更大的问题，如柱头筛板堵塞、连接管路堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。应该先用无缓冲盐流动相（即把缓冲液换成水），冲洗5～10个柱体积以后才切换到用强溶剂清洗。 4、有时候，强溶剂B也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉。那么就需要用更强的溶剂或者是系列溶剂组合。如果污染物不是生物质的，一种强溶剂或几种溶剂组合清洗基本能解决问题。柱子生产厂家的网页和产品说明书上很多也有清洗方法推荐。 5、所有的清洗方法的模式普遍都类似，溶剂系列中所用溶剂的强度逐级增加，最后一个溶剂往往是非极性（疏水性）很强的（如醋酸乙酯甚至是烷烃），以便于溶解脂质、油类等非极性污染物。溶剂系列中每个溶剂都保证能与下一个溶剂互溶。整个清洗过程结束后，在回到原来的流动相体系前，必须借助一个中等强度的互溶性非常好的溶剂过渡。例如， 异丙醇是一个非常好的过渡溶剂，它既能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。但是异丙醇粘度非常大，必须确保较低的流速以免使泵压过高。还有，如果使用[url=http://www.instrument.com.cn/zc/ChromatoDetector.asp]紫外检测器[/url]，须避免选用在紫外区域有吸收的溶剂，要不然需使用大量的溶剂冲洗才能使基线平稳。 6、对于典型的硅胶基质键合反相柱，在未使用缓冲溶液的条件下，推荐使用以下清洗溶剂系列： 100％甲醇---100％乙晴---75％乙晴/25％异丙醇---100％异丙醇---100％二氯甲烷---100％正己烷用每种溶剂冲洗至少10个柱体积，对于250mm×4.6mm的分析柱，合适的冲洗流速是1～2ml/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡，然后回到原来的流动相体系（但不含缓冲盐），最后回复到起始流动相配置。四氢呋喃也是另外一种常用的清洗溶剂。如果怀疑柱子被严重污染，还可用二甲亚砜（DMSO）或 二甲基甲酰铵和水按50：50的比例混合，以低于0.5ml/min的流速冲洗色谱柱。 7、成功再生反相柱子是一个非常耗时的过程，溶剂冲洗序列可以编成一个梯度洗脱的程序自动进行，以方便过夜操作。 8、还有一个老问题就是冲洗再生色谱柱是正冲还是反冲。污染物是在柱子入口端聚积，反向冲洗当然是把污染物洗出柱子最方便的。现在的色谱柱，高压填充的柱床很稳定，无须担心反冲会冲坏柱子的问题。但如果碰到厂家在入口端使用孔径相对较大筛板的情况，就不能反冲。另外冲洗柱子时通常不连接检测器。柱子冲洗频率取决于有多少污染物通过进样带到柱子里了，一般反相柱，在分离度完全丧失或者洗脱出不相关的物质峰之前，还是能承受相当程度的污染的，很多人倾向于等到有上述异常现象出现后，再进行清洗柱子，这样做，污染物累积程度高了，清洗起来也困难得多。所以，如你的反相柱经常进样很脏的样品，建议你定期做个清洗。清洗次数越多，每次清洗越容易。[/font][/size][/color][/back]
头像更新中，请稍候… 2011/10/01
1. 极限一直提倡的是“正向使用，反向冲洗”，这么做的理由，月旭官方在各种贴子里也强调过多次，原因是：“色谱柱两端的筛板是一致的”。 2. 已经得出“色谱柱柱前段被污染”的结论，说明污染物很强大，能够“穿透”预柱/保护柱，这种情况，想要把柱子救活，概率不会很大。不管怎么说，如果是售后“保质期”内，寄回厂家要求厂家帮忙处理一般是可行的。如果不是，按照传统方法，首先反向冲洗（别扯再生，很少听到有再生成功的，不过倒是可以走走这个程序），如果不行，柱子基本没得救了。那就大胆地拆开，取下筛板进行处理（比如甲醇、异丙醇、15%硝酸超声）；另外，如果柱前段能肉眼可见被污染（比如发黄发黑），可以抠掉部分填料，用相同填料进行填补，这是最后的办法。不过这么做，就算修好了，寿命也不会很长。 有使用如此强大污染力的样品的勇气，就应该有报废柱子的思想准备和重新购买色谱柱的能力，呵呵 先把答案顶上。。 小卢应该持续关注这个贴子啊 版主不在，答题的人会比较迷惘
arvid2007 2011/10/01
可以反冲，极限色谱柱里没有两端筛板不对称的情况，所以极限色谱柱都能反冲 [size=4]一般的正相反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。我们一直提倡的是：正向使用，反向冲洗。[/size]
dahua1981 2011/10/01
极限色谱柱可以反向冲洗吗？原因是？ 答：极限的是可以反向冲洗的。由于两端的筛板是一致的。 如果色谱柱柱前段被污染，解决办法有哪些呢？ 答：解决办法有清洗和再生。 清洗的方法： [back=#fbfbf9][color=#000000][size=2][font=SimSun] 1、经过等度运行后的色谱柱，有时用90～100％含量的溶剂B（双溶剂反相系统中洗脱能力较强的溶剂，如甲醇、乙晴、四氢 呋喃等）冲洗20个柱体积可以清除污染物（色谱柱的柱体积和空柱管体积概念不同，一根4.6x250mm柱子的柱体积只有2.5ml，4.6x150mm是1.5ml,2.1x150mm是0.28ml,4.6x50mm是0.5ml,3.0x150mm是0.64ml）。 2、如果使用的是缓冲盐系统，不要直接切换到强溶剂，突然转换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲盐沉淀，这样会导致更大的问题，如柱头筛板堵塞、连接管路堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。应该先用无缓冲盐流动相（即把缓冲液换成水），冲洗5～10个柱体积以后才切换到用强溶剂清洗。 3、有时候，强溶剂B也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉。那么就需要用更强的溶剂或者是系列溶剂组合。如果污染物不是生物质的，一种强溶剂或几种溶剂组合清洗基本能解决问题。柱子生产厂家的网页和产品说明书上很多也有清洗方法推荐。 4、所有的清洗方法的模式普遍都类似，溶剂系列中所用溶剂的强度逐级增加，最后一个溶剂往往是非极性（疏水性）很强的（如醋酸乙酯甚至是烷烃），以便于溶解脂质、油类等非极性污染物。溶剂系列中每个溶剂都保证能与下一个溶剂互溶。整个清洗过程结束后，在回到原来的流动相体系前，必须借助一个中等强度的互溶性非常好的溶剂过渡。例如， 异丙醇是一个非常好的过渡溶剂，它既能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。但是异丙醇粘度非常大，必须确保较低的流速以免使泵压过高。还有，如果使用[/font][/size][/color][url=http://www.instrument.com.cn/zc/ChromatoDetector.asp][color=#000000][size=2][font=SimSun]紫外检测器[/font][/size][/color][/url][color=#000000][size=2][font=SimSun]，须避免选用在紫外区域有吸收的溶剂，要不然需使用大量的溶剂冲洗才能使基线平稳。 5、对于典型的硅胶基质键合反相柱，在未使用缓冲溶液的条件下，推荐使用以下清洗溶剂系列： 100％甲醇---100％乙晴---75％乙晴/25％异丙醇---100％异丙醇---100％二氯甲烷---100％正己烷用每种溶剂冲洗至少10个柱体积，对于250mm×4.6mm的分析柱，合适的冲洗流速是1～2ml/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡，然后回到原来的流动相体系（但不含缓冲盐），最后回复到起始流动相配置。四氢呋喃也是另外一种常用的清洗溶剂。如果怀疑柱子被严重污染，还可用二甲亚砜（DMSO）或 二甲基甲酰铵和水按50：50的比例混合，以低于0.5ml/min的流速冲洗色谱柱。 再生方法 1、再生被污染HPLC柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除。如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的，利用简单的清洗步骤来除去这些污染物往往就能恢复其色谱性能。成功再生反相柱子是一个非常耗时的过程，溶剂冲洗序列可以编成一个梯度洗脱的程序自动进行，以方便过夜操作。 还有一个老问题就是冲洗再生色谱柱是正冲还是反冲。污染物是在柱子入口端聚积，反向冲洗当然是把污染物洗出柱子最方便的。现在的色谱柱，高压填充的柱床很稳定，无须担心反冲会冲坏柱子的问题。但如果碰到厂家在入口端使用孔径相对较大筛板的情况，就不能反冲。另外冲洗柱子时通常不连接检测器。柱子冲洗频率取决于有多少污染物通过进样带到柱子里了，一般反相柱，在分离度完全丧失或者洗脱出不相关的物质峰之前，还是能承受相当程度的污染的，很多人倾向于等到有上述异常现象出现后，再进行清洗柱子，这样做，污染物累积程度高了，清洗起来也困难得多。所以，如你的反相柱经常进样很脏的样品，建议你定期做个清洗。清洗次数越多，每次清洗越容易。[/font][/size][/color][/back]
arvid2007
第3楼2011/10/01
2.对于色谱柱柱前段被污染，先用甲醇、乙腈、四氢呋喃、异丙醇等强溶剂反向冲洗一下，实在没办法的时候就需要打开柱头挖掉污染的填料重新填了
再没办法就找色谱柱供应商的工程师帮忙
2.1色谱柱污染后把筛板卸下来超声清洗
对于色谱柱的污染，首当其冲的就是筛板，因此我们最常用的做法就是把柱头卸下来，把筛板拿去超声清洗。但是我们在拆卸过程中对色谱柱前端填料的损害远远大于污染照成的伤害，因为我们不是专业的。因此建议这一步能不做就不做。
2.1自己填装色谱柱
和第2.1条相同，这一步做法几乎可以把此色谱柱判死刑了，我们的填装工具有什么呢？就是手工的，其填装压力远远小于工厂内原始的填装压力。那么我们填装的结果会是个什么样也就很明显了。
在我看来，自己填装也就是练练手，熟悉一下这个过程，要把色谱柱维修好的可能性几乎为零。
2.3用异丙醇冲洗再生后，柱子效果更差了
这种情况我自己就遇到过，还好那根柱子本来就打算报废了，因此也没有照成多少损失。但是这是什么原因呢？其实很简单，就是在我反向冲洗前没有把管路中的污染物冲洗干净就直接接了柱子。所以说，方法是没有错的，色谱柱受污染时，我们应该先想到仪器也污染了！
yuduoling
第4楼2011/10/01
1、可以反冲，极限色谱柱里没有两端筛板不对称的情况，所以极限色谱柱都能反冲，一般的正相反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。
2、柱前段污染：
（1）反向冲洗或超声：如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇等冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，超声清洗，重新装入色谱柱。
（2）反向冲洗：如确定色谱柱头的填料被污染，先用甲醇、乙腈、四氢呋喃、异丙醇等强溶剂反向冲洗一下
（3）换填料：如果还解决不了问题，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。（可以自己换也可以请工程师换）
（4）换色谱柱：直接换色谱柱（有点奢侈）
快乐
第6楼2011/10/01
应助达人极限色谱柱可以反向冲洗吗？原因是？
答：极限的是可以反向冲洗的。由于两端的筛板是一致的。
如果色谱柱柱前段被污染，解决办法有哪些呢？
答：解决办法有清洗和再生。
1、再生被污染HPLC柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除。如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的，利用简单的清洗步骤来除去这些污染物往往就能恢复其色谱性能。
2、经过等度运行后的色谱柱，有时用90～100％含量的溶剂B（双溶剂反相系统中洗脱能力较强的溶剂，如甲醇、乙晴、四氢 呋喃等）冲洗20个柱体积可以清除污染物（色谱柱的柱体积和空柱管体积概念不同，一根4.6x250mm柱子的柱体积只有2.5ml，4.6x150mm是1.5ml,2.1x150mm是0.28ml,4.6x50mm是0.5ml,3.0x150mm是0.64ml）。 3、如果使用的是缓冲盐系统，不要直接切换到强溶剂，突然转换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲盐沉淀，这样会导致更大的问题，如柱头筛板堵塞、连接管路堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。应该先用无缓冲盐流动相（即把缓冲液换成水），冲洗5～10个柱体积以后才切换到用强溶剂清洗。 4、有时候，强溶剂B也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉。那么就需要用更强的溶剂或者是系列溶剂组合。如果污染物不是生物质的，一种强溶剂或几种溶剂组合清洗基本能解决问题。柱子生产厂家的网页和产品说明书上很多也有清洗方法推荐。
5、所有的清洗方法的模式普遍都类似，溶剂系列中所用溶剂的强度逐级增加，最后一个溶剂往往是非极性（疏水性）很强的（如醋酸乙酯甚至是烷烃），以便于溶解脂质、油类等非极性污染物。溶剂系列中每个溶剂都保证能与下一个溶剂互溶。整个清洗过程结束后，在回到原来的流动相体系前，必须借助一个中等强度的互溶性非常好的溶剂过渡。例如， 异丙醇是一个非常好的过渡溶剂，它既能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。但是异丙醇粘度非常大，必须确保较低的流速以免使泵压过高。还有，如果使用紫外检测器，须避免选用在紫外区域有吸收的溶剂，要不然需使用大量的溶剂冲洗才能使基线平稳。
6、对于典型的硅胶基质键合反相柱，在未使用缓冲溶液的条件下，推荐使用以下清洗溶剂系列： 100％甲醇---100％乙晴---75％乙晴/25％异丙醇---100％异丙醇---100％二氯甲烷---100％正己烷用每种溶剂冲洗至少10个柱体积，对于250mm×4.6mm的分析柱，合适的冲洗流速是1～2ml/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡，然后回到原来的流动相体系（但不含缓冲盐），最后回复到起始流动相配置。四氢呋喃也是另外一种常用的清洗溶剂。如果怀疑柱子被严重污染，还可用二甲亚砜（DMSO）或 二甲基甲酰铵和水按50：50的比例混合，以低于0.5ml/min的流速冲洗色谱柱。 7、成功再生反相柱子是一个非常耗时的过程，溶剂冲洗序列可以编成一个梯度洗脱的程序自动进行，以方便过夜操作。
8、还有一个老问题就是冲洗再生色谱柱是正冲还是反冲。污染物是在柱子入口端聚积，反向冲洗当然是把污染物洗出柱子最方便的。现在的色谱柱，高压填充的柱床很稳定，无须担心反冲会冲坏柱子的问题。但如果碰到厂家在入口端使用孔径相对较大筛板的情况，就不能反冲。另外冲洗柱子时通常不连接检测器。柱子冲洗频率取决于有多少污染物通过进样带到柱子里了，一般反相柱，在分离度完全丧失或者洗脱出不相关的物质峰之前，还是能承受相当程度的污染的，很多人倾向于等到有上述异常现象出现后，再进行清洗柱子，这样做，污染物累积程度高了，清洗起来也困难得多。所以，如你的反相柱经常进样很脏的样品，建议你定期做个清洗。清洗次数越多，每次清洗越容易。
dahua1981
第7楼2011/10/01
应助达人极限色谱柱可以反向冲洗吗？原因是？
答：极限的是可以反向冲洗的。由于两端的筛板是一致的。
如果色谱柱柱前段被污染，解决办法有哪些呢？
答：解决办法有清洗和再生。
清洗的方法：
1、经过等度运行后的色谱柱，有时用90～100％含量的溶剂B（双溶剂反相系统中洗脱能力较强的溶剂，如甲醇、乙晴、四氢 呋喃等）冲洗20个柱体积可以清除污染物（色谱柱的柱体积和空柱管体积概念不同，一根4.6x250mm柱子的柱体积只有2.5ml，4.6x150mm是1.5ml,2.1x150mm是0.28ml,4.6x50mm是0.5ml,3.0x150mm是0.64ml）。
2、如果使用的是缓冲盐系统，不要直接切换到强溶剂，突然转换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲盐沉淀，这样会导致更大的问题，如柱头筛板堵塞、连接管路堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。应该先用无缓冲盐流动相（即把缓冲液换成水），冲洗5～10个柱体积以后才切换到用强溶剂清洗。
3、有时候，强溶剂B也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉。那么就需要用更强的溶剂或者是系列溶剂组合。如果污染物不是生物质的，一种强溶剂或几种溶剂组合清洗基本能解决问题。柱子生产厂家的网页和产品说明书上很多也有清洗方法推荐。
4、所有的清洗方法的模式普遍都类似，溶剂系列中所用溶剂的强度逐级增加，最后一个溶剂往往是非极性（疏水性）很强的（如醋酸乙酯甚至是烷烃），以便于溶解脂质、油类等非极性污染物。溶剂系列中每个溶剂都保证能与下一个溶剂互溶。整个清洗过程结束后，在回到原来的流动相体系前，必须借助一个中等强度的互溶性非常好的溶剂过渡。例如， 异丙醇是一个非常好的过渡溶剂，它既能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。但是异丙醇粘度非常大，必须确保较低的流速以免使泵压过高。还有，如果使用紫外检测器，须避免选用在紫外区域有吸收的溶剂，要不然需使用大量的溶剂冲洗才能使基线平稳。
5、对于典型的硅胶基质键合反相柱，在未使用缓冲溶液的条件下，推荐使用以下清洗溶剂系列： 100％甲醇---100％乙晴---75％乙晴/25％异丙醇---100％异丙醇---100％二氯甲烷---100％正己烷用每种溶剂冲洗至少10个柱体积，对于250mm×4.6mm的分析柱，合适的冲洗流速是1～2ml/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡，然后回到原来的流动相体系（但不含缓冲盐），最后回复到起始流动相配置。四氢呋喃也是另外一种常用的清洗溶剂。如果怀疑柱子被严重污染，还可用二甲亚砜（DMSO）或 二甲基甲酰铵和水按50：50的比例混合，以低于0.5ml/min的流速冲洗色谱柱。
再生方法
1、再生被污染HPLC柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除。如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的，利用简单的清洗步骤来除去这些污染物往往就能恢复其色谱性能。成功再生反相柱子是一个非常耗时的过程，溶剂冲洗序列可以编成一个梯度洗脱的程序自动进行，以方便过夜操作。
还有一个老问题就是冲洗再生色谱柱是正冲还是反冲。污染物是在柱子入口端聚积，反向冲洗当然是把污染物洗出柱子最方便的。现在的色谱柱，高压填充的柱床很稳定，无须担心反冲会冲坏柱子的问题。但如果碰到厂家在入口端使用孔径相对较大筛板的情况，就不能反冲。另外冲洗柱子时通常不连接检测器。柱子冲洗频率取决于有多少污染物通过进样带到柱子里了，一般反相柱，在分离度完全丧失或者洗脱出不相关的物质峰之前，还是能承受相当程度的污染的，很多人倾向于等到有上述异常现象出现后，再进行清洗柱子，这样做，污染物累积程度高了，清洗起来也困难得多。所以，如你的反相柱经常进样很脏的样品，建议你定期做个清洗。清洗次数越多，每次清洗越容易。
arvid2007
第9楼2011/10/01
这么强大，在哪找的？早上找了好久都没找到，可惜啊，很早就看到题目了
头像更新中，请稍候…
第10楼2011/10/01
1. 极限一直提倡的是“正向使用，反向冲洗”，这么做的理由，月旭官方在各种贴子里也强调过多次，原因是：“色谱柱两端的筛板是一致的”。
2. 已经得出“色谱柱柱前段被污染”的结论，说明污染物很强大，能够“穿透”预柱/保护柱，这种情况，想要把柱子救活，概率不会很大。不管怎么说，如果是售后“保质期”内，寄回厂家要求厂家帮忙处理一般是可行的。如果不是，按照传统方法，首先反向冲洗（别扯再生，很少听到有再生成功的，不过倒是可以走走这个程序），如果不行，柱子基本没得救了。那就大胆地拆开，取下筛板进行处理（比如甲醇、异丙醇、15%硝酸超声）；另外，如果柱前段能肉眼可见被污染（比如发黄发黑），可以抠掉部分填料，用相同填料进行填补，这是最后的办法。不过这么做，就算修好了，寿命也不会很长。
有使用如此强大污染力的样品的勇气，就应该有报废柱子的思想准备和重新购买色谱柱的能力，呵呵
先把答案顶上。。
小卢应该持续关注这个贴子啊
版主不在，答题的人会比较迷惘
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色谱耗材品限时大促，火热进行中！
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