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HPLC技术知识共享（所有内容已整理好并添加到附件）

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  • 有部分网友觉得样品前处理技术知识小百科挺不错的，作为发帖人的我甚是开心，决定继续资源共享了，大家注意了，现在开始更新HPLC技术知识了，觉得有用的朋友们赶紧收藏了，所有内容已整理好并添加到附件，有需要的同学可以下载查看了哦



    1 怎样选择色谱柱




    现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。

    一、硅胶基质填料

    1、正相色谱

    正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica），以及其他具有极性官能团，如胺基(NH2)和氰基（CN）键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷（Hexane）,氯仿（Chloroform）,二氯甲烷（MethyleneChloride）等。

    2、反相色谱

    反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（Phenyl）等。

    二、聚合物填料

    聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要优点是在PH值为1～14均可使用。

    相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。

    三、其他无机填料

    其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质，一般仅限于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由于HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC，氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在PH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用，新型氧化锆填料可用于HPLC，商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱，应用PH范围1～14，温度可达100℃。由于氧化锆填料几年才开始研究，加之面临的实验难度，其重要用途与优势尚在进行中。

    怎样选择填料粒度

    目前，商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售，而目前分析分离主要用3um、5um和10um填料，填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小，填充柱的柱效越高；小于3um的填料应用，在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度，但不是唯一的因素。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料是很有用的，3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而，3um的色相谱的背压却是5um的2倍。与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选择更短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。

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  • wangruiting

    第2楼2011/12/16

    顶 期待继续更新

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  • 1818

    第3楼2011/12/16

    学习了，看来选择色谱柱还是很深的学问

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  • Eda

    第4楼2011/12/19

    2 常见保护柱漏液原因


    1、柱芯放置不当。由于保护柱套内部空间略大于柱芯体积，因此柱芯在放置过程中可能略微倾斜，从而导致保护柱漏液，可通过多次重新放置柱芯解决。
    2、柱套未拧紧。部分用户习惯用手将柱套拧紧后就开始使用，而实际上此时保护柱并未完全拧紧，用扳手继续拧紧保护柱套约1/4圈，即可将保护柱拧紧，不再漏液。

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  • Eda

    第6楼2011/12/23


    3色谱柱的正确使用，维护及保养方法与技巧








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  • lr2008_ongi

    第7楼2011/12/28

    分享了,有所收获,谢谢了.

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  • huaibeijiayuan

    第8楼2012/03/06

    资料很不错，能否归纳成一个附件呢，方便我们下载，呵呵。

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  • Eda

    第9楼2012/03/06

    恩，好的，下午我做一个相关附件，以方便大家下载！

    huaibeijiayuan(huaibeijiayuan) 发表:资料很不错，能否归纳成一个附件呢，方便我们下载，呵呵。

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  • 天天想你

    第10楼2012/03/09

    现在论坛资料有点儿乱 楼主能否归纳一下

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  • Eda

    第11楼2012/03/12

    好提议，您是指分类不清晰吗？

    天天想你(littlejie) 发表:现在论坛资料有点儿乱 楼主能否归纳一下

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