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【极限体验】溶剂嗷嗷多样，小规律咣咣没影（12）(12月份）

  • glucosides
    2011/12/17
    • 私聊

厂商论坛

  • 这篇体验，估计问题会比较多，有问题不要问我，回贴讨论就可以
    因为我到现在也还没完全弄明白，讨论是可以的，答疑是有难度的

    【发贴背景】
    实验嗷嗷顺利，新化合物咣咣出（一）
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111203/3687561/
    实验嗷嗷凄惨，化合物咣咣不纯（二）
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111204/3689304/
    实验嗷嗷忐忑，化合物咣咣争气（三）
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111205/3691424/
    平衡嗷嗷麻烦，色谱峰咣咣性感（四）
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111205/3692541/
    套打嗷嗷过瘾，几小时咣咣搞定（五）
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111206/3694600/
    平衡嗷嗷墨叽，好时光咣咣浪费（六）
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111209/3702978/
    流速嗷嗷变幻，化合物咣咣比对（七）
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111209/3703001/
    极限嗷嗷给力，手性体咣咣分开（八）
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111216/3718070/
    结构嗷嗷类似，保留时间咣咣近（九）
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111216/3719033/
    反用嗷嗷过瘾，极限柱咣咣给力（十）
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111216/3719279/
    苷类嗷嗷水解，总浸膏咣咣没影（11）
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111217/3721592/

    【实验过程】
    曾经有两份纯净的单体化合物摆在我面前，一个浓度大（进样2ul），一个浓度小（进样20ul），分别进针后出峰时间相差1分多钟，我很天真地以为它们不是同一个化合物。直到分别测试它们的氢谱（NMR），发现是同一个化合物，我才后悔莫及痛心不已。如果上天再给我一次机会，我一定会将它们合并进针，如果要加一点限制的话，我希望它们，是相似的浓度。
    注：这两个单体化合物的色谱图，年代久了没有找到，而且也不是极限的柱子分析的，就不继续找原图了。
     我一直想重现一下当时的结果，看看到底不同的溶剂溶解样品时，对液相出峰时间有多大的影响，所以，我取某一化合物，用甲醇溶解，然后稀释成各种浓度的样品溶液（方法学那一系列，我是反感的，这里只是初步探讨）。
    样品1： 1微升样品，用水稀释至20微升进样
    样品2： 1微升样品，用水稀释至10微升进样
    样品3： 1微升样品，直接进样
    样品4： 1微升样品，用甲醇稀释至10微升进样
    样品5： 1微升样品，用甲醇稀释至20微升进样

    【仪器试剂】
    水：重蒸水
    甲醇：    色谱纯，天津大茂
    HPLC：SHIMADZU LC-10AT、SHIMADZU SPD-10A

    【色谱条件】
    色谱柱：Ultimate XB-C18柱（5μm, 4.6x250mm）
    流动相：30%甲醇/水
    流速：1ml/min
    柱温：室温
    检测波长：230nm

    【实验过程】










    【小结与讨论】
    1. 我原来的理解是，用“大量”水溶解样品进样，相当于将流动相的水相增加了，所以洗脱能力下降一些，出峰时间慢一些；用“大量”甲醇溶解样品进样，相当于将流动相的有机相增加了，所以洗脱能力增大一些，出峰时间快一些。图中结果，用“大量”甲醇溶解的样品，出峰确实是快一些，不过用“大量”水溶解的样品，出峰也快一些，很迷糊。

    2. 看了下色谱分析报告（以前从来不看），样品1到样品5的理论塔板数分别是：11687、11155、12453、7936、2456，这个感兴趣的朋友可以讨论，反正我是不感兴趣。

    3. 其实我应该无视样品1、样品2和样品4，直接给样品3和样品5的图就够了，结论就是：用大量甲醇溶解样品，容易产生前沿峰，说明这个问题就足够了。想想还是全给出来吧，忠于实验结果，而且说不定回贴的讨论（如果有讨论的话）能对我有用。

    4. 其它
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  • glucosides

    第1楼2011/12/17

    沙发备用，汇总

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  • tangtang

    第2楼2011/12/17

    同样检测条件，仅仅浓度不同，有这么大区别吗？
    高浓度的有无过载？

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  • glucosides

    第3楼2011/12/17

    印象中是没有过载，因为浓度太小
    我们的DAD检测器灵敏度不太高才加大进样量
    结果误判了，很悲剧

    tangtang(tangtang) 发表:同样检测条件，仅仅浓度不同，有这么大区别吗？
    高浓度的有无过载？

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  • 小M

    第5楼2011/12/17

    应助达人

    每张图峰的位置都不一样，有这么大的差别？

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  • dahua1981

    第6楼2011/12/18

    应助达人

    一不小心都12篇了

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  • xuhua987

    第7楼2011/12/18

    呵呵，楼主辛苦了！我更关心楼主的进样量是多少，以及进样量（浓度）和峰高（本意是峰面积）之间的关系。和楼主一样，我现在也很迷糊。

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  • 冷冷的冰雨

    第8楼2011/12/19

    有没有可能是你的柱子残留留下的？

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  • 马踏飞燕

    第9楼2011/12/19

    应助达人

    真是厉害，色谱的原创已经达到了12篇啊。

0
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  • samanthalas

    第10楼2011/12/20

    关于不同溶剂溶解样品，导致出峰时间的变化。
    我想了解一下，楼主样品的极性情况啊？

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