液相色谱柱使用注意事项和维护

柱效测试评判方法：

采用与出厂报告完全一致的条件和标准样品。
下图为CNW Athena C18-WP测试报告

结果比较：
1. 基本一致
考虑系统因素，塔板数相差15%以内可看作正常
如250*4.6mm，5um的C18色谱柱，
COA甲苯理论塔板数为24471，实测21000。
2. 不一致：大部分原因是系统问题，少数是 柱子问题（考虑到运输等原因）

开始使用：
a. 流动相与保存溶剂相匹配：
反相条件
1. 流动相没有添加剂，如甲醇或乙腈与水的混和溶剂：
可直接换成流动相
2. 流动相有添加剂，如缓冲盐：
先换成不含缓冲盐的流动相，再换成有缓冲盐的流动相
例如：流动相为乙腈:磷酸盐缓冲液（60:40），
先用乙腈:水（60:40）过度
正相条件
多数可直接换成流动相

b. 流动相与保存溶剂不匹配（需换相）：
需用异丙醇完全过渡
例如：氨基柱多数保存于正相条件，如正己烷:异丙醇（100:1），
先用100%异丙醇过渡，再用反相流动相平衡。

c. 特殊柱子按照说明书要求操作

液相色谱柱的维护：

清洗：
用最强流动相来冲洗掉保留过强的杂质，最后保存于厂商建议的溶剂中。

注意：有缓冲盐的流动相需要先用90-95%的水相去除缓冲盐

再生(包括正反两种顺序)：

硅胶柱：
正己烷 ←→二氯甲烷←→异丙醇

硅胶基质非极性键合相
C18, C8, C4, C2, C1, Phenyl, CN, NH2：
95%水/ 5%乙腈(甲醇)←→乙腈 (甲醇)←→ THF

含蛋白污染物：B从10％到90％的梯度
A=0.1％TFA水溶液
B=0.1％TFA乙腈溶液

硅胶基质极性键合相：CN，NH2，DIOL
氯仿←→异丙醇←→二氯甲烷←→庚烷

离子交换柱：SCX, SAX
一般采用高浓度(1-2molL)的NaCl溶液

# 油脂等杂质可用低浓度碱溶液(如0.1molL的NaOH溶液)冲洗
# 酸性有机物用低pH缓冲液冲洗
# 碱性有机物用高pH缓冲液冲洗,
再用蒸馏水←→甲醇←→二氯甲烷冲洗。

建议清洗柱子的其他条件：

溶剂体积：推荐使用柱体积的10-20倍

流速：推荐使用常规流速的1/5-1/2

不同流动相转换：推荐换相时浓度梯度由小到大

清洗时请与检测器断开

必要时可反冲

氨基柱呢？如何处理与应用

大多数品牌的氨基柱出厂都是保存在正相条件里的，所以首先做柱效测试时需要在正相条件下做，如果OK，那么再开始考虑使用。

1. 在正相条件下使用：可以直接换成流动相。

2. 在反相条件下使用：需要换相，先用异丙醇过渡，然后再用反相流动相平衡。换相需要时间，才能达到色谱柱的完全平衡，所以要耐心点哦，不然换不好可能会对色谱柱有损伤。另外要注意的是换相前要把系统里面的溶剂全部换成异丙醇后，再接上色谱柱平衡。

对于一些正相柱，可能经验少一些，需要增进了解

正相柱实际用到的没有反相柱多，相对于流动相这些也都比反相柱简单。

欢迎大家有任何问题都来提一下，我们一起讨论解决。

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