哪位能全面地介绍一下目前色谱柱的填充技术呢？

yifan1117 2012/03/05

色谱柱制备 填充色谱柱的制备 固定液的涂渍： 固定液配比的选择原则： 首先要了解固定液配比的定义，固定液配比即固定液与固定相的重量之比： 为固定相中固定液的重量（g） 为固定相中担体的重量(g) 配比的选择： 气体或低沸点样品常用高配比固定液（20%-30%），高沸点试样（低于沸点100-200℃分析）需用低配比固定液（3%）。 担体表面积大，配比可高一些，反之亦然。 高灵敏度检测器需用低配比固定液，样品用量少，反之亦然。 高配比固定相的优点是： 适用于制备 减少吸附和拖尾 容易制备重现性好的固定相 低配比固定相的优点是： 柱效较高 柱流失较少 便于填装 可降低柱温和提高分析速度 固定液的涂渍原则 优良的溶剂是涂一层薄而均匀的液膜的首要条件。溶剂挥发不宜太快，且有足够的溶解能力。（常用氯仿，二氯甲烷，苯，丙酮，甲醇等） 尽量避免单体破碎。（吸附和拖尾），搅拌时要轻，减少不必要的搅拌和摩擦，装柱时要慢装轻敲。 减少单体表面及孔内空气的存在（搅拌） 固定液的涂渍方法： 溶剂蒸发法：在瓷蒸发皿中加入一定重量的固定液，用略大于担体体积的溶剂溶解（如有，过滤不溶物）。将担体倾入溶液中搅拌混匀，在室温或略高的温度条件下蒸发溶剂，再在接近溶剂沸点的温度下干燥。 过滤法：把固定液溶解在体积比担体体积大得多的溶剂中，然后把担体倾入其中浸渍，再把过量溶液滤去， 色谱柱的清洗（除锈污，油污） 玻璃柱：用洗液浸泡2-3次，用水冲洗至中性，再依次用甲醇、丙酮清洗，哄干备用。 不锈钢柱：用5-10%的热碱溶液抽洗4-5次，用水冲洗至中性，再依次用甲醇、丙酮清洗，哄干备用。 柱的填装： 填充方法 泵抽装填法：柱的一端塞上玻璃棉接上机械真空泵进行抽气，另一端装上漏斗（接进样器的一端），把干燥固定相慢慢填入其中，并轻轻敲击管壁，直至装满，柱端头稍留一点空间塞上玻璃棉即成。 震荡法：把选好的柱管下端塞上玻璃棉立于已开动的震荡器上，柱上端接上漏斗慢慢将固定相填于柱中，填满后，再用玻璃棉堵上柱管上部端口即可（适用于大批量装柱，不用敲打）。 手工装填法：低沸点固定相不可用泵抽法，可用手工填装，方法同上。 填装原则： 装入柱中的固定相均匀且结实，没有空隙和死体积。 装填过程中不可猛烈震荡和敲打，以免固定相破碎，影响柱效。 柱的老化： 老化的场合 刚填充好的色谱柱 在注射过几次高极性或高沸点化合物之后 更换密封垫和接头之后，且样品复杂，检测器灵敏度要求高时 第一次程序升温之前 当基线不稳定，色谱图上出现鬼峰时 仪器维修之后 老化方法 老化时间：大部分固定相的老化时间应在8小时以上，记录仪走出的基线稳定平直即可。对于ECD检测器，柱子的老化时间最好在24小时以上。 老化温度：低于流失温度5-10度（流失温度为流失量为1mg/L时的温度）。老化时要缓慢升温（需几个小时），气体流量小于使用流量。 色谱柱的进料端接汽化室，出口端不能接检测器，以免污染检测器。 老化的作用： 除去残余溶剂和挥发性杂质。 使固定液均匀牢固地分布在担体表面。 促使固定相的排布更均匀。 柱的保存 两头封端，避免管芯与空气接触。 柱内物质流失的标志 绝对保留值变小。 峰形拖尾。 分离度下降。 2.石英毛细管柱的制备 毛细管柱的涂渍 液膜厚度的计算： 静态涂渍法：，VL为固定液体积，Vg容积体积 动态涂渍法： ΔV固定液体积（实际用体积），r柱的内半径，L为柱长，Ci涂渍液浓度，ρ为固定液密度。 动态法： 适用于L大于50米，固定液黏度小的柱。 将预处理好的毛细管柱内吸入一定量的涂渍液（浓度为10-30%之间），吸入量为1m涂渍液/30m柱（中间不能有气泡），然后用干燥的氮气作为动力迫使涂渍液以均匀的速度缓缓向前，其速度可在0.3-0.5cm/秒之间选择一个值,直至涂渍液全部流出柱子,继续通氮气24小时，然后根据固定液的使用温度进行老化。 静态法： 适用于粘稠的、分子量较大的固定液，柱长在30米以下。 将涂渍液（5-10mg/ml）缓缓吸入预处理好的毛细管中，使柱子全部充满，无气泡。将柱的一端封口，移入静态真空系统中，在25-28度下，以0.4-0.5m/h的速度挥发溶剂，，待溶剂挥发完毕后，将柱子封端卡断，进行老化。 老化注意事项： 低流速：约0.5ml/min。 升温速率慢：1-2度/分。每个温度点（100，150，200，250..）老化2小时。在最高温度下老化4小时。 自然冷却。