提问帖（3.23）请问一台新的ELSD仪器验证都有哪些内容呢

应助达人

Chromachem蒸发光散射检测器(ELSD)的详细描述：


【性能描述】

HPLC通用检测器

性能优于示差、低波长紫外线检测器，灵敏度更高

低温蒸发利于检测半挥发性和热敏感性物质

适用于HPLC梯度洗脱

基线稳定-对温度和流速变化不敏感

可灵敏检测弱发色团化合物（例如：脂类、碳水化合物、磷脂、聚合物等）

雾化室于蒸发室可独立温控

蒸发室采用曲长加热漂移管，大大降低了蒸发温度

【仪器介绍】

技术参数

1.检测极限：<1 ng 葡萄糖（直接进样）；
2.噪音水平：<1 mVolt (1ml/min )；
3.溶剂流速：20 µl to 3 mL/min；
4.气体压力：1~2 bar；
5.气体流速：1~2 L/min；

主要特点

1.通用型广谱检测器，可检测任何样品;
2.灵敏度和稳定性比视差检测器更高；
3.与梯度洗脱相容，确保分辨率和快速分离；
4.对各种物质几乎相同的响应，因而浓度测定更容易；
5.使棘手的样品分析成为简单的工作。

应助达人

1．概述
蒸发光检测器（ELSD）现在越来越多的应用到食品、药物分析中来。它的出现，在一定程度上弥补了HPLC传统检测器的不足，特别是无紫外吸收或紫外末端吸收的大分子有机化合物的检测，显示出较大的优越性。
2.仪器构造
常见ELSD可分为两种类型：TYPE A 和TYPE B。
这两种类型的仪器都由三部分组成，既雾化器、加热漂移管和光散射池。
A型和B型所不同之处是：B型在雾化器和加热漂移管之间添加了一个雾化管（nebulization
chamber）装置；A型两者之间无此装备；B型加热漂移管为螺旋型，A型为直柱型。两种结构上的差异决定了在待测物质类型上的差异。
3.工作原理
检测器与分析柱出口直接相连，柱洗脱液进入雾化器针管，在针的末端，洗脱液和充入的气体（通常为氮气）混合形成均匀的微小液滴（气溶胶）；气溶胶进入加热漂移管，其中易挥发成分挥发，不挥发成分通过漂移管进入光散射池。在光散射池中，样品颗粒散射光源发出的光经检测器产生电信号。
ELSD两种检测模式的区别在于：A型的操作是让全部柱流出物都进入直的漂移管，让流动相在其中挥发；B型的操作是让流出物通过一个弯管，在此管中大的颗粒沉积下来流入废气管，其余小颗粒进入螺旋状的蒸发管。
A型检测器把所有气溶胶都送到漂移管中，为了有利于蒸发，常常使用较高的操作温度，因此它适合于检测不挥发的样品，使用流速为1.0ml/min（或更低流速）的挥发性流动相进行分析；B型将大颗粒气溶胶撞在弯管壁上除去，使气溶胶粒度分布变窄，在较低温度下易于蒸发，适合于检测半挥发性样品，以流速为1.5ml/min（或更高的流速）的高含水流动相进行分析。
目前主要有4种商品化的ELSD，即：Sedex55/56，Eurosep，PL-ELS和Alltech 500/2000。其中Sedex55/56、Eurosep 结构相似，属B型；PL-ELS和Alltech 500都是由Varex MK-III ELSD发展而来，属A型。
4. 检测原理
尽管ELSD有两种检测模式，但其检测原理是相同的。Charlesworth奠定了ELSD检测的理论基础。Mengerink等系统地总结如下：
1）雾化 色谱柱流出进入雾化器后，与充入的气体混合形成液滴，液滴的平均直径D0可以用 Nakiyama和Tanasawa提出的公式计算：
D0=0.585×Sqr(σ)/( Δμ*sqr(ρ))+212(η/σ*ρ)＾0.45*（(1000×FL/Fg)＾1.5）
其中D0为表面积体积平均直径（μm），为洗脱液的表面张力（N/m）；Δμ为液体和气体之间的线速差（μm/s）；η为柱流出物的粘度（Pa.s）；ρ为柱流出物的体积质量（Kg/m）；FL/Fg为柱流出物与气体的流速比。
2）漂移 液滴进入漂移管后挥发。柱流出物蒸发时间的公式：
Td=ΔHVρD0＾2/MvKfΔT
其中td为完全挥发的时间；ΔHV/M为摩尔挥发度；ΔT为雾化气体与液体表面的温度差；Kf为液滴周围气体薄层的热导率。
当温度上升到一定程度，被分析物（a）会同流动相一道挥发，因此最佳温度为tdm < td 3）在平均直径不被其它因素改变的前提下，进入光散射池的气溶胶中的颗粒直径d与被分析物在洗脱液中的浓度C成正比：
d∝ D0 （ c/ρa）＾（1/3） (*)
其中：ρa为被分析物的体积质量。
对于轴心式的雾化器，当被分析物的质量浓度为1mg/L时，被分析物颗粒的大小处在米氏散射区域。根据米氏理论，散射光强度I可以表示为：
I=knd2（d/λ）＾y
其中：k为常数；n是散射区域中颗粒的数目；λ为检测波长；随着d/λ的增加，y值从4.0减小到-2.2。当λ和n为常数，散射光强度以d^p（p<6）指数增加，根据(*)式，散射光强度以c^q（q<2）指数增加。
根据大量实验显示，ELSD的相应值（Y）与被测物浓度（X）的关系曲线比较复杂。在较高浓度范围内，大致呈线性；而在低浓度范围内，则大致呈指数关系，即Y=Ax^b，其中的b值往往为1-2（与理论相符）；另有少数实验表明，响应值与被测物浓度呈二次函数关系，即Y=aX+Bx^2。

QC测试
低温多水QC测试：
请参考随你得Model 200 ELSD附带的QC测试报告上的条件来测试你得ELSD。以下为标准条件：
流速：1.0mL/min
流动相：甲醇：水=10：90
雾化室温度（SP）：10℃
漂移管：45℃
气压：50psi
过滤级：5
1、    输入以上条件到仪器，在条件为满足之前，一个“*”号将会在屏幕右上角显示并闪动。按ESC键检查错误原因。使用上、下箭头键检查温度。
2、    当“*”号停止闪动并消失以后，你可以启动HPLC泵并打开气体阀门。当检测信号稳定在大约2mV以内时，使用上、下箭头键找到“Reset Baseline”显示屏并且按ENT键重新调整基线。
3、    当信号稳定后，注射100ng苯甲酸钠到检测器，并且循环进样两次。
4、    停止数据采集并对结果积分。
5、    将结果峰的高度和噪音因子与Model 200 ELSD随即附带的QC测试报告相比较。
6、    停止泵，并且准备高温QC测试。
高温有机物QC测试：
请参考随你得Model 200 ELSD附带的QC测试报告上的条件来测试你得ELSD。以下为标准条件：
流速：0.5mL/min
流动相：甲醇：水=10：90
雾化室温度（SP）：60℃
漂移管：70℃
气压：50psi
过滤级：8
1、    用10/90的水/甲醇冲洗泵2分钟。
2、    当“*”号停止闪动并消失以后，你可以启动HPLC泵并打开气体阀门。当检测信号稳定在大约2mV以内时，使用上、下箭头键找到“Reset Baseline”显示屏并且按ENT键重新调整基线。
3、    当信号稳定后，注射100ng苯甲酸钠到检测器，并且循环进样两次。
4、    停止数据采集并对结果积分。
5、    将结果峰的高度和噪音因子与Model 200 ELSD随即附带的QC测试报告相比较。
6、    停止泵，并且准备高温QC测试。

1.测试基线和噪音大少，2.测试标准样品的峰面积重复性，3，测定灵敏度和信噪比大小。

请大家注意题目，是关于仪器验证的内容

仪器设备的功能检查?对仪器设备的系统所具备的各功能段的功能进行定性验证?

3 计量性能要求
3.1 外观要求
仪器表面应无擦伤、划伤、掉漆、锈蚀、镀层剥落等现象，各固定零部件安装牢固，各操作
运动部分灵活可靠。
1) 门的磁钢吸力检测。（条件：两磁钢间保持10mm 距离，在没有外力的作用下，判定
门是否能吸合。）
2) 门与其相对应的塑料件位置检测。（条件：门的外露5 端面与其对应的端面位置误差
不得大于0.5mm）
3) 门的上端面与其相对应的面平行度检测。（条件：门的上端面两端测量差值不得大于
0.5mm）
3.2 输气系统
输气管路接口紧密牢固，在规定的压力范围内无漏气现象发生。5.1 检定条件
5.1.1 环境条件
5.1.1.1 检定室应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，排风良好，且仪器废气排气管已经正确
连接及排气。
5.1.1.2 室温在15～35℃，检定过程中温度变化不超过3℃，室内湿度在20%～85%RH 范围内。
5.1.1.3 仪器应平稳地放在工作台上，周围无强烈机械震动和电磁干扰源，仪器接地良好。
5.1.1.4 电源电压为（220±22）V，频率为（50±0.5）Hz。
5.1.2 检定设备
5.1.2.1 分析天平：最大称量不小于100g，最小分度不大于1mg。
5.1.2.2 注射器：50􀂵L一支。
以上计量器具需经计量检定合格。
5.1.2.3 容量瓶：50mL
5.1.3 标准溶液：
1×10-2g/mL，1×10-3g/mL，5×10-8g/mL 葡萄糖/水溶液；
5.1.4 其他要求
5.1.4.1 检定用试剂：纯水、甲醇（HPLC）
5.1.4.2 其他玻璃器皿等
5.2 检定项目和检定方法
5.2.1 检定项目
检定项目见表2。
表2 检定项目一览表
检定项目 首次检定 后续检定 使用中检验
检测器：基线噪声
基线漂移
最小检测质量
信号检测上限
蒸发区温度范围
温度控制准确度
气体流速范围
气体流量准确度
典型定量范围
定量重复性
10mV 输出面积
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
－
－
－
－
－
－
+
－
注：①“＋”表示应检定项目，“－”表示可不检定项目。
5.2.2 检定方法
5.2.2.1 通用技术要求的检查
按第3.1，4.1，4.2 条的要求，目视、手动检查。（此检测步骤在生产部将仪器
全部外壳安装结束后进行。）
5.2.2.2 输气系统
5.2.2.2.1 气闭性检定
打开气源后开机并按下“VALVE”按键为仪器供气，将气体流量设为4L/min, 流
量显示稳定后用肥皂水涂布于气路各连接处，观察有无气泡产生，如果有气泡产生
即为不合格。
5.2.2.2.2 鞘流调整
设置气体流量为4 L/min，调节鞘流旋纽，在能满足4 L/min 的条件下，调节P
值最大。
5.2.2.3 检测器指标检定
a） 气体流速范围及气体流量准确度的检定
开机稳定后分别设定气体流速为1 L/min、2 L/min、3 L/min、4 L/min，待气体
流量稳定后观察10 分钟。显示值与设定值之差的绝对值不超过设定值的1%或
0.02L/min。
b） 蒸发区温度范围及温度控制准确度的检定
开机稳定后分别设定蒸发管温度为：40°C、80°C、130°C，待温度稳定后观察
10 分钟。显示温度与设定温度差值不应超过1°C。（可根据实验自行安排检验次序）
c） 基线噪声和基线漂移的检定
以100%水为流动相，流量为1.0mL/min，泵与检测器直接相连，气体流速3L/min,
蒸发温度设定为40°C,输出端口选择1V。开机预热，待仪器稳定后记录基线30min，
检测器测得的基线峰－峰高对应的信号值（mV）即为噪声。
基线漂移用1h 内基线偏离记录起始点的值（mV/h）表示。
d） 最小检测质量的检定
以100%水为流动相，流量为1.0mL/min，泵与进样阀相连，进样阀直接连接检
测器，将气体流量调节为3L/min，蒸发温度设定为40°C。待仪器稳定后，用微量
注射器从进样口注入20μL 5´10-8g/mL 的葡萄糖水溶液，重复3 次，记录色谱图，
由色谱峰高和基线噪声峰-峰高计算，若信噪比大于2 则检测限达标。如进流动相也
会出峰，将5´10-8g/mL 的葡萄糖水溶液的峰高减去流动相峰高，若信噪比大于2
则检测限达标。
e） 信号响应上限的检测
色谱条件同5.2.2.3 d），进1´10-2g/mL 的葡萄糖水溶液，观察工作站信号，记录
平头信号高度（单位：mv）。
f） 定量重复性的检定
将检测器与液相色谱装置连接好，选用C18 色谱柱（250*4.6mm，5􀂵m），20μL
定量环，用10%甲醇水溶液为流动相，流量为1.0mL/min，将气体流量调节为3L/min，
蒸发温度设定为40°C。输出端口选择在1V，基线稳定后满环进样注入1×10-4g/mL
葡萄糖/水溶液，重复6 次，积分色谱峰的峰面积，按式（1）计算相对标准偏差RSD6。
6
2
6
1
( ) /( 1) 1 100% i
i
RSD X X n
= X
= å - - ´ ´
式中：RSD6 ——定量测量重复性相对标准偏差；
Xi——第i次测得的峰面积；
X——6次测量结果的算术平均值；
i——测量序号。
g） 典型定量范围的检定
将检测器与液相色谱装置连接好，选用C18 色谱柱，20μL 定量环，用10%甲醇
水溶液为流动相，流量为1.0mL/min，将气体流量调节为3L/min，蒸发温度设定为
… …(1)
.40°C。输出端口选择在1V，基线稳定后满环进样注入5×10-6g/mL， 1×10-5 g/mL，
3×10-5 g/mL，1×10-4 g/mL，3×10-4 g/mL，1×10-3 g/mL，2×10-3 g/mL 的葡萄糖
溶液（以流动相将储备液稀释至指定浓度），重复三次。将进样量折算为进样质量后
取对数，以5 个点质量对数（1×10-5 g/mL 到1×10-3g/mL 五个点）与对应峰面积平
均值的对数做标准曲线（相关系数r≥0.999），在曲线上找出葡萄糖浓度大于1×
10-3g/mL 各点的读数，以及浓度小于1×10-5 g/mL 各点的读数与相应含量的测定值
做比较，测量值低于（或高于）读数5%时，认为曲线弯曲，此点的对应质量作为
定量上限（或下限）。此上下限之间的范围即是该仪器测定葡萄糖的典型定量范围。
5.2.2.4 10mv 端口测试
输出端口选择10mv，其余连接不变，在相同条件下，进1×10-4g/mL 葡萄糖/水溶
液，重复3 次，积分色谱峰的峰面积。与1v 端口比较。应为约10 倍的差异。
5.3检定结果的处理
5.3.1 按本规程条款检定，全部达到规定技术要求的仪器为合格仪器，发给检定证书。
5.3.2 任何一个项目不合格，该仪器为不合格仪器，发给检定结果通知书，注明不合格项目。
5.4检定周期
蒸发光散射检测器的检定周期一般不超过2 年，更换重要部件或对仪器性能有怀疑时，应随
时检定。

应助达人

1 外观要求
仪器表面应无擦伤、划伤、掉漆、锈蚀、镀层剥落等现象，各固定零部件安装牢固，各操作运动部分灵活可靠。
1) 门的磁钢吸力检测。（条件：两磁钢间保持10mm 距离，在没有外力的作用下，判定门是否能吸合。）
2) 门与其相对应的塑料件位置检测。（条件：门的外露5 端面与其对应的端面位置误差不得大于0.5mm）
3) 门的上端面与其相对应的面平行度检测。（条件：门的上端面两端测量差值不得大于0.5mm）
2 输气系统
输气管路接口紧密牢固，在规定的压力范围内无漏气现象发生。5.1 检定条件
3 环境条件
3.1 检定室应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，排风良好，且仪器废气排气管已经正确连接及排气。
3.2 室温在15～35℃，检定过程中温度变化不超过3℃，室内湿度在20%～85%RH 范围内。
3.3 仪器应平稳地放在工作台上，周围无强烈机械震动和电磁干扰源，仪器接地良好。
3.4 电源电压为（220±22）V，频率为（50±0.5）Hz。
4 检定设备
4.1 分析天平：最大称量不小于100g，最小分度不大于1mg。
4.2 注射器：50􀂵L一支。
以上计量器具需经计量检定合格。
4.3 容量瓶：50mL
5 标准溶液：
1×10-2g/mL，1×10-3g/mL，5×10-8g/mL 葡萄糖/水溶液；
6 其他要求
6.1 检定用试剂：纯水、甲醇（HPLC）
6.2 其他玻璃器皿等
7 检定项目和检定方法
7.1 检定项目
检定项目 首次检定 后续检定 使用中检验
检测器：基线噪声
基线漂移
最小检测质量
信号检测上限
蒸发区温度范围
温度控制准确度
气体流速范围
气体流量准确度
典型定量范围
定量重复性
10mV 输出面积
7.2 检定方法
7.2.1 通用技术要求的检查
按第3.1，4.1，4.2 条的要求，目视、手动检查。（此检测步骤在生产部将仪器
全部外壳安装结束后进行。）
7.2.2 输气系统
7.2.2.1 气闭性检定
打开气源后开机并按下“VALVE”按键为仪器供气，将气体流量设为4L/min, 流
量显示稳定后用肥皂水涂布于气路各连接处，观察有无气泡产生，如果有气泡产生
即为不合格。
7.2.2.2 鞘流调整
设置气体流量为4 L/min，调节鞘流旋纽，在能满足4 L/min 的条件下，调节P
值最大。
7.2.3 检测器指标检定
a） 气体流速范围及气体流量准确度的检定
开机稳定后分别设定气体流速为1 L/min、2 L/min、3 L/min、4 L/min，待气体
流量稳定后观察10 分钟。显示值与设定值之差的绝对值不超过设定值的1%或
0.02L/min。
b） 蒸发区温度范围及温度控制准确度的检定
开机稳定后分别设定蒸发管温度为：40°C、80°C、130°C，待温度稳定后观察
10 分钟。显示温度与设定温度差值不应超过1°C。（可根据实验自行安排检验次序）
c） 基线噪声和基线漂移的检定
以100%水为流动相，流量为1.0mL/min，泵与检测器直接相连，气体流速3L/min,
蒸发温度设定为40°C,输出端口选择1V。开机预热，待仪器稳定后记录基线30min，
检测器测得的基线峰－峰高对应的信号值（mV）即为噪声。
基线漂移用1h 内基线偏离记录起始点的值（mV/h）表示。
d） 最小检测质量的检定
以100%水为流动相，流量为1.0mL/min，泵与进样阀相连，进样阀直接连接检
测器，将气体流量调节为3L/min，蒸发温度设定为40°C。待仪器稳定后，用微量
注射器从进样口注入20μL 5´10-8g/mL 的葡萄糖水溶液，重复3 次，记录色谱图，
由色谱峰高和基线噪声峰-峰高计算，若信噪比大于2 则检测限达标。如进流动相也
会出峰，将5´10-8g/mL 的葡萄糖水溶液的峰高减去流动相峰高，若信噪比大于2
则检测限达标。
e） 信号响应上限的检测
色谱条件同5.2.2.3 d），进1´10-2g/mL 的葡萄糖水溶液，观察工作站信号，记录
平头信号高度（单位：mv）。
f） 定量重复性的检定
将检测器与液相色谱装置连接好，选用C18 色谱柱（250*4.6mm，5􀂵m），20μL
定量环，用10%甲醇水溶液为流动相，流量为1.0mL/min，将气体流量调节为3L/min，
蒸发温度设定为40°C。输出端口选择在1V，基线稳定后满环进样注入1×10-4g/mL
葡萄糖/水溶液，重复6 次，积分色谱峰的峰面积，按式（1）计算相对标准偏差RSD6。
6
2
6
1
( ) /( 1) 1 100% i
i
RSD X X n
= X
= å - - ´ ´
式中：RSD6 ——定量测量重复性相对标准偏差；
Xi——第i次测得的峰面积；
X——6次测量结果的算术平均值；
i——测量序号。
g） 典型定量范围的检定
将检测器与液相色谱装置连接好，选用C18 色谱柱，20μL 定量环，用10%甲醇
水溶液为流动相，流量为1.0mL/min，将气体流量调节为3L/min，蒸发温度设定为
… …(1)
.40°C。输出端口选择在1V，基线稳定后满环进样注入5×10-6g/mL， 1×10-5 g/mL，
3×10-5 g/mL，1×10-4 g/mL，3×10-4 g/mL，1×10-3 g/mL，2×10-3 g/mL 的葡萄糖
溶液（以流动相将储备液稀释至指定浓度），重复三次。将进样量折算为进样质量后
取对数，以5 个点质量对数（1×10-5 g/mL 到1×10-3g/mL 五个点）与对应峰面积平
均值的对数做标准曲线（相关系数r≥0.999），在曲线上找出葡萄糖浓度大于1×
10-3g/mL 各点的读数，以及浓度小于1×10-5 g/mL 各点的读数与相应含量的测定值
做比较，测量值低于（或高于）读数5%时，认为曲线弯曲，此点的对应质量作为
定量上限（或下限）。此上下限之间的范围即是该仪器测定葡萄糖的典型定量范围。
7.2.4 10mv 端口测试
输出端口选择10mv，其余连接不变，在相同条件下，进1×10-4g/mL 葡萄糖/水溶
液，重复3 次，积分色谱峰的峰面积。与1v 端口比较。应为约10 倍的差异。
8 检定结果的处理
8.1 按本规程条款检定，全部达到规定技术要求的仪器为合格仪器，发给检定证书。
8.2 任何一个项目不合格，该仪器为不合格仪器，发给检定结果通知书，注明不合格项目。
9检定周期
蒸发光散射检测器的检定周期一般不超过2 年，更换重要部件或对仪器性能有怀疑时，应随
时检定。

第一步：雾化过程，也称为喷雾过程。流动相与辅助气混合，在辅助气的压力作用下从一小孔中喷出而形成浓雾，整个装置称为喷嘴或称雾化器。
流动相雾化后形成的液雾（雾珠）由于均匀性及一致性差，因此必须进行处理，否则影响某其有效蒸发。此过程称为分流。依据不同的分流方式，ELSD经历了三代发展。即限流器分流技术时代，撞击器及低温分流技术时代和热分流技术时代。
在第二代分流技术时代，依据所使用的分流技术不同，出现了两大类的ELSD，即常说的A型和B型。A型ELSD以撞击器分流技术设计，可以实现分流和不分流两种操作模式；B型ELSD，以低温分流技术设计，只能实现分流操作，但由于其雾珠处理利用颗粒粒度方式分流，因而实现了低温挥发，特别有利于半挥性化合物的测定及高水相流动相的应用。
第二步：蒸发，经过第一部处理的雾珠进一步流向经加热处理的区域，此时雾珠在热的作用下不断挥发形成气体，挥发性差的样品从流动相雾珠中析出而形成颗粒物。这一装置称为蒸发区或漂移管。漂移管也有两种设计方式，即螺线管式和直管式设计。螺线管有更长的漂移距离，能更好的实现蒸发，但随着流动相所经距离的延长，峰形变宽，灵敏度降低，且漂移管不方便维护，而直管则有更窄的峰，相对灵敏度提高，且维护方便。
第三步：检测，监测区由光源和光检测器组成，光源经光学处理后形成一束光，穿过漂移管末端口，气体经过光束时，不会影响光的穿透，而当样品颗粒经过时，光即产生散射。散射出来的光照在90度位置上的光检测器即产生广电信号。在这里，光源有激光器、LED和钨卤灯。
激光器：光源强度大，发热少，结构简单，无需特殊光学聚光文件。寿命长。
LED：发热少，结构简单，强度弱，须进行聚光等光学处理。
钨卤灯：发热大，强度弱，须进行聚光等光学处理，波长范围宽。
散射监测器其实应与光源配合使用，对于激光器，由于光强度大，其散射光强度也强，常用光电二极管作为检测器，而对于光强较弱的光源，必须使用光电倍增管作为检测器。
光电二极管：结构简单，体积小，无特殊供电路，故障率低。
光电倍增管：体积较大，需供高压，故障率高，放大倍数可控制，可检测低强度光。
三、 ELSD特征：依据ELSD原理，ELSD是一类广谱性、通用型质量检测器，几乎所有挥发性低的化合物均可被检测，且ELSD是质量型检测器，只与待测物的量有关，而与其光学特性，电化学特征及化合物本身的组成无关。