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扫描电镜预处理方法(生物膜)

  • holly-soph
    2012/04/14
  • 私聊

扫描电镜(SEM/EDS)

  • 跪求高人指点,扫描电镜的预处理方法。主要做的是关于生物膜的
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  • zhadaoan

    第1楼2012/04/15

    生物膜?能具体点么,我之前看过细胞,就是拿戊二醛固定,然后酒精梯度脱水后看的

    hongying1990(hongying1990) 发表:跪求高人指点,扫描电镜的预处理方法。主要做的是关于生物膜的
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  • holly-soph

    第2楼2012/04/16

    生物膜也是和细胞差不多,能说一下具体的做法吗?

    zhadaoan(zhadaoan) 发表:生物膜?能具体点么,我之前看过细胞,就是拿戊二醛固定,然后酒精梯度脱水后看的

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  • zhadaoan

    第3楼2012/04/16

    主要看你样品了,一般按照以下程序进行:取材、固定、脱水、干燥、有些导电性可能会有样品导电处理。

    1、取材就不说了
    2、固定。一般选用戊二醛、锇酸、等
    3、脱水。有用丙酮/醋酸异戊酯(1:1)脱水的,也有用梯度酒精逐步脱水的
    4、干燥。有冷冻干燥的,也有用乙腈干燥的。
    5、导电处理。也不说了。

    我当时看的就是生物材料上的细胞,1、取材没什么麻烦,要是看细胞组织,可能麻烦点。2、固定用的是2.5%戊二醛固定过夜的(有些文献说2h就OK~,你可以尝试下看看)。3、脱水用的是25%,50%,75%,95%,100%的酒精一次浸泡15min(不放心的可以降低酒精梯度~~,多泡几次)。4、干燥采用的是冷冻干燥。 以上方法仅供参考哈,你也可以查查相关文献。

    hongying1990(hongying1990) 发表:生物膜也是和细胞差不多,能说一下具体的做法吗?

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  • holly-soph

    第4楼2012/04/16

    2.5%的戊二醛需要用超纯水配吗?不同浓度的酒精是不是也要用超纯水来配?可以不用锇酸二次固定吗?

    zhadaoan(zhadaoan) 发表:主要看你样品了,一般按照以下程序进行:取材、固定、脱水、干燥、有些导电性可能会有样品导电处理。

    1、取材就不说了
    2、固定。一般选用戊二醛、锇酸、等
    3、脱水。有用丙酮/醋酸异戊酯(1:1)脱水的,也有用梯度酒精逐步脱水的
    4、干燥。有冷冻干燥的,也有用乙腈干燥的。
    5、导电处理。也不说了。

    我当时看的就是生物材料上的细胞,1、取材没什么麻烦,要是看细胞组织,可能麻烦点。2、固定用的是2.5%戊二醛固定过夜的(有些文献说2h就OK~,你可以尝试下看看)。3、脱水用的是25%,50%,75%,95%,100%的酒精一次浸泡15min(不放心的可以降低酒精梯度~~,多泡几次)。4、干燥采用的是冷冻干燥。 以上方法仅供参考哈,你也可以查查相关文献。

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  • zhadaoan

    第5楼2012/04/17

    恩,都用的纯水,我当时就是用戊二醛的,没用锇酸了,锇酸对磷脂固定效果较好

    hongying1990(hongying1990) 发表:2.5%的戊二醛需要用超纯水配吗?不同浓度的酒精是不是也要用超纯水来配?可以不用锇酸二次固定吗?

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  • holly-soph

    第6楼2012/04/17

    恩,非常感谢~

    zhadaoan(zhadaoan) 发表:恩,都用的纯水,我当时就是用戊二醛的,没用锇酸了,锇酸对磷脂固定效果较好

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  • 小M

    第7楼2012/04/18

    应助达人

    这个很详细,也很具体。对于生物样品,我们这里没有预处理设备,只能喷喷金。

    zhadaoan(zhadaoan) 发表:主要看你样品了,一般按照以下程序进行:取材、固定、脱水、干燥、有些导电性可能会有样品导电处理。

    1、取材就不说了
    2、固定。一般选用戊二醛、锇酸、等
    3、脱水。有用丙酮/醋酸异戊酯(1:1)脱水的,也有用梯度酒精逐步脱水的
    4、干燥。有冷冻干燥的,也有用乙腈干燥的。
    5、导电处理。也不说了。

    我当时看的就是生物材料上的细胞,1、取材没什么麻烦,要是看细胞组织,可能麻烦点。2、固定用的是2.5%戊二醛固定过夜的(有些文献说2h就OK~,你可以尝试下看看)。3、脱水用的是25%,50%,75%,95%,100%的酒精一次浸泡15min(不放心的可以降低酒精梯度~~,多泡几次)。4、干燥采用的是冷冻干燥。 以上方法仅供参考哈,你也可以查查相关文献。

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  • 社区=冬季=

    第8楼2012/04/19

    我想了解下冷冻干燥的程序是怎么样的

    zhadaoan(zhadaoan) 发表:主要看你样品了,一般按照以下程序进行:取材、固定、脱水、干燥、有些导电性可能会有样品导电处理。

    1、取材就不说了
    2、固定。一般选用戊二醛、锇酸、等
    3、脱水。有用丙酮/醋酸异戊酯(1:1)脱水的,也有用梯度酒精逐步脱水的
    4、干燥。有冷冻干燥的,也有用乙腈干燥的。
    5、导电处理。也不说了。

    我当时看的就是生物材料上的细胞,1、取材没什么麻烦,要是看细胞组织,可能麻烦点。2、固定用的是2.5%戊二醛固定过夜的(有些文献说2h就OK~,你可以尝试下看看)。3、脱水用的是25%,50%,75%,95%,100%的酒精一次浸泡15min(不放心的可以降低酒精梯度~~,多泡几次)。4、干燥采用的是冷冻干燥。 以上方法仅供参考哈,你也可以查查相关文献。

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  • zhadaoan

    第9楼2012/04/19

    这个很详细,也很具体。对于生物样品,我们这里没有预处理设备,只能喷喷金。[/quote]
    也是平时没事看看书,加上和同学们交流学习的,呵呵,敢问小M老师是哪公司啊?

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  • zhadaoan

    第10楼2012/04/19

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    我们当时就是普通的冷冻干燥,将样品放入冰箱冷冻室,待冷冻后放入冷冻干燥箱(零下-60℃左右吧),然后抽真空冷冻,我记得真空稳定时大概几Pa吧,这是比较粗的流程了。

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