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实时荧光定量的一点经验

  • 省部重点实验室
    2012/05/05
    • 私聊

PCR

  • 扩增目标基因，纯化后，用分光光度计，定浓度后做为标准品。
    最好是将此目标基因接入TA克隆，转导入大肠杆菌后扩增，抽质粒，可达1X10十二次方，再以每10倍稀释后作为标准品，一般从1X10八次方开始稀释。
    标准品一般选六个点，起跳的Ct值最好在20-30之间。另
    外，标准品及样品要同时重复做2-3管，标准曲线的R值在0.98以上，每10倍稀释的标准品Ct值一般相差3.3左右。
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