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【极限体验】β-胡萝卜素的完美解决方案！

fengmo4668

2012/05/27

前言：关于β-胡萝卜素的研究，前前后后，延宕了很有一段时间了。最终在月旭色谱柱的帮助下，得到了圆满的解决方案！欣喜啊！

色谱条件： 色谱柱 Ultimate^®Polar-RP

流动相甲醇-乙腈（90:10）

流速 2ml/min

进样量 10μL

检测波长 448nm

过程叙述：
刚开始，是准备和维生素A一块研究，也就是在一个液相色谱条件下把维生素A和β-胡萝卜素一针做出来，设计的出发点是两者都是补充维生素A的营养成分，放到一起有利于计算维生素A的总量，而且都是油溶性的维生素。

往往，理想是美好的，现实是残酷的！

用做维生素A的方法，没有办法实现β-胡萝卜素的分离。

以前关注过我的版友，应该还记得吧，我维生素A的色谱条件是为了分离顺、反式维生素A，所以用的是正相硅胶色谱柱。而β-胡萝卜素在正相柱上没有保留，基本上是和溶剂峰一块出来的。（图1）

图1. 正相色谱柱上β-胡萝卜素的分离情况

所以，这个设想只能放弃！

没有办法，只能和维生素A分开来研究。

按照国标中GB/T 5009.83-2003 食品中胡萝卜素的测定中的色谱条件，对β-胡萝卜素进行了尝试分离，用的是国内另一个厂家的反相C₁₈分离柱（分析原始记录见图2，结果见图,3和图4）。

图2. 当时的原始记录

图3. V=2ml/min

图4. V= 3ml/min

如果你注意到了流速和保留时间的对应关系，可能会和我一样有绝望的心情。

而且，别的任务也赶的非常紧，只能把β-胡萝卜素停下来了。

再后来，我就碰到了月旭的Ultimate^®Polar-RP色谱柱。前一段才抽出了时间来重新分离β-胡萝卜素。（中间还有一个小插曲，我还考了大家一回呢，呵呵。详见http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20120510/4025808/主题：【原创】【考考你】看图解答（答案在34#））

结果见图5和图6。

图5. C= 75μg/ml

图6. C= 1.5μg/ml

这才是我心目中想要的分离结果！哈哈！

讨论：

1. 认识了月旭，终于把问题解决了，终于可以睡个好觉了。

2. 假如说，当初的设想可以实现，即维生素A和β-胡萝卜素一针可以检测出来。对于制药行业来说，这样的质量标准的申报难度有多大？与分开来检测，优势哪个更明显？

3. 月旭和另一根色谱柱相比，保留时间缩少了可不是一星半点。这对于样品检验人员来说，绝对是一个非常利好的长处！

问题来了：同样是反相柱，为什么月旭的Ultimate® Polar-RP就比普通的C₁₈有这么明显的优势呢？

精
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老多_小多

第1楼2012/05/28

维生素A和β-胡萝卜素一针可以检测出来,但是β-胡萝卜素出峰太慢，峰形不好

0

精
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冷冷的冰雨

第2楼2012/05/28

峰形不好是不是和柱子有关系？

0

分
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冷冷的冰雨

第3楼2012/05/28

第一个峰有溶剂峰嫌疑啊

0

分
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fengmo4668

第4楼2012/05/28

你说的应该是反相系统。
反相系统，维生素A的顺、反式无法正常分离。
老多_小多(emoc98311) 发表:维生素A和β-胡萝卜素一针可以检测出来,但是β-胡萝卜素出峰太慢，峰形不好

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fengmo4668

第5楼2012/05/28

除了和柱子有关系，还是和柱子有关系。
特别是和保留时间的长短有很大的关系。
冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:峰形不好是不是和柱子有关系？

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fengmo4668

第6楼2012/05/28

冰雨看的仔细！
所以，我只能放弃最初的设想了。
冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:第一个峰有溶剂峰嫌疑啊

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冷冷的冰雨

第7楼2012/05/28

和流动相关系也比较大
fengmo4668(fengmo4668) 发表:除了和柱子有关系，还是和柱子有关系。
特别是和保留时间的长短有很大的关系。

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精
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fengmo4668

第8楼2012/05/28

是的，也有关系。
因为流动相的组成是决定保留时间长短的主因。
冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:和流动相关系也比较大

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dahua1981

第9楼2012/05/28

应助达人

恭喜风魔又发一篇力作

0

fengmo4668

第10楼2012/05/28

这一篇大家应该早就有心理准备了吧。
dahua1981(dahua1981) 发表:恭喜风魔又发一篇力作

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