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标准曲线的吸光度和浓度要求

webber11

2012/07/09

紫外可见分光光度计（UV）

刚接触UV，请教一个基础问题：

我做的标准曲线浓度是0.08ug/mL ~ 1ug/mL，吸光度是0.03～0.35，线性0.9995

样品的吸光度是基本都是0.00xx数量级，浓度就0.03ug/mL以下了（重测几次，RSD约3.2%，100%加标的回收率在90%左右）

所以我现在的问题是：

1）标准曲线的吸光度正常吗？不是说最好要0.2～0.8吗？

2）样品的吸光度太数据可信吗？是不是要增大浓度使其在标准曲线的中间段？

3）我所有的操作都是按照国标方法进行的，如果标样和样品的吸光度数据都偏小，那可能的原因是什么呢？

新手入门，请达人们多多指教～

非常感谢～～

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lh2000d

第1楼2012/07/09

从你给的上面的数据看你做的这条标准曲线不适用于测试你的样品。如果想准确定量的话你的样品浓度必须在你建立标准曲线所用的标样浓度范围以内。
如果标准是控制关心的样品的含量，像你这个情况结果就可以标为：<0.08ug/mL
如果要准确确定样品的含量是多少，可以重新建立一条浓度更低的标准曲线，将0.03ug/mL包含在内比如标样最小浓度的可以配一个0.015ug/mL 或0.02ug/mL
summer11(summer11) 发表:刚接触UV，请教一个基础问题：

我做的标准曲线浓度是0.08ug/mL ~ 1ug/mL，吸光度是0.03～0.35，线性0.9995

样品的吸光度是基本都是0.00xx数量级，浓度就0.03ug/mL以下了（重测几次，RSD约3.2%，100%加标的回收率在90%左右）

所以我现在的问题是：

1）标准曲线的吸光度正常吗？不是说最好要0.2～0.8吗？

2）样品的吸光度太数据可信吗？是不是要增大浓度使其在标准曲线的中间段？

3）我所有的操作都是按照国标方法进行的，如果标样和样品的吸光度数据都偏小，那可能的原因是什么呢？

新手入门，请达人们多多指教～

非常感谢～～

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webber11

第2楼2012/07/09

谢谢你的回复～

如果按你说的建一条浓度更低的标准曲线，那岂不是吸光度会更小？就更难达到0.2～0.8了啊
lh2000d(lh2000d) 发表:从你给的上面的数据看你做的这条标准曲线不适用于测试你的样品。如果想准确定量的话你的样品浓度必须在你建立标准曲线所用的标样浓度范围以内。
如果标准是控制关心的样品的含量，像你这个情况结果就可以标为：<0.08ug/mL
如果要准确确定样品的含量是多少，可以重新建立一条浓度更低的标准曲线，将0.03ug/mL包含在内比如标样最小浓度的可以配一个0.015ug/mL 或0.02ug/mL

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tutm

第3楼2012/07/09

现在这种情况可以换用光程更长的比色皿，比如50mm或100mm的，这样吸光度读数可以提高5-10倍
summer11(summer11) 发表:谢谢你的回复～

如果按你说的建一条浓度更低的标准曲线，那岂不是吸光度会更小？就更难达到0.2～0.8了啊

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webber11

第4楼2012/07/09

为什么按国标方法操作，测出来的吸光度那么小呢？实在想不出什么原因啊

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suiniubei

第5楼2012/07/13

你这个标曲不行。

　传统的机子吸光度要在0.2~0.8之间。现在有的机子先进一点，0.1~1.0也可以做出标曲。但吸光度在0.1以下，基本上是不可取的了。

　不要拘泥于书本。

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