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液相色谱测定游离氨基酸时样品前处理问题

  • youku06404
    2012/07/28
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 打算用HPLC测定游离氨基酸,看到一篇文献其样品前处理步骤如下:

    称取5g 左右(精确到0.001g),加入去离子水20ml,在冰浴中用ULTRA TURRAX(IKAT18 basic, German)组织捣碎3(22000r/min,每次10s,间隔10s),然后加入10% 磺基水杨酸20ml 混合均匀,于4℃下放置17h,中速滤纸过滤后,用4mol/LNaOH调整滤液pH 值至6.0,并定容至50ml,经10kDa 超滤膜超滤除去大分子。超滤液用AccQFluor Reagent Kit进行衍生处理后,用外标法测定样品中的游离氨基酸含量。

    想请教一下这里“用4mol/L NaOH调整滤液pH 值至6.0”的作用是什么呢,谢谢!
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  • tangtang

    第1楼2012/07/28

    有乱码,整理一下:

    打算用HPLC测定游离氨基酸,看到一篇文献其样品前处理步骤如下: 称取5g 左右(精确到0.001g),加入去离子水20ml,在冰浴中用ULTRA TURRAX(IKAT18 basic, German)组织捣碎3次(22000r/min,每次10s,间隔10s),然后加入10% 磺基水杨酸20ml 混合均匀,于4℃下放置17h,中速滤纸过滤后,用4mol/LNaOH调整滤液pH 值至6.0,并定容至50ml,经10kDa 超滤膜超滤除去大分子。超滤液用AccQ•Fluor Reagent Kit (P/N WAT052880)进行衍生处理后,用HPLC 外标法测定样品中的游离氨基酸含量。 想请教一下这里“用4mol/L NaOH调整滤液pH 值至6.0”的作用是什么呢,谢谢!

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  • youku06404

    第2楼2012/07/29

    嗯,谢谢!

    tangtang(tangtang) 发表:有乱码,整理一下:

    打算用HPLC测定游离氨基酸,看到一篇文献其样品前处理步骤如下: 称取5g 左右(精确到0.001g),加入去离子水20ml,在冰浴中用ULTRA TURRAX(IKAT18 basic, German)组织捣碎3次(22000r/min,每次10s,间隔10s),然后加入10% 磺基水杨酸20ml 混合均匀,于4℃下放置17h,中速滤纸过滤后,用4mol/LNaOH调整滤液pH 值至6.0,并定容至50ml,经10kDa 超滤膜超滤除去大分子。超滤液用AccQ•Fluor Reagent Kit (P/N WAT052880)进行衍生处理后,用HPLC 外标法测定样品中的游离氨基酸含量。 想请教一下这里“用4mol/L NaOH调整滤液pH 值至6.0”的作用是什么呢,谢谢!

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  • morgan2004

    第3楼2012/11/16

    你看到的文献应该是参考的WATERS的氨基酸测定推荐方法,调整到6.0的作用是有利于衍生化反应,AQC在反应时对pH范围要求较严格,如果控制不好,就不会生成硫脲。最后,你在提问类似问题的时候,建议将检测方法也提一下,不然不利于大家回答问题。

    希望对你有帮助。

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