请问目前市场上不同类型PCR的原理及应用。

PCR技术：

    聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是利用耐高温的DNA聚合酶体外快速扩增DNA的技术。通过PCR可以简便、快速地从微量生物材料中获得大量特定的核酸，并具有很高的灵敏度和特异性，可用于微量核酸样品的检测。PCR技术原理是将欲扩增的DNA做模板，以和模板正链和负链互补的两种寡聚核苷酸做引物，经过模板DNA的变性、模板与引物结合复性及在DNA聚合酶作用下发生引物链延伸反应的三步循环来扩增两引物间的DNA片段。每一循环的DNA产物经变性后又成为下一个循环的模板 DNA。这样，目的DNA的数量将以2n指数形式累积，短时间内的30(n)个循环， DNA量就可达到原来的上百万倍。



荧光PCR技术：

    荧光PCR技术对PCR产物的检测原理做了很大的改进，可动态实时监测核酸产物的形成，无须后处理过程，这样在一定程度上避免了扩增产物的污染，既缩短了检测时间，又节省了特殊仪器及专业人员的配备。

荧光PCR原理：

    荧光PCR不同于其它PCR之处在于利用荧光染料在激发光的作用下所释放的荧光光能的变化来动态直接反映出PCR扩增产物量的变化。因荧光信号变量与扩增产物量成正比，通过足够灵敏的自动化仪器对荧光的采集与分析来实现对初始模板的定量。

荧光染料的引入有以下几个途径：直接结合核酸产物、标记引物或标记特异性探针，而荧光标记的探针共有三类：（1）分子信标探针；（2）杂交双探针；（3）Taqman双标记探针，匹基公司开发的荧光PCR检测试剂盒主要基于这种。在PCR反应体系中除常规一对引物外，另有一个能与PCR产物杂交的荧光双标记探针。该探针的5’端与3’端分别标记上不同的荧光基团，5’端荧光基团吸收光能后会将能量转移给临近3’端荧光淬灭基团，所以正常正常情况下检测不到该探针5’端荧光基团所发出的荧光信号。但在PCR延伸反应过程中，Taq酶的5’ －3’外切酶活性将5’端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离了3’端荧光淬灭基团的屏蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，其中所切割的荧光基团数与PCR产物的数量成比例，因而根据PCR反应液中的荧光强度就能算出原始的模板量。



应用领域：临床、血液筛查、植物检验检疫、动物检验检疫、食品、饲料卫生等