关于热启动

在传统的PCR反应中，极易发生引物错配和二聚体的形成，继而导致非特异性产物的扩增。热启动方法的问世有效地解决了这些问题，不仅优化了目标扩增产物，同时也减少了非特异性扩增，而且使得在传统PCR技术中较难扩增的单拷贝基因以及超长片段变得更简便。

金思德 E1000-PCR仪是目前市场上唯一具有热启动功能的PCR仪，它主要是通过物理方法实现的热启动，能够在不使用昂贵的热启动酶的条件下，就可以有效地减少反应中非特异性产物的产生。

经实验室的研究结果表明，通过使用E1000-PCR仪的热启动功能，能够有效地帮助实验人员在做较难扩增的目标产物时得到最佳的实验结果，减少实验摸索时间，快速解决问题。

实例：

PCR扩增目的基因：Human dystrophin gene, Alu7-2 repeat。

PCR扩增片段大小：320bp。

PCR的反应体系：25ul体系，包含模板DNA（人基因组DNA）-1ul；上下游引物各0.5ul；dNTP -0.5ul；Buffer -2.5 ul；Taq酶0.25 ul；ddH2O-19.75ul。

PCR的反应条件：94℃ 2min; 94℃ 50s,67℃1min,72℃ 2min,42cycles;72℃ 10min;4℃∞。

热启动的操作步骤：

1. 打开E1000-PPCR仪，建立实验方法条件；

2. 选择热启动模式；

3. 仪器加热板升温，待仪器升温至80℃；

4. 打开仪器热盖，将空的PCR管放置于热板上；

5. 依次将反应体系中各组分加入PCR管中；

6. 合上热盖，点击“Run”按钮，开始运行。

PCR产物电泳结果：

（1）PCR反应体系中含有普通的Taq酶：

（2）PCR反应体系中含有Taq-plus酶：

（3）PCR反应体系中含有热启动酶：