多糖GPC 色谱柱选择

应助达人

你采用的什么物质作为标准样品的？几个点的标准曲线， 另输入其K、a值了吗？
不同的柱子分离肯定是不同的，所以很多时候，我们最好不要用不同的柱子串联使用，通过标准样品就会发现其所绘的曲线的线性有可能不是一条直线。拟合不好。

用的是shodex stanrd P-82 Pullulan葡聚糖标准品，选取5900-200000分子量共6个点，绘制三阶校准曲线。没有输入K,a值。（弱弱问一句，K、a值是必须的吗？）
USP以及专利上都是用两根柱子串联，三阶校准曲线。
不明白为什么要这样子串联呢？我没串联做出来的结果会差那么多？！

应助达人

你说的美国专利上的重均分子量是怎么测定得到的？也是在你实验室测得的吗？

其实你现在用的普适校正，严格的说，还不是，因为你没输入其K、a值。按照普适校正测定的数均分子量相对更准确，而重均分子量相对来说没那么准确，再要看看你色谱图，选择的保留时间和基线对数据结果也有很大的影响。

按理现在商业化的柱子不会有那么大的差别。

wufch(wufch) 发表:刚接触GPC，遇上一些问题，请各位大侠不吝赐教！

本实验室有根 TSKgel G4000PWxl（符合L39要求），孔径500A，葡聚糖排阻范围在1000-700000。于是直接用这根柱子进行测试，用shodex stanrd P-82 Pullulan标准品绘制标准曲线，测定某外国知名品牌商品分子量，得到的重均分子量明显小于其质量要求范围，重均分子量约30000。而相同样品在美国专利上的重均分子量46000，其采用的是waters Ultrahydrogel 1000A、120A两根柱子串联。

那是人家报道的，实验室没有那两根柱子。