仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
生命科学仪器
>
生命科学仪器综合讨论
>
帖子详情
利用血细胞计数板进行细胞计数: 像数1,2,3那样简单
wpic_2013
2013/10/29
私聊
生命科学仪器综合讨论
许多关于细胞利用的一些生物学应用
,
如微生物学、细胞培养、血液检查等要求我们在实验中确定细胞的浓度。
细胞计数非常简单,需要有一个计数板,称为血细胞计数板,
或
血细胞计数器
。
19
世纪法国解剖学家
Louis-Charles Malassez
发明
了这种血细胞计数板。血细胞计数板是由一片较厚的特制玻片构成
,
中间有一个垂直线网格。
网格的尺寸是给定的
,
因此每条线覆盖的区域是已知的
,
这样就可以对一定体积内的溶液中的细胞数量进行计数,为后期的
血细胞检测
奠定基础。
最为常见的
血细胞计数板类型的中部有一个
“
H
”
形结构
,
上面有两个像镜子一样抛光的网格表面
,并
可在上面加上外罩
。
加载血细胞计数板
开始进行计数之前
,
用擦镜纸拭去灰尘颗粒
,
确保
血细胞计数板及其盖玻片处于洁净状态。安装在
血细胞计数板上的盖玻片是特制的,明显厚于传统的显微镜盖玻片,
这是因为它必须能够克服液滴的表面张力。
确保在加载细胞悬液之前
,
先将
盖玻片放置在计数表面,
然后将吸液头和样本放进其中的一个
V
型孔中,并小心地挤出样本。利用毛细管作用充填盖玻片下部
的区域。
必须放入足够的液体以便覆盖整个镜片的表面
,
通常需要大约
10ul
,
但不要溢出表面。您可以在一台
血细胞计数板中加载两个样本
,
每个样本进入两个网格。
将加载完的
血细胞计数板放置在显微镜台上,然后将计数格在
低倍
镜
焦距
中显示。
将
样本静置几分钟
,
不要移动盖玻片
,
以免产生气泡导致计数困难。
在
血细胞计数板上进行血细胞计数
一个
血细胞计数板的整个网格包括
9
个方格,每个方格的面积为
1
mm
2
。
血细胞计数
板的中心区域有
25
个较大的方格,每个大的方格中又包含
16
个小方格。
当进行计数时,仅对那些位于大方格两侧的各行中的细胞进行计数,以避免重复计数。悬液必须稀释到足够的程度,这样,细胞或其它颗粒才能均匀分布,不会再网格中相互重叠。
为了判断细胞的活性
,
通常采用一种特殊的染色剂
(
如用台盼蓝稀释
样本)
。这种染色方法
,
又称为
染色排除法
,
选用一种重氮染料
,
它可以进入死细胞的细胞膜
,
将它们染成蓝色
;
而这种染料不会被活细胞的细胞膜所吸收
,
由此
,
活细胞不会被染色。
当在显微镜下进行观察时,死细胞呈深蓝色。
为了进行计数
,
需要确定在所选的方格内识别目标细胞类型并计算系统化细胞计数所需的放大倍数
,
这样总计数大约为
100
个
,
这是统计学显著性计数所需的最低细胞数量。
对于较大的细胞,您只需对角上的四个和中间的一个大方块中的细胞进行计数即可。对于小细胞的浓悬浮液,您可能希望对中间方格的
4
个外部和中间的方格进行计数,或进一步稀释悬液。
切记!如果存在细胞与边线重叠的情况,若与顶部或右侧边线重叠,其计算在“内”;若与底部或左侧边线重叠,其计算在“外”。
如果中间区域和每个角落的方格为
1mm x 1 mm = 1 mm
2
:
每个方格的深度为
0.1 mm
。每个方格在该深度的最终体积为
100nl
。
一旦您获得了细胞计数的总数,可以通过下列公式计算细胞浓度:
细胞总数
/ml
=统计的细胞总数
×
(稀释因子
/
方格数)
×10
,
000
细胞
/ml
因此,如果您用
1:1
的台盼蓝对样本进行稀释,并在
4
个角落的方格加上中间大方格中统计得到
325
个细胞,则每毫升(
ml
)
中细胞总数
=
:
325
个细胞
× [
2(
稀释因子
)
/5
个方格
] × 10
,
000
细胞
/ml = 130 ×10
4
细胞
/ml
如果您想知道原先样本中有多少细胞
,
只需用总的样本量乘以细胞浓度即可。
例如,如果您原先的样本量是
5ml
,则您的样本中总计拥有
=:
130 ×10
4
细胞
/ml × 5ml = 650×10
4
个细胞
分
该帖子已被
版主-zhang8826857
加5积分,加2经验;加分理由:鼓励发帖交流
相关话题
1
五颜六色的采血管
2
人用肝素化采血管的质量控制
3
生气与疝气有关吗
4
硅胶假体-乳房植入物的安全性
5
全自动血细胞分析仪——能依靠它们去计数吗?
近期热榜
【七月征文】不一YOUNG实验“猿”
报名开启:ICS2024第十三届光谱网络会议!
巡检超百家 丹纳赫集团参与第四届客户关怀季
推荐收藏!盘点中药材及饮片检测解决方案
热门活动
甄选国优仪器,助推设备更新
采购咨询618活动:1000元奖励等你拿
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
确定质粒DNA质量/纯度的最佳方法
资料
2024/02/01
日立生化分析仪7100 標樣和樣本處理方法問題
求助
2022/03/02
融合蛋白是什么?融合蛋白和单抗的区别及优势?
分享
2023/05/24
亲和层析纯化蛋白原理解析
资料
2023/09/14
求助,关于气相色谱
原创
2024/06/28
关于岛津GC2030气相色谱仪进样塔LE2报错
原创
2024/06/27
FID倒峰
原创
2024/06/27
气相色谱GC是否用到质量流量控制器(mass flow controller)?是否有本安防爆需求?
求助
2024/06/27
能力验证频次
求助
2024/06/27
与仪器信息网相伴这数十载
原创
2024/06/25
求助大佬!苯系物和氯代烃可以只用一个检测器吗?
求助
2024/06/26
这个场景题,按新版准则,怎么判呢
求助
2024/06/25
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...