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小Q来了以后的三次污染事件

chrushcc

2013/10/31

昨天来生物质谱版逛逛，没看几个贴就已经看到11年的了。我也来灌灌水，说不定可以拿个奖。言归正传，陪伴我的小Q已经一年多了，一共出现过三类污染事件。如果有同胞遇到我一样的情况，希望这篇小文能对您有帮助，可以少走一点弯路。

1. 硅烷类化合物的污染

污染物：M/Z445，462，536，610等，都是硅烷类化合物，平时我们空气中也有，nano源常见的污染物，但是信号不高。

悲剧是这样发生的，我们实验室装修，整个液质系统关掉一周。重新开机之后，运行bsa标准样品，怎么也不出峰。加大bsa样品的浓度到1pmol，才出了一点点的小峰。之前一直以为是进样的问题，液相更换掉流动相，分析柱，trap柱，清洗质谱仪都没有作用。后来发现m/z445等的峰特别强。然后又一轮排除，清洗了液相管路，更换流动相，还是没有作用。

如上图所示，后来偶然发现打开质谱室的门，只进水样品，污染物的TIC逐渐下降。同时网上各种搜445等是什么物质，发现是常见硅烷污染物之一，但是我们实验室为何强度这么高。打电话给thermo工程师，被告知装修后会有这种情况，唯一的方法是通风！在跟负责装修的同事沟通后，终于找到罪魁祸首——硅酮胶。硅酮胶就是常说的玻璃胶，硅酮的主要成分是聚二甲基硅氧烷。这硅烷类不高才怪！

在实验室通风装置装好之前，我硬是开着门窗，用亚都空气过滤净化器撑了一段时间。下图是开着门跑的bsa，已经能看到色谱图了，不过跟之前比还是差的远了。

本次事件后的启发:

1) 仪器最好安装在装修一年以上的实验室。或者是选用非硅酮类胶。

2) 在北京的话，还是建议您装上空气净化装置。不仅是化学污染物，灰尘对仪器来说是个杀手。在通风装置装起来之前，我用过亚都的进化器，一个多月，滤芯已经都是尘土里。没办法，空气质量太差了。

2. 四级杆污染

高灵敏度，总是要付出一些代价的，我的小Q做蛋白样品不耐脏，清洗四级杆相对要频繁。这种污染状况是深圳的同事先发现的，我偷用一下。在运行BSA样品的时候现象表现不明显。但是在运行复杂样品的时候可以看到在高有机相的时候肽段的信号非常明显的减弱，下面两个图是我们实验室自己的标准样品ECOLI全蛋白四级杆污染和没有污染总离子流图对比。如果看到高有机相的肽段出不来了，有可能就是四级杆脏了，打400请工程师来清洗吧。我跟工程师学了一着快速判断的方法，走一阵校正液，看能否隔离出某个离子，该离子强度是不是下降很多。例如看m/z195，fullscan的时候强度有E8，用2Da隔离m/z195，如果只有E5或者很低，那就该洗四级杆了。因为四级杆已经脏的不能对离子进行选择了。

本次事件后的启发:

1) 除了bsa标准品外，还是要建立一个复杂样品的标准品。我们实验室用过酵母和大肠杆菌，现在用大肠杆菌。

2) 样品的前处理一定要过关。

3) 控制好样品上样量。样上少了，里面的污染物一样会跟着减少。小Q刚来的时候，我是按照实验室例外一个仪器的上样量来估计的，结果发现多了好几倍。

4) 勤维护。如果样品比较脏，可以多清洗离子传输管等仪器前段部件，尽量让污染不要到后面的四级杆。遇到严重污染的样品，应该立刻更换掉trap柱和分析柱。

3. CHAPS

做蛋白的同胞肯定都知道chaps是常用的去污剂。Chaps对scx柱子影响不大。但是我用的是c18的反相柱。样品污染了chaps后，保留时间会退后，肽段也不易洗脱。所以现在我们液体消化的样品都不用chaps。如果样品中有chaps，可以在提蛋白的时候用丙酮沉淀掉。

本次事件后的启发:

做蛋白等复杂样品，一定要注意在前期处理时所用试剂对质谱的兼容性，仪器收到损坏，实验结果受到影响。

还要注意实验中的交叉污染。我也遇到一次，过有的同事在做双相电泳的时候，跑IEF用镊子夹取胶条，沾上了矿物油。后来列外一位做消化的同事在胶条转管的时候也用了一个镊子。结果悲剧了，跑出来的样品都跟石油的峰一样，黑压压的一大片峰。因为我们是流程化操作，到我这边已经是处理好的样品。所以我又排查了半天。

总之，质谱是个非常敏感娇气的家伙，大家都小心伺候着吧。

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〓疯子哥〓

第1楼2013/11/01

楼主的文章写的非常不错
提出问题分析问题进而提出解决案例，相当棒

1

八杯水

第2楼2013/11/01

不明觉厉，支持一个。

0

落叶

第3楼2013/11/01

基础很扎实，知识很丰富，思路很清晰，逻辑很强大，攒一个吧

0

wulin321

第4楼2013/11/01

应助达人

灰尘也是仪器的一大‘杀器’

0

windschen

第5楼2013/11/02

必须注重细节，才能防止问题发生。

0

chrushcc

第6楼2013/11/02

对的，细节决定成败。
windschen(windschen) 发表:必须注重细节，才能防止问题发生。

0

chrushcc

第8楼2013/11/03

谢谢！我会继续努力的！
〓疯子哥〓(madprodigy) 发表:楼主的文章写的非常不错
提出问题分析问题进而提出解决案例，相当棒

0

wufenyut

第9楼2013/11/05

我们是政府花大价钱采购的废物（单四极杆），现在要进垃圾堆了

0

phillyrin

第10楼2013/11/05

硅氧烷的445和447绝对可以拿来做内标物的，千万要留一点儿，别洗没了。

0

symmacros

第11楼2013/11/07

应助达人

这个案例和经验太好了，鉴赏。

0

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