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ELISA试剂盒实验操作之标本采集及贮存

hysw

2013/12/04

ELISA酶联免疫法因其灵敏度高，特异性好的有点被广泛运用与各种实验。在ELISA试剂盒实验虽然时间短，但是过程十分复杂，且实验中的每个步骤都需要实验人员百分之百的投入。稍有疏忽很可能就会导致实验结果背景值过高、白板等现象。为了能让大家在ELISA实验前有个充分的了解，今天要为大家讲解的是ELISA试剂盒实验操作之标本采集及贮存。
血清标本宜在新鲜时检测，严重溶血标本禁用。一般说来，在 5 天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合，使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需-20℃保存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存;最好使用一次性玻璃试管或真空管采血管;并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶标记物不易洗脱有关;EDTA、酶抑制剂(如NaN3)可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性;血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。
严重溶血，以 HRP 为标记的ELISA 测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，催化底物显色造成假阳性; 混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净;如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应; 标本凝固不全，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果; 采血试管洗涤不彻底、反复使用易交叉污染; 塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。
所以为了保证我们实验的结果，在标本采集和贮存的时候我们需要保证其不被污染不受到破坏。

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平凡人

第1楼2013/12/16

ELISA试剂盒在医学上还根据被测对象不同，有不同的分类。比如人用和动物用。这些操作时应该不同。

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