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扣一扣国标中液质法测定瘦肉精的酶解问题

  • 初晶古恒
    2014/04/02
  • 私聊

液质联用(LCMS)

  • 今日做瘦肉精检测,拿来国标GB/T 22286-2008 《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法》对照进行。

    其中试剂和材料中4.13为“β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶(β-Glucuronidase/aryl sulfatase):10000 units/mg。”这个规格应该是针对酶试剂的要求。而样品制备6.1中对于酶使用方法为“称取2g(精确到0.01g)经捣碎的样品于50mL离心管中,加入8mL乙酸钠缓冲液,再加入50μL β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶,混匀后,37℃水浴水解12h。”

    这就让使用者产生了疑惑,试剂要求是10000 units/mg,应该是定义的固体,而使用是50μL为液体,如何配置酶解液在标准中无任何说明。那么这个液体中酶的浓度到底是多少呢?如果按标准出了笔误来说把mL写成了mg,那么对于2g样品其酶的使用绝对量为500units。

    而另一个标准GB/T 21313-2007《动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》中,试剂和材料5.14“β-葡萄糖醛甙肽酶/芳基磺酸酯酶溶液(β glucuronidase/arylsulfatase)(30 U/mL)”。使用中是7.1“准确称取10.0g样品,加入15mL pH5.2的乙酸-乙酸钠缓冲溶液(5.8),1000r/min匀浆1min,再加入β-葡萄糖醛甙肽酶/芳基磺酸酯酶溶液100uL,于37℃±1℃震荡酶解过夜,。。。”按此标准对于10g样品其酶的使用绝对量是3U。

    当然有很多坛友也讨论过酶解的必要性,可能是对于肌肉样品是否酶解差异不大,对于除肌肉外的样品是否酶解有较大差异。而且用酶联免疫法处理肉样根本不用酶解。如果真的没有必要酶解,那么就应该做好方法偏离和数据验证,这样即节约试剂,又节约人力和时间。如果必须要酶解,那就一定要控制好酶解操作的质量。

    如果units=U,那么上述这两个标准中酶的效价差别也太大了,差了有833倍。另外我们实验室有22286的授权,没有21313的授权,那能否用21313的酶解量来进行22286的实验呢?如果可以的话,怎么按27414怎么进行方法偏离的验证呢?因为22286中没有说清楚酶解液的使用浓度和方法。

    对于严格按照CNAS要求的第三方实验室,你们都是怎么处理食品检测中瘦肉精方法的酶解问题的?
    食品检测板块人太少了,我转到这里求助吧。
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  • sukiliang

    第1楼2014/04/02

    俺不是第三方!
    我们之前也有个固体的β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶,当时我还真不知道怎么配置,后来直接买默克的β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶液体!

    如果这能有喂食过量β兴奋剂的大量样品还真想做做比对,毕竟β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶这东西太贵了,默克的β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶液体不是便宜的货,2cc都1千多一瓶(没记错的话)

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  • hujiangtao

    第2楼2014/04/02

    应助达人

    这也太贵了

    sukiliang(sukiliang) 发表:俺不是第三方!
    我们之前也有个固体的β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶,当时我还真不知道怎么配置,后来直接买默克的β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶液体!

    如果这能有喂食过量β兴奋剂的大量样品还真想做做比对,毕竟β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶这东西太贵了,默克的β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶液体不是便宜的货,2cc都1千多一瓶(没记错的话)

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  • ie4680180

    第3楼2014/04/02

    应助达人

    俺也不是第三方,也没检测过兽药残留!
    但我知道,标准还是可以变通一些的,只要对结果没大的影响。呵呵

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  • 初晶古恒

    第4楼2014/04/02

    我国入世的时候曾经有过概念就是标准等同于或类似于技术法规,要是法规可以变通那怎么玩?

    不过标准标准方法的确可以偏离,但是规范的偏离必须有充分必要的数据来证明。

    而这个问题在于标准里酶的浓度单位不一致,搞不清楚酶的浓度到底是多少,没法去做标准方法的比较和偏离。

    ie4680180(ie4680180) 发表:俺也不是第三方,也没检测过兽药残留!

    但我知道,标准还是可以变通一些的,只要对结果没大的影响。呵呵

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  • 初晶古恒

    第5楼2014/04/02

    按标准中10000 units/mg来说,假如制定标准的人认为酶解液密度和水差不多(实际上是有差别的),在标准中把μL写成了mg,那就意味着我们买的100000 units/mL的酶,每次需要加500μL。那一瓶一共才2000μL就要好几百元,如果只能用4次,测一次瘦肉精得多少钱啊。。

    sukiliang(sukiliang) 发表:俺不是第三方!
    我们之前也有个固体的β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶,当时我还真不知道怎么配置,后来直接买默克的β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶液体!

    如果这能有喂食过量β兴奋剂的大量样品还真想做做比对,毕竟β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶这东西太贵了,默克的β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶液体不是便宜的货,2cc都1千多一瓶(没记错的话)

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  • ie4680180

    第6楼2014/04/02

    应助达人

    嗯,units=U这个可能不相同哦。

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  • 初晶古恒

    第7楼2014/04/02

    我今天专门问了以下做药物检测的,他们有关于效价的检测,说units和U是一个概念。

    有点搞不懂了。

    ie4680180(ie4680180) 发表:嗯,units=U这个可能不相同哦。

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  • 你说晕不晕

    第8楼2014/04/03

    关注下 坐等大神解答!

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  • ctary

    第9楼2014/04/04

    我们按附件方法检查的,结果不错,供参考

    初晶古恒(zrtt) 发表:今日做瘦肉精检测,拿来国标GB/T 22286-2008 《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法》对照进行。

    其中试剂和材料中4.13为“β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶(β-Glucuronidase/aryl sulfatase):10000 units/mg。”这个规格应该是针对酶试剂的要求。而样品制备6.1中对于酶使用方法为“称取2g(精确到0.01g)经捣碎的样品于50mL离心管中,加入8mL乙酸钠缓冲液,再加入50μL β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶,混匀后,37℃水浴水解12h。”

    这就让使用者产生了疑惑,试剂要求是10000 units/mg,应该是定义的固体,而使用是50μL为液体,如何配置酶解液在标准中无任何说明。那么这个液体中酶的浓度到底是多少呢?如果按标准出了笔误来说把mL写成了mg,那么对于2g样品其酶的使用绝对量为500units。

    而另一个标准GB/T 21313-2007《动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》中,试剂和材料5.14“β-葡萄糖醛甙肽酶/芳基磺酸酯酶溶液(β glucuronidase/arylsulfatase)(30 U/mL)”。使用中是7.1“准确称取10.0g样品,加入15mL pH5.2的乙酸-乙酸钠缓冲溶液(5.8),1000r/min匀浆1min,再加入β-葡萄糖醛甙肽酶/芳基磺酸酯酶溶液100uL,于37℃±1℃震荡酶解过夜,。。。”按此标准对于10g样品其酶的使用绝对量是3U。

    当然有很多坛友也讨论过酶解的必要性,可能是对于肌肉样品是否酶解差异不大,对于除肌肉外的样品是否酶解有较大差异。而且用酶联免疫法处理肉样根本不用酶解。如果真的没有必要酶解,那么就应该做好方法偏离和数据验证,这样即节约试剂,又节约人力和时间。如果必须要酶解,那就一定要控制好酶解操作的质量。

    如果units=U,那么上述这两个标准中酶的效价差别也太大了,差了有833倍。另外我们实验室有22286的授权,没有21313的授权,那能否用21313的酶解量来进行22286的实验呢?如果可以的话,怎么按27414怎么进行方法偏离的验证呢?因为22286中没有说清楚酶解液的使用浓度和方法。

    对于严格按照CNAS要求的第三方实验室,你们都是怎么处理食品检测中瘦肉精方法的酶解问题的?



    食品检测板块人太少了,我转到这里求助吧。

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  • qzxmsy

    第10楼2014/04/08

    应助达人

    第一点:找度娘了解了一下,unit就是单位的意思,那么也可以理解为就是U。
    第二点:抛开这两个标准,我们再来看看SN/T1924-2007《进出口动物源性食品中克伦特罗,莱克多巴胺,沙丁胺醇,特布他林残留量的检测-液相色谱-质谱法》的描述:β-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酸酯酶:含β-盐酸葡萄糖醛甙酶134600U/mL,芳基硫酸酯酶5200U/mL。如果合并计算的话含量则为139800U/mL,即1139.8U/uL。该标准在提取过程中说明10g样品用量为50uL,即酶用量为6990U。
    现在回过头来看上述两个标准:
    GB/T 22286-2008 《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法》规定2g样品用酶500U,折算成10g样品需要酶2500U。
    GB/T 21313-2007《动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》规定10g样品用酶100uL,假设酶的含量为30U/uL(注意:这是的单位是U/uL,即认为制订标准的同志出现笔误了!),那么酶的用量就是3000U。这个水平与SN/T1924-2007、GB/T22286-2008比较接近!
    综上所述,可以得出以下几个结论:
    1.GB/T21313-2007在酶的规格上出现重大失误,应该是30U/uL,即30000U/mL。
    2.在莱克多巴胺的酶解方面,酶的用量为每10g样品加酶2500-7000U左右。
    查了一些色谱试剂供应商的资料,每100KU价格在800元左右,折算到每个样品约20-60元,确实不算便宜。可能的话,建议适当降低酶用量,毕竟目前样品中莱克多巴胺基本是没有的。如果检出莱克多巴胺含量较高的话,建议提高酶用量再检一次。

    附:在查阅资料的时候发现,农业部数个公告虽然规定了酶的用量,但却未明确酶的规格(含量),这样的标准让标准的使用者情何以堪!

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