微雨燕双飞
第3楼2014/08/13
样品处理
饲料蛋白质水解(酸水解法):饲料粉碎成细小颗粒,将一定量样品*置于20 mL旋盖(内衬PTFE隔垫)细口瓶,加入10 mL 0.1%苯酚+6 mol/L HCl水溶液,旋紧盖子,振荡混匀,110 ℃下反应24 h。
反应完毕,将反应液全部转移到100 mL蒸馏瓶中,75 ℃下减压蒸馏至近干,以除去反应液中残余的HCl,然后用12 mL 0.1 mol/LHCl水溶液分三次溶解残渣,并转移到20 mL玻璃具塞刻度试管,再用纯水定容至20 mL,待衍生。
* 样品中蛋白质量最好处于10 mg~40 mg之间
样品溶液衍生
量取200 μL样品溶液,置于1.5 mL塑料离心管中,加入20 μL正亮氨酸内标溶液*,混匀,再加入100 μL 1 mol/L三乙胺乙腈溶液和100 μL 0.2 mol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液,混匀,室温反应1小时,然后加入400 μL正己烷,旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s,静置分层。
取200 μL下层溶液与800 μL水*混合,0.22 μm针式过滤器过滤,待分析。
微雨燕双飞
第6楼2014/08/13
化合物 | mol/100 g饲料 | 质量分数/% | RSD(n=6)/% |
Asp | 0.0310 | 4.12 | 2.25 |
Glu | 0.0520 | 7.65 | 1.42 |
Ser | 0.0211 | 2.22 | 2.87 |
Gly | 0.0370 | 2.78 | 2.64 |
His | 0.0069 | 1.07 | 3.02 |
Arg | 0.0193 | 3.36 | 1.93 |
Thr | 0.0136 | 1.62 | 2.83 |
Ala | 0.0254 | 2.26 | 3.15 |
Pro | 0.0220 | 2.53 | 2.77 |
Tyr | 0.0075 | 1.36 | 3.23 |
Val | 0.0180 | 2.12 | 1.99 |
Met | 0.0051 | 0.76 | 2.84 |
Cys-Cys | 0.0009 | 0.21 | 3.46 |
Ile | 0.0136 | 1.79 | 2.91 |
Leu | 0.0247 | 3.24 | 0.98 |
Phe | 0.0118 | 1.95 | 2.69 |
Trp | 0 | 0 | 0 |
Lys | 0.0218 | 3.19 | 2.26 |
总量 | 0.4170 | 43.48 | 2.44 |
由表中数据可知氨基酸总含量为43.48%,与厂家标示的蛋白质含量43%相当。平行样品的氨基酸含量以及蛋白质含量的RSD均小于3.5%,表明该方法具有较高的重现性。