仪器信息网APP

选仪器、听讲座、看资讯

立即体验

当前位置：仪器社区 >特色服务 > 厂商论坛 > 帖子详情

【许愿原创】高效液相色谱法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸含量

夏天的雪

2014/12/26

高效液相色谱法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸

γ-氨基丁酸是一种广泛分布于动植物体内的功能性非蛋白质氨基酸，作为中枢神经系统中重要的异质性神经递质，具有降血压、抗动脉硬化、激活脑内葡萄糖代谢、改善脑机能、促进生长激素分泌等生理功能。近些年，富含γ-氨基丁酸的功能性食品相继被开发并得到了广泛的应用。

发芽糙米是糙米经浸泡发芽到一定长度，一种由糠层、胚芽及胚乳组成的糙米制品。糙米经发芽后，不仅口感得到改善，而且其营养成分和功能因子大量富积，尤其是γ-氨基丁酸，与未发芽的糙米和精白米相比，其含量大幅增加。

目前γ-氨基丁酸的分析检测方法有比色法、氨基酸分析仪法、层析法和高效液相色谱法等。本实验以丹磺酰氯为衍生试剂，结合高效液相色谱-二极管矩阵检测器，建立一种能快速、准确测定发芽糙米中γ-氨基丁酸含量的分析方法。

1 材料与方法

1.1 仪器及设备

Waterse2695液相色谱仪（带有柱温箱和2998二极管矩阵检测器）

pHS-3C型酸度计

恒温水浴锅

超声波清洗机

1.2 试剂

γ-氨基丁酸标准品（纯度≥99%）；

丹磺酰氯；

乙腈；

冰乙酸；

盐酸；

无水碳酸钠；

乙酸钠

1.3 色谱条件

色谱柱：OdyssilC18(250mm×4.6mm, 5μm)；

Cat：OS952505-0

S/N:O9510525BXP0042

流动相：乙腈：50mmol/L乙酸钠溶液（乙酸调节pH值为6.0）=30：70；

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

进样量：20uL

检测波长：216nm

1.4 样品预处理

将发芽糙米用粉碎机充分粉碎后过100目筛（过筛率≥90%），然后称取5g发芽糙米样品置于三角烧瓶中，加入50mL水，超声提取30min，冷却至室温。分别加入2mL亚铁氰化钾（质量分数10.6%）和2mL硫酸锌（质量分数30%）溶液，摇匀后用超纯水定容并过滤，滤液备用。

准确吸取0.5 mL上述滤液到5 mL具塞玻璃试管中，加入0.5mL 碳酸钠（pH9.8），混匀后加入0.5mL丹磺酰氯-乙腈溶液（2g/L），充分混合，45℃水浴避光反应1h（中间摇晃1次），反应完成后加入0.2mL盐酸（1mol/L）中止反应，并用水定容至刻度。取上清液经0.45μm滤膜过滤后进样分析。

2 结果与讨论

2.1 实验原理

γ-氨基丁酸对电化学、紫外和可见光吸收小，采用一些常规的直接测定法灵敏度较低，不利于含量的准确测定分析。采用高效液相色谱法对其测定时，通常需要衍生试剂进行衍生，丹磺酰氯是一种常用的氨基酸衍生试剂，它能够与肽的N-端氨基酸反应，生成具有较强紫外吸收的丹磺酰-肽衍生物，从而提高了γ-氨基丁酸在紫外检测器上的灵敏度。反应机理见图1

2.2 检测波长的选择

利用Waters 2998二极管矩阵检测器在210-400nm波长范围内对衍生后的γ-氨基丁酸标准溶液进行光谱扫描，确认最佳检测波长。γ-氨基丁酸与丹磺酰氯的衍生产物在216nm、247nm和329nm处均有较强吸收。分别在这三个波长处进行色谱图提取，结果表明，在波长216nm处γ-氨基丁酸与丹磺酰氯的衍生产物信号响应值最大，同时在样品的实际检测过程中发现选择216nm为检测波长时，在待测物质附近没有出现干扰物质，因此选择216nm为检测波长。光谱扫描图和不同波长处的色谱图分别见图2、图3.

2.3 标准曲线及检出限

准确称取10.0mg γ-氨基丁酸标准品于50mL容量瓶中，用水定容至刻度，配成浓度为200μg/mL的标准储备液。吸取适量体积标准储备液，经丹磺酰氯衍生，配成一系列浓度的γ-氨基丁酸标准溶液。以样品峰面积Y(mV)对质量浓度X（μg/mL）作图，得到线性回归方程Y=138705X+22060，相关系数R²=0.99993，结果表明：γ-氨基丁酸含量在该浓度范围内呈现良好的线性关系。见图4

2.4 回收率与精密度

称取5g经过粉碎、过筛后的发芽糙米样品两份，往其中一份样品中加入10mL标准储备液（200μg/mL），另一份作为对照样品，然后按照上述前处理方法进行处理并测定含量。分别对标准溶液、对照样品和加标样品进行重复测定（n=6），考察方法的回收率和精密度。实验结果表明，该方法具有较好的回收率和精密度，发芽糙米中γ-氨基丁酸的回收率大于95%，对照样品、加标样品峰面积的相对标准偏差（RSD%）分别为0.53和0.41。标准品色谱图和发芽糙米样品色谱图分别见图5和图6

3 小结

（1）本实验方法主要依据GB5413.26-2010第二法对样品进行提取和衍生，发芽糙米中γ-氨基丁酸测定已有文献报道，但是流动相的选择以及洗脱程序都较为复杂，本实验结合样品较为干净、待测组分单一、干扰物较少的特点，采用等度洗脱的方法，建立了一种快速、准确测定发芽糙米中γ-氨基丁酸含量的分析方法。（2）在实际检测过程中发现，精白米、茶叶和一些粮食酿造食品中也存在γ-氨基丁酸，但是与发芽糙米相比，含量较低，而且发芽糙米中γ-氨基丁酸的含量受到原料品种、产地以及工艺等因素的影响。

相关话题

dahua1981

第1楼2014/12/26

应助达人

支持原创作品

0

夏天的雪

第2楼2014/12/26

应助达人

谢谢，最后冲刺一下
dahua1981(dahua1981) 发表:支持原创作品

0

wsy18

第3楼2014/12/27

就是不知道那个奖励分最后如何处理啊？
夏天的雪(bingwang228) 发表:谢谢，最后冲刺一下

0

夏天的雪

第4楼2014/12/27

应助达人

是啊，规定迟迟不出
wsy18(wsy18) 发表:

就是不知道那个奖励分最后如何处理啊？

0

wsy18

第5楼2014/12/28

不知道卡在那里了。
夏天的雪(bingwang228) 发表:是啊，规定迟迟不出

0

夏天的雪

第6楼2014/12/29

应助达人

年底人手不够吧。。。。应该不差钱
wsy18(wsy18) 发表:不知道卡在那里了。

0

wsy18

第7楼2014/12/29

这么长时间了，大家心里不踏实。
夏天的雪(bingwang228) 发表:年底人手不够吧。。。。应该不差钱

0

夏天的雪

第8楼2014/12/29

应助达人

越到年底越不踏实
wsy18(wsy18) 发表:这么长时间了，大家心里不踏实。

0

kanhama

第9楼2014/12/29

跟牛磺酸一样的处理一样的条件就能出来

1

夏天的雪

第10楼2014/12/29

应助达人

是的，方法差不多
kanhama(kanhama) 发表:跟牛磺酸一样的处理一样的条件就能出来

0

查看更多

近期热榜

热门活动

猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐

品牌合作伙伴

丹纳赫苏州基地打工人的梦想

日立科学仪器

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

日本电子株式会社

赛默飞世尔科技

马尔文帕纳科

上海仪电科仪

梅特勒托利多

布鲁克核磁

举报帖子

点赞用户

好友列表

加载中...

正在为您切换请稍后...